ω-3多不饱和脂肪酸对慢性移植物抗宿主病狼疮小鼠的免疫调控作用

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 poly unsaturated fatty acids,ω-3 PUFAs)对慢性移植物抗宿主病(chronic graft versus host disease,cGVH)狼疮模型小鼠的免疫调节功能影响。方法单次腹腔注射bm12小鼠淋巴细胞建立cGVH小鼠模型,造模当天分别给予90%ω-3 PUFAs和97%EPA灌胃治疗,持续14 d。通过流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中各免疫指标,ELISA检测小鼠血清中总IgG水平。结果与正常对照组相比,cGVH组明显下调Treg亚群,明显上调T_FH细胞、生发中心B细胞和浆细胞亚群;与模型对照组相比,90%ω-3和97%EPA均明显上调Treg亚群,并明显下调T_FH细胞、生发中心B细胞和浆细胞亚群;且97%EPA组小鼠血清中总IgG水平明显下降。结论在cGVH狼疮小鼠模型中,ω-3 PUFAs通过增加Treg细胞,减少T_FH细胞、生发中心B细胞和浆细胞,抑制IgG的分泌,从而发挥免疫抑制作用,且其免疫抑制作用可能与ω-3 PUFAs含量相关。     

胰腺靶向的类表皮生长因子生物合成与靶向性研究

目的 为提高表皮生长因子（EGF）的稳定性和靶向性,利用大肠杆菌作为宿主细胞,设计和生物合成具有胰腺靶向的EGF融合蛋白。方法 使用实验室已构建的含有胰腺靶向肽TRC(CHVLWSTRC)和重组聚多肽（Pastag200）修饰EGF基因的重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌进行EGF融合蛋白表达,采用亲和层析等技术纯化,WesternBlot鉴定。采用小鼠胚胎成纤维细胞（NIH/3T3）和胰岛内皮细胞（MS1）测试其生物学功能。使用KM小鼠探究EGF融合蛋白体内靶向效应。结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明重组载体构建成功。WesternBlot技术验证EGF融合蛋白特异性。2种EGF融合蛋白对NIH/3T3细胞都具有一定的促增殖的能力（P<0.01）,其中EGF-Pastag200-TRC表现出更高生物活性和结构稳定性,10 pg·mL-1 EGFPastag200-TRC对MS1细胞具有显著的促增殖效果。腹腔注射后,EGF-Pastag200-TRC在胰腺组织中的分布明显高于其他组织（P<0.01）,证明其对胰腺组织具有靶向性。结论 经具有胰腺靶向功能多肽与可增强稳定性聚多肽...     

自噬基因Atg5的缺失对精子成熟的影响

目的探讨自噬蛋白Atg5在维持附睾生理功能及精子的成熟过程中发挥的作用。方法通过基因敲除技术构建附睾头4-5段主细胞Atg5特异性敲除小鼠模型,根据基因型分为三组:对照组(野生型)、杂合敲除组以及纯合敲除组。8周龄时,做合笼实验并记录致孕率和产仔数,14周龄时通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化,并通过病理组织染色观察小鼠附睾组织的形态学变化,以及通过Western blot和免疫荧光技术检测三组模型鼠中ATG5蛋白表达和自噬通路变化情况。结果与对照组、杂合敲除组相比,纯合敲除组小鼠的附睾头4-5段主细胞Atg5特异性敲除后,自噬标记蛋白LC3-Ⅰ以及p62得到积累,自噬过程成功阻断;但纯合敲除组小鼠的附睾组织形态、精子活力、精子数目、产仔率和致孕率均无变化。结论在正常条件下(无外界刺激),Atg5特异性敲除导致附睾头4-5段的自噬过程阻断后,对小鼠附睾的生理功能和精子成熟过程没有影响。     

新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤U2OS细胞增殖的抑制作用

目的研究高选择性的新型磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91对骨肉瘤的抗癌作用。方法CCK-8法检测不同浓度(0、20、40、80、160、240、320、400、480μmol·L^-1)和不同干预时间(0、24、48、72、96 h)的ZL-n-91对U2OS细胞的增殖抑制作用;平板克隆形成实验检测ZL-n-91对U2OS细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡的影响;Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白CDK2、结果ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性(P<0.05),其半数抑制浓度IC₅₀为174.1μmol·L^-1;ZL-n-91明显抑制U2OS细胞的克隆形成能力(P<0.01);ZL-n-91影响U2OS细胞的周期进程,将U2OS细胞阻滞在G₀/G₁期,并明显促进细胞凋亡(P<0.01);Western blot结果显示ZL-n-91明显下调U2OS细胞中Bcl-2、CDK2、CDK4、CyclinD1、CyclinE1蛋白的表达(P<0.05)。结论新型选择性磷酸二酯酶4抑制剂ZL-n-91显著抑制骨肉瘤细胞U2OS的增殖,促进细胞的周期阻滞和凋亡,可能是治疗骨肉瘤的潜在药物。     

脱细胞真皮基质水凝胶的制备及生物学评价

背景：最近脱细胞真皮基质水凝胶因其可注射性和能填充不规则空间,在组织填充与修复中有着广阔的应用前景,而细胞相容性和生物相容性是组织修复的关键,探究脱细胞真皮基质水凝胶的相容性具有重要意义。目的：构建一种脱细胞真皮基质水凝胶,用于组织填充和修复。方法：制备可注射型脱细胞真皮基质水凝胶,扫描电镜下观察其微观形貌。将质量浓度8,10 g/L的脱细胞真皮基质水凝胶分别与骨髓间充质干细胞共培养,检测细胞增殖与细胞相容性。将蛋白质量浓度0.25,0.5 g/L的脱细胞真皮基质水凝胶分别注射至同一SD大鼠背部皮下不同部位,术后2,4周,观察水凝胶降解情况。将蛋白质量浓度1,1.5,2 g/L的脱细胞真皮基质水凝胶分别注射至同一SD大鼠背部皮下不同部位,术后8,16周,观察水凝胶降解情况,并进行组织学分析。结果与结论：(1)扫描电镜下可见,脱细胞真皮基质水凝胶呈现一种不规则随机走向的多孔纤维结构,孔径大小不一。(2)共培养1,3,5 d后,两种浓度的水凝胶对骨髓间充质干细胞的增殖无影响;共培养1,2,3 d后的Live/Dead染色显示,两种浓度的水凝胶对骨髓间充质干细胞的增殖无影响,但水凝胶上的细胞...     

莱菔子生熟异治的研究进展及质量标志物预测分析

莱菔子为重要的药食兼用的传统中药,是“生熟异治,生升熟降”的典型药物。该文以莱菔子生熟异治为主题,就近年来生、熟莱菔子的化学成分和药理作用等各方面的差异研究进行综述,较全面、系统地总结了莱菔子生熟异治的研究,并基于中药质量标志物(Q-marker)的原则,通过对生、熟莱菔子的化学成分生源途径、化学成分检测技术以及双向调节药效与化学成分关联的比较分析,发现莱菔素和萝卜硫苷可分别作为生、熟莱菔子质量标志物的候选化合物。以期为莱菔子的深入炮制研究、新药开发及其临床应用安全性和有效性的提高提供参考。     

TRPM8通道激活剂薄荷醇对肺动脉高压大鼠的治疗作用

目的 探讨瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin-8,TRPM8)通道激活剂薄荷醇(menthol)对野百合碱(monocrotaline, MCT)诱导的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)大鼠的治疗作用。方法 SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组：正常对照组、MCT组、MCT+menthol(1 mg·kg^-1·d^-1)治疗组、MCT+menthol(2 mg·kg^-1·d^-1)治疗组、MCT+menthol(5 mg·kg^-1·d^-1)治疗组、MCT+menthol(10 mg·kg^-1·d^-1)治疗组。腹腔注射MCT(50 mg·kg^-1)构建PAH大鼠模型。造模1周后治疗组分别给予不同剂量的menthol灌胃治疗,持续2周。通过血流动力学检测、肺组织病理学...     

减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨高表达甲硫氨酸酶减毒沙门菌SGN1对鼻咽癌的抑制作用及其机制研究。方法通过甲硫氨酸限制培养,检测对人鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2细胞增殖、迁移能力、克隆形成率以及细胞周期凋亡的影响;将SGN1与鼻咽癌细胞HNE-2、5-8F和CNE-2共培养,观察其增殖情况;构建5-8F人鼻咽癌细胞系皮下移植瘤模型,观察SGN1对体内鼻咽癌移植瘤的抑制作用;结果甲硫氨酸限制显著抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移能力、单克隆形成以及阻滞细胞周期G 2/M期并诱导细胞发生凋亡。SGN1能抑制鼻咽癌细胞的增殖并诱导凋亡,体内实验结果表明SGN1治疗后,小鼠皮下移植瘤生长受到抑制(P<0.05)。结论SGN1可促进鼻咽癌细胞发生凋亡且抑制肿瘤细胞迁移,为临床治疗提供一个新的治疗策略。     

新型磷酸二酯酶5抑制剂CPD1对肺动脉高压大鼠血管收缩的影响

目的探讨新型磷酸二酯酶5抑制剂CPD1对肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠肺动脉和主动脉收缩效应的影响。方法一次性腹腔注射野百合碱(monocrotaline,MCT,50 mg·kg^-1),制备PAH大鼠模型,造模7 d后给予CPD1(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃治疗,持续14 d。通过血管环张力检测技术观察CPD1对MCT致PAH大鼠血管收缩效应的作用。结果成功制备PAH大鼠模型;CPD1治疗可显著降低PAH大鼠右心室收缩压和右心质量指数,改善肺小动脉内膜增生情况,抑制苯肾上腺素(phenylephrine,Phen)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导的PAH大鼠肺动脉和主动脉的收缩效应,而对KCl诱导的血管收缩效应无影响。结论磷酸二酯酶5抑制剂CPD1干预能抑制PAH大鼠模型,其机制可能是CPD1抑制PAH大鼠非电压依赖性钙通道功能,引起血管收缩力降低、血管平滑肌增殖减弱和血管重塑减轻。     

甲硫氨酸限制对口腔癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响北大核心CSCD

目的探讨甲硫氨酸限制对人口腔鳞状癌细胞CAL-27的增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用计数法检测甲硫氨酸限制对口腔癌细胞CAL-27增殖的影响;平板克隆法检测CAL-27细胞克隆形成;流式细胞术结合PI单染法检测CAL-27细胞的周期;Annexin V-PE/7AAD双染法检测CAL-27细胞的凋亡;划痕与Transwell实验检测CAL-27细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax、细胞周期蛋白CDK2和CDK4以及迁移侵袭蛋白N-cadherin和E-cadherin的表达水平的变化。结果甲硫氨酸限制明显抑制口腔癌CAL-27细胞的增殖和克隆形成(P<0.01);甲硫氨酸限制将口腔癌细胞CAL-27阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.01);甲硫氨酸限制明显诱导口腔癌细胞CAL-27细胞发生凋亡,抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);Western blot结果表明甲硫氨酸限制明显下调口腔癌CAL-27细胞的凋亡蛋白Bcl-2的表达以及周期蛋白CDK2和CDK4的表达,并且明显下调迁移和侵袭蛋白N-cadherin以及上调E-cadherin的表达水平。结论口腔癌细胞CAL-27具有甲硫氨酸依赖性;通过甲硫氨酸限制明显抑制口腔癌细胞CAL-27细胞的增殖、迁移和侵袭,可为甲硫氨酸限制疗法应用于口腔癌的治疗提供理论依据。