补肾活血中药介导Wnt/β-catenin信号通路延缓椎间盘终板压力退变的机制研究

背景　椎间盘退行性变是导致脊柱退行性疾病发生的根本因素,终板是椎间盘力学传导与营养传输的主要结构,终板退变会加速椎间盘退变的发生,中药复方对延缓椎间盘退变具有独特的疗效,但具体作用机制尚不完全明确。目的　观察补肾活血中药对压力下离体兔脊柱运动节段椎体终板的影响,阐明其调控终板软骨细胞、延缓椎间盘退行性变的效应特点及作用机制。方法　2019年将40只健康新西兰兔采用随机数字表法分为对照组、中药组、中药抑制剂组、中药激动剂组,每组10只。采用具有自主知识产权的脊柱运动节段离体加载和培养装置进行造模,并通过HE染色病理形态学方法、免疫组化法、荧光定量聚合酶链式反应法（RT-PCR）和Western blot检测方法检测相关指标,包括蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Wnt-3α、β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。结果　（1）药物对椎间盘退变的影响：①HE染色显示,培养第7天时中药组软骨细胞分散程度、数目及软骨层排列均较对照组完整;培养第14天时对照组、中药组终板软骨组织退变程度均加重,对照组退变程度较中药组更加明显。②免疫组化法检测结果显示,中药组培养第1、3天时细胞外基质蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量均较对照组升高（P<0.05）;中药组及对照组培养第7、14天细胞外基质蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量均较培养前降低（P<0.05）;中药组细胞外基质蛋白多糖表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,而对照组Ⅱ型胶原表达量较中药组升高（P<0.05）。③RT-PCR检测结果显示,中药组及对照组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α和β-catenin mRNA表达水平均较培养前降低（P<0.05）,中药组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α、β-catenin mRNA表达水平均较对照组降低（P<0.05）。④Western blot检测结果显示,中药组及对照组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α、β-catenin蛋白表达水平与培养前比较,差异有统计学意义（P<0.05）;中药组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α蛋白表达水平较对照组升高（P<0.05）,但β-catenin蛋白表达水平较对照组降低（P<0.05）。（2）药物延缓椎间盘退变机制：①HE染色显示,中药激动剂组较中药抑制剂组培养第3天时终板软骨组织结构的完整性、软骨层排列较好。②免疫组化法检测结果显示,中药激动剂组、中药抑制剂组蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量分别与中药组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。③RT-PCR检测结果显示,中药激动剂组、中药抑制剂组第3天时Wnt-3α mRNA表达水平分别与中药组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;中药激动剂组β-catenin mRNA表达水平较中药组降低（P<0.05）,中药抑制剂组β-catenin mRNA表达水平较中药组升高（P<0.05）。④Western blot检测结果显示,中药激动剂组第3天时Wnt-3α和β-catenin蛋白表达水平以及中药抑制剂组Wnt-3α蛋白表达水平分别与中药组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;而中药抑制剂组β-catenin蛋白表达水平较中药组升高（P<0.05）。结论　补肾活血中药可以通过介导Wnt/β-catenin信号通路调控终板软骨细胞延缓椎间盘退变进程。     

中医药防治骨与关节退行性疾病的优势、关键问题及研究策略

以颈椎病、腰椎退行性疾病、膝骨关节炎为代表的骨与关节退行性疾病治疗以非手术治疗为主,是骨伤科临床治疗优势病种。中药、手法、针灸、传统功能锻炼等是中医常用的特色疗法,能够显著改善患者的临床症状、体征,预防疾病复发。目前,中医药防治骨与关节退行性疾病存在临床疗效评价欠规范、临床生物样本库应用不够、中医关键技术装备研发不足、多学科交叉协同创新匮乏等问题。针对上述问题,建议中医药防治该类疾病应遵循“证据为重、中西共识”的原则开展临床研究,规范中医诊疗信息采集并构建临床生物样本库,融合现代科学技术研发中医关键技术装备,整合优势资源实现协同攻关组织模式,完善中医药防治骨与关节退行性疾病的研究证据,进一步提升临床诊疗水平。     

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中神经营养因子表达的影响及其神经修复作用研究

背景　骨关节退行性改变压迫脊髓所致的脊髓型颈椎病（CSM）与脊髓急性损伤在病理特点及治疗策略方面存在差异,中医药治疗退行性CSM有着独特优势,临床应用广泛,但脊髓慢性压迫相关的治疗机制研究较少。目的　研究益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓（C5~7）神经生长因子（NGF）、神经营养因子3（NT3）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的mRNA表达水平影响及NGF的蛋白表达和分布情况,探讨益肾养髓方促进CSM神经功能修复的作用机制。方法　2019年1月选取SPF级雌性SD大鼠96只,其中72只大鼠采用吸水膨胀材料聚乙烯醇丙烯酰胺互穿网络水凝胶（由北京师范大学化学学院提供）压迫脊髓的方法进行造模,余24只大鼠假手术（假手术组）。造模成功的大鼠随机分为模型组（n=24）、中药高浓度组（n=16）、中药中浓度组（n=16）、中药低浓度组（n=16）。中药灌胃的各组按照对应浓度进行灌胃（大鼠灌胃给药剂量采用体表面积系数换算系数6.3计算,高浓度为16.74 g•kg-1•d-1、中浓度为8.37 g•kg-1•d-1、低浓度为4.19 g•kg-1•d-1）,药液浓缩后以1 ml/100 g体积灌胃给药,模型组及假手术组灌服等量（1 ml/100 g）0.9%氯化钠注射液,1次/d。分别于术后2、4、6、8、10周时,评价各组大鼠运动功能指数评分（BBB评分）;术后2、6、10周时,尼氏染色法观察大鼠脊髓前角正常神经元的尼氏体分布,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（RT-qPCR） 法检测大鼠脊髓营养因子NGF、NT3、GDNF的 mRNA表达水平、免疫组织化学分析NGF脊髓前角区蛋白表达及分布情况。结果　（1）术后2周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）;术后4周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）;术后6周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）,模型组BBB评分低于中药高浓度组（P<0.05）,中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组（P<0.05）;术后8周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）,模型组BBB评分低于中药高浓度组（P<0.05）,中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组（P<0.05）;术后10周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）,模型组BBB评分低于中药高、中浓度组（P<0.05）,中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组（P<0.05）。（2）术后2周,假手术组脊髓前角运动神经元形态正常,可见大量虎斑状尼氏体,丰富饱满;模型组脊髓前角神经元细小,形态为圆形,分布稀疏,胞内尼氏体溶解减少甚至消失;在术后6、10周时,中药高、中浓度组神经元虽有一定程度损伤,但细胞形态丰满、可见细胞内虎斑状尼氏体;中药低浓度组可见少量空泡,神经元细胞分布略稀疏,单个细胞内尼氏体数目比中药高、中浓度组含量少。术后2周,假手术组正常神经元数目多于模型组（P<0.05）。术后6周,假手术组正常神经元数目多于模型组、中药中浓度组和中药低浓度组（P<0.05）,模型组正常神经元数目少于中药高浓度组（P<0.05）,中药高浓度组正常神经元数目多于中药低浓度组（P<0.05）。术后10周,假手术组正常神经元数目多于模型组、中药低浓度组（P<0.05）,模型组正常神经元数目少于中药高浓度组（P<0.05）。（3）术后6周,中药高浓度组NGF mRNA表达水平高于假手术组、模型组和中药低浓度组（P<0.05）,中药高浓度组NT3 mRNA表达水平高于模型组（P<0.05）,中药高浓度组GDNF mRNA表达水平高于假手术组、模型组和中药中、低浓度组（P<0.05）。（4）假手术组和模型组中脊髓前角的神经元细胞NGF染色程度较浅,分布稀疏,中药高、中浓度组大鼠的脊髓前角神经元NGF染色较明显,细胞形态完整。术后6周,中药高浓度组NGF平均积分光密度值高于假手术组和模型组（P<0.05）。结论　益肾养髓方可能通过增加脊髓中NGF、NT3、GDNF的mRNA表达水平,改善CSM大鼠的四肢运动功能,保护脊髓前角中正常运动神经元,从而达到促进神经修复的效果。     

骨与关节退行性疾病中医临床研究质量控制

在骨与关节退行性疾病中医临床研究中,访视时点多与随访时间长、技能型操作技术的统一实施、主观测量指标评价的客观化、影像学指标测量的精确性是质量控制面临的主要挑战。针对实际问题,成立专家指导与质量控制小组、建立操作技术培训与考核程序、形成主观数据采集标准、规范影像学数据测量流程是质量控制环节的重要保障。在实施与效果评价方面,结合实践经验做好二级监查是保证研究质量最有效的方法。制定针对不同病种个性化的质量控制方案,探索并形成一套完整的、符合中医骨伤科的多中心临床研究质量控制模式,以期为今后中医骨伤科临床科研国际化、科学化管理提供借鉴。     

极限旋转体位对上颈椎椎动脉管腔的影响

目的　使用CT血管成像技术研究极限旋转体位对上颈椎椎动脉管腔的影响。 方法　取8具新鲜成人尸体上颈椎（C0~4）标本,制作成椎动脉离体模型,颅骨端模块固定3 kg模拟颈椎立位载荷,椎动脉注入造影剂,在实验台上实现立位状态下中立位、多旋转极限体位并使用万向外固定架固定,进行CT薄层扫描, 采集C1节段、C1/C2间隙节段、C2椎体上1/3段（寰枢椎侧块关节外侧）、C2椎体下缘、C3椎体节段等5个层面的椎动脉横截面积。比较组间差异,探讨失神经体液调节下体位因素对椎动脉空间形态作用机制。 结果　颈椎旋转极限及后伸旋转极限体位会引起同侧椎动脉截面积减少（P＜0.05）,而对侧椎动脉截面积无明显改变（P＞0.05）,并且横截面积减少部位集中出现在C2椎体上1/3处。 结论　(1)上颈椎离体椎动脉模型及试验方法能实现极限旋转体位下椎动脉管腔CTA的测量; (2)在失神经体液调节下,颈椎极限旋转及极限后伸旋转体位能引起同侧椎动脉狭窄,狭窄部位主要集中在寰枢椎侧块关节外侧。     

太极拳锻炼防治骨质疏松症效果的Meta 分析

目的系统评价太极拳预防和治疗骨质疏松症的有效性及安全性。方法计算机检索所有关于太极拳治疗和预防骨质疏松症的国内外随机对照试验。由2名研究人员独立进行文献筛选、数据提取和纳入文献评价,用Cochrane协作网提供的偏倚风险评估工具进行质量评价,使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入18篇文献,涉及1 664例研究。分析结果显示:在改善腰椎和股骨颈骨密度方面,进行太极拳锻炼干预优于无太极拳干预[SMD=0.16, 95%CI(0.01,0.30),P=0.03]、[SMD=0.18, 95%CI(0,0.36),P=0.05];但尚不能确定太极拳是否能改善股骨大转子和Ward三角的骨密度[SMD=0.30, 95%CI(-0.23,0.83),P=0.27]、[SMD=0.25, 95%CI(-0.03,0.53,P=0.07];在临床有效率方面,太极拳锻炼优于未行太极拳锻炼[RR=1.53, 95%CI(1.28,1.83),P0.0001];对于骨代谢标志物血钙的影响,太极拳锻炼是有效的[SMD=-0.32, 95%CI(-0.60,-0.04),P=0.03]。但血磷和碱性磷酸酶方面,尚不能确定太极拳的有效性[SMD=0.10, 95%CI(-0.18,0.37),P=0.49]、[SMD=0.04, 95%CI(-0.24,0.32),P=0.78];在安全性方面,太极拳锻炼具有很好的安全性。结论太极拳锻炼可以有效地改善腰椎和股骨颈的骨密度,提高临床有效率,降低血钙,安全性高,但仍需大量高质量的研究以提供更充足的证据。