125Ⅰ标记的FLt4多抗导向定位淋巴结的可行性分析及其代谢动力学研究

探讨125Ⅰ标记的Flt4多抗(125Ⅰ-Flt4 PcAb)导向定位淋巴结的可行性及其在体内的代谢动力学特点,为应用Flt4 PcAb进行前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)的检测提供实验依据.应用氯胺T法对Flt4 PcAb进行125Ⅰ标记;125Ⅰ-Flt4 PcAb经大鼠足背皮下注射,研究125Ⅰ-Flt4 PcAb在淋巴结内浓集及其在体内的代谢动力学特点.结果表明125Ⅰ-Fit4 PcAb经皮下注射后,在胭窝淋巴结的ID(%)/mg值最高,血液次之,其它各组织器官均很小;胭窝淋巴结的ID(%)/mg值在注射后0.5h达最高,血液32h达最高;其在体内的代谢可进行二室动力学模型拟合,吸收相半衰期(T1/2Ka)为0.64±0.1d,清除相半衰期(T1/2β)为3.5±0.5d.这提示125Ⅰ-Flt4PcAb能够对淋巴结进行导向定位;它在体内的代谢符合二室动力学模型,清除相半衰期较长.     

6-[4-[4-(取代苯乙酮基)哌嗪基]苯基]哒嗪酮类化合物的合成及抑制血小板聚集作用

目的：设计合成一类６－（取代苯基）－４,５－二氢－３－（２Ｈ）哒嗪酮类化合物,以期发现作用更强的血小板聚集抑制剂。方法：以乙酰苯胺为原料,经酰化反应、傅－克反应、水解反应及水合肼环合反应、溴化反应、烷基化反应等一系列反应合成目标化合物,并参考Ｂｏｒｎ方法进行体外药理实验。结果：共合成６－「４－（取代哌嗪基）苯基」－４,５－二氢－３（２Ｈ）哒嗪酮类化合物１１个,均属首次报道,并通过元素分析、＾１ＨＮＭＲ确证结构。初步的体外药理实验表明：大部分目标化合物都有不同程度的抑制ＡＤＰ诱导的新西兰大白兔血小板聚集的作用。结论：首次合成了１１个６「４－「４－（取代苯乙酮基）哌嗪基」苯基」－４,５－二氢－３（２Ｈ）哒嗪酮类化合物,其中化合物（４）抑制抑制血小板聚集作用的活性最强,与先导化合物ＣＣＩ１７８１０相当,化合物（３）,     

反义STAT3对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用

背景与目的：研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达。STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生。本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究。方法：利用Western blot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察．用Annexin V／PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡。结果：所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48h,在0到200nmol／L范围内,反义核酸浓度越高。对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖（P〈0．01）。寡核苷酸浓度超过250nmol／L时．正义对照也表现出一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;转染后不同时间内检测,结果表明转染后24h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率：对照组早期凋亡率为5．52％．反义400、800、2000nmol／L组早期凋亡率分别为8．22％、9．99％．16．97％,正义对照400、800、2000nmol／L组早期凋亡率分别为5．87％、5．36％、13．31％。统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡（P〈0．01）,正义低浓度转染组（400、800nmol／L组）与对照组无明显差别（P〉0．05）,而对照组与正义2000nmol／L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异（P〈0．01）。结论：B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高;反义转染后B16细胞中STAT3蛋白的表达和磷酸化水平降低．细胞增殖受到明显抑制。细胞的凋亡增加．表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位。     

PTEN在电离辐射诱导旁效应细胞中的表达变化

目的:研究PTEN基因在旁效应细胞中的表达变化。方法:采用未照射细胞与直接照射细胞按11共同培养,以及将直接照射细胞培养液离心加入未照射细胞中培养形成2种旁效应细胞模型,对比PTEN mRNA及蛋白表达在2种旁效应细胞、直接照射细胞、未照射细胞中的变化。结果:直接照射的PTEN 蛋白表达与照射剂量有关,照射剂量越大其下调越为明显;PTEN蛋白表达下调程度与细胞的处理方式有关,以受照细胞培养液培养的旁效应细胞表达下调最为显著,且2种旁效应细胞中PTEN蛋白的表达下调程度均高于直接受照细胞(P<0.01)。结论:PTEN蛋白表达与低剂量电离辐射生物学效应及电离辐射旁效应的发生发展密切相关。     

FHIT基因研究进展

FHIT基因是定位地染色体3p14.2区域的侯选肿瘤抑制作用，在许多肿瘤，特别是环境致癌物引起的上皮肿瘤中经常发生改变，在辐射引起的癌症中也有改变，参与细胞周期和细胞凋亡的调控，但其作用的机理尚未完全阐明。     

脆性组氨酸三联体基因研究进展

恶性转化是复杂的、渐变的过程,涉及许多遗传改变,包括抑癌基因失活、癌基因激活和其他调节基因功能改变。脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是一个新发现的抑癌基因,过去近10 年的研究表明其和许多肿瘤有密切的关系。本文综述了近几年分子生物学有关FHIT基因研究的最新进展,并侧重描述了其和辐射致癌的关系。     

siRNA抑制STAT3基因对HepG2细胞辐射敏感性的影响

目的 研究瞬时转染的siRNA抑制STAT3基因表达对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响。方法 以人肝癌HepG2细胞作为研究对象，脂质体包裹化学合成的siRNA进行转染。采用实时RT-PCR和Westernblotting法分别从mRNA水平和蛋白水平检测STAT3基因的表达及编码蛋白磷酸化活化的改变，用CCK-8法和Hoechst33258DNA染色法检测辐射敏感性的变化。结果STAT3特异性的siRNA转染后HepG2细胞中STAT3基因mRNA拷贝数、STAT3蛋白表达和磷酸化水平均明显降低。mRNA水平的抑制效率可达70％。siRNA转染联合60Coγ射线照射后HepG2细胞增殖活力显著低于对照组（P〈0．05）。结论 针对人STAT3基因的siRNA能够抑制HepG2细胞STAT3基因的表达，降低STAT3蛋白活化水平，进而产生辐射增敏作用。     

125Ⅰ标记的血管内皮生长因子受体3多抗在大鼠体内的分布研究

目的研究血管内皮生长因子受体3多抗（Flt4 PcAb）在大鼠体内的分布,为进一步应用Flt4 PcAb进行前哨淋巴结（SLN）的特异性定位奠定基础。方法应用氯胺T法对Flt4 PcAb行125I标记;将125I-Flt4 PcAb经大鼠足背皮下注射后不同时间分批处死大鼠,取血液、腋窝淋巴结及主要脏器测量其放射性计数,经衰变校正后计算每克组织的百分注射剂量率（%ID/g）,观察标记物的生物学分布。结果125I-Flt4 PcAb的标记率达46.5%,放射性比活度为1.72×10^12Bq/g,放射性化学纯度达96.7%;大鼠体内分布实验显示：125I-Flt4 PcAb主要分布于腋窝淋巴结及血液中,其余脏器较低;注射后16h内腋窝淋巴结与血液单位质量的放射性比值均大于2.5。结论①应用氯胺T法可以成功标记Flt4 PcAb;②皮下注射后Flt4 PcAb的体内分布表现为淋巴结浓集;③本实验为进一步应用Flt4 PcAb进行SLN的特异性定位奠定了基础。     

同源重组与肿瘤发生

同源重组是真核细胞修复DNA双链断裂损伤的一种重要途径,同源重组相关基因的突变导致基因组不稳定,增加肿瘤的发生率.近年来对同源重组的分子机制、参与的基因及其功能有了较为全面的认识,发现同源重组修复在肿瘤发生中发挥着重要作用.