维生素K2对去卵巢大鼠股骨干骨折愈合影响的实验研究

目的探讨维生素K2能否促进卵巢切除骨质疏松(OVX)大鼠骨折愈合。方法将30只雌性大鼠随机分为3组(每组10只):假手术组(SHAM)、去卵巢组(OVX)、OVX+维生素K2组。大鼠卵巢切除术后3个月,在右侧股骨干制作单侧股骨干骨折。然后在通过维生素K2治疗8周后处死动物,行X线片检测;对骨折的股骨进行生物力学检测并观察血清骨钙素(BGLAP)、碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)和雌二醇水平的变化。结果与OVX组相比,OVX+维生素K2组观察到更多骨痂组织形成和更好的骨愈合,并且BGLAP、ALP和TRACP水平降低,但是血液雌二醇水平没有观察到显著增加。与OVX组相比,OVX+维生素K2组显示出骨强度、最大负荷和弹性显著增加。结论维生素K2具有作为绝经后骨质疏松症骨折愈合新型替代治疗剂的潜力。     

褪黑素对H2O2诱导的成骨细胞氧化应激损伤的保护作用

摘要：目的 探讨褪黑素对H2O2诱导的成骨细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 取24 h内新生SD大鼠10只，采用组织块贴壁法提取原代成骨细胞并行差速贴壁提纯细胞。细胞传至第2代时行碱性磷酸酶及茜素红染色进行鉴定。将鉴定后的成骨细胞用不同浓度的H2O2作用不同时间并行CCK8试验检测细胞增殖情况。选择合适的浓度和时间建立氧化应激损伤模型，并用褪黑素及EX527进行干预。实验分为对照组、H2O2组、褪黑素组及EX527组。分别对四组细胞行碱性磷酸酶染色、茜素红染色，检测四组细胞活性氧、丙二醛、超氧化物歧化酶含量，同时用流式细胞仪检测四组细胞凋亡率，免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和成骨相关蛋白BMP2、RUNX2以及SIRT1和p66SHC的表达量。结果 经鉴定，成功提取原代成骨细胞。CCK8结果显示，400 μmol/L H2O2作用4 h成骨细胞活性降至52 %，适宜用于建立氧化应激损伤模型。H2O2作用后成骨细胞活性及矿化能力降低，ROS含量、MDA含量升高，SOD活性降低，细胞凋亡率升高，伴随有SIRT1、BMP2、RUNX2、Bcl2表达降低，p66SHC和Bax表达升高。褪黑素预处理后缓解了H2O2对成骨细胞的氧化应激损伤作用，部分恢复了成骨细胞的活性及矿化能力，SIRT1抑制剂EX527能够逆转褪黑素的上述作用。结论 褪黑素通过调节SIRT1/p66SHC通路来抑制H2O2诱导的成骨细胞的氧化应激损伤并促进成骨。     

丙戊酸钠对羰基氰化物间氯苯腙诱导的成骨细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的 探讨丙戊酸钠（sodium valproic acid,VPA）对羰基氰化物间氯苯腙（carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone,CCCP）诱导的成骨细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法 新生SD大鼠10只，取颅骨采用组织块法分离培养成骨细胞并传代，对第1代细胞行ALP和茜素红染色鉴定。取第3代成骨细胞以2～18μmol/L CCCP分别培养2～18 min，细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞成活率，并基于半抑制浓度原理选择合适浓度及培养时间用于制备成骨细胞氧化应激损伤模型；采用0～2.0 mmol/mL VPA培养12～72 h后，CCK-8检测细胞活性，选择合适浓度进行下一步处理。将第3代细胞随机分为4组，包括空白对照组（正常培养细胞）、CCCP组（参照选择的浓度及培养时间行CCCP处理）、VPA+CCCP组（参照选择的浓度及培养时间行VPA预处理+CCCP处理）、VPA+CCCP+ML385组（VPA预处理前用10μmol/L Nrf抑制剂ML385预处理2 h，其余处理方法同VPA+CC...