PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组载体的构建和鉴定

目的 构建PML-RARα基因重组表达质粒,为发展PML-RARα基因疫苗提供实验依据. 方法利用RT-PCR方法从急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞中扩增出465 bp 的位于PML-RARα融合基因的框内结构的片段,克隆至真核表达载体pIRES和分泌载体pSecTag后,经酶切和序列分析鉴定重组质粒的构建情况.结果 经酶切鉴定和序列测定表明,PML-RARα目的基因已正确插入真核表达载体中,构成了目的重组载体. 结论成功构建了PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组真核表达质粒,可进一步用于PML-RARα基因疫苗的实验研究.     

SR-AⅡ和CD36的表达水平与AGEs及糖尿病并发症的相关性研究

目的：分析糖尿病患者白细胞中清道夫受体SR-AⅡ和CD36的表达水平与血浆晚期糖基化终产物（AGEs）浓度以及糖尿病并发症之间的相关性。方法：收集具有合并症的糖尿病患者抗凝血78例，用荧光分光光度法测定血浆AGEs浓度。用Trizol法提取白细胞RNA，再以RT-PCR法测定SR-AⅡ和CD36的相对表达水平。结果： 在测定的糖尿病各合并症中，SR-AⅡ在糖尿病性肾病中表达水平最高，在脂肪肝患者中最低；CD36在脂肪肝患者中最高，在冠心病患者中最低。在高血压患者中这2种受体的表达水平均比较高，但在白内障患者中2种受体的表达相对较低。血浆AGEs浓度与白细胞中CD36表达水平呈负相关（r=-0.89, P<0.01），但与SR-AⅡ的表达为正相关（r=0.82,P<0.05）。结论： 血浆高浓度AGEs刺激白细胞中SR-AⅡ表达增加，糖尿病性肾病和脂肪肝分别与SR-AⅡ、CD36的表达增加有密切关系，部分糖尿病患者CD36的表达较低可能是导致他们血浆AGEs水平过高的原因之一。     

载脂蛋白B—100受体结合区和FDB研究进展

在冠心病众多的致病因素中，遗传缺陷是目前最为人们重视的病因之一。不论是ＬＤＬ受体还是其配体ＡＰＯＢ－１００发生遗传变异都将导致受体－配体之间结合障碍，使血浆胆固醇水平升高。家族性高胆固醇血症（Ｆａｍｉｌｉａｌｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＦＨ）是由ＬＤＬ受体缺陷引起的，它大大增加了冠心病、心梗的发病率，但有资料显示６０岁以下发生的冠心病中只有５％是由于ＦＨ导致的［２、３］。于是人们把注意力放在寻找其他导致高血浆胆固醇和冠心病的可能遗传变异上。１９８９年，Ｍｉｌｎｅ等采用单克隆抗体对Ａ…     

胸腺输出及sjTRECs与移植后T细胞免疫重建

异基因造血干细胞移值后受者免疫功能的重建与T细胞功能重建关系密切,信号结合T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）反映胸腺输出功能,与T细胞免疫重建相关。分析移植的预处理方案及免疫抑制制处理对sjTRECs的影响,有助于探讨移植后免疫重建的新策略。     

B细胞非霍奇金淋巴瘤患者TCR ζ基因的表达特点

 目的 分析B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者外周血中T细胞信号转导分子TCRζ基因的表达特点。 方法 采用SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR和相对定量分析法检测17例B-NHL患者外周血单个核细胞 （PBMCs）中TCR ζ 基因的表达情况,以β2微球蛋白基因（β2M）作为内参, 采用相对定量 公式：2－△ Ct ×100%,计算TCR ζ基因的相对mRNA 表达量,17例健康成人作为对照。 结果 全部B-NHL样本均全部表达TCR ζ 基因,但其表达水平显著低于对照组（ P =0.000）,健康 人PBMCs的TCR ζ 基因mRNA的表达水平为B-NHL患者的3.26倍。B-NHL患者TCR ζ基因表达水平 与患者的年龄无相关性。 结论 B-NHL患者中TCR ζ基因的mRNA表达水平明显下调,可能是其细胞免疫功能缺陷的原因之一。     

生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用

目的探讨生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用。方法WST法、台盼蓝拒染法、克隆形成抑制实验检测聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,检测PEI-ASODN联合5-FU对肝癌移植瘤小鼠瘤重、瘤体积的改变,对肝癌腹水瘤小鼠平均存活天数的影响。结果不同浓度的PEI-ASODN作用于SMMC-7721细胞48h后,0.75μmol/L的PEI-ASODN分别作用细胞24、48、72和96h后,均能对细胞产生明显的抑制作用;PEI-ASODN对细胞的克隆形成也有显著的抑制作用,与细胞对照组相比有显著的统计学差异(P<0.01)。肝癌腋下移植瘤小鼠,各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以联合用药组(5-FU+PEI-ASODN)最明显,瘤重抑瘤率高达56.91%,瘤体积抑制率高达57.83%;肝癌腹水瘤小鼠模型,联合用药组生命延长率为94.09%,与生理盐水组相比,具有显著性差异(P<0.01)。结论聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)可显著抑制肝癌细胞生长,并可提高荷肝癌小鼠对5-FU的敏感...     

肾虚血瘀证子宫内膜异位症不孕症动物模型的建立与评价

目的:研制肾虚血瘀证子宫内膜异位症不孕症动物模型以供子宫内膜异位中医药研究使用.方法:模拟女性"肾虚血瘀"的中医病因病机,与传统的自体移植子宫内膜异位症动物模型相结合,建立病证结合的子宫内膜异位症动物模型.用中医实验动物证候学指标与理化检验指标共同评价该模型的临床代表性.并与单纯的自体移植子宫内膜异位症动物模型相比较.结果:病证结合子宫内膜异位症大鼠既能反映肾虚血瘀的中医证候基本特点又与现代医学子宫内膜异位症相关不孕症疾病的特点相一致.结论:病证结合子宫内膜异位症大鼠可代表子宫内膜异位症不孕患者进行妊娠功能方面的中医药研究.     

溶菌酶在医药中的应用及其研究进展

溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞质聚糖水解酶,它能专一性的作用于目的微生物的细胞壁而不能专一性的作用于其它物质.是一种无毒,无害安全性很高的盐基水解蛋白酶.被广泛应用于食品,饲料,医药等行业.本文重点介绍了溶菌酶在医药中的应用,并展望了其发展及应用前景.     

长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性及其限制性

背景：间充质干细胞具有多向分化能力、免疫调节能力,并可在体外进行长期培养扩增,但其体外长期培养的生物学活性变化特点及其限制性仍不十分清晰。目的：观察体外长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性变化特点及其限制性。方法：无菌收集剖宫产新生儿脐带,经胶原酶Ⅱ消化后,用黏附生长选择法获取人脐带间充质干细胞,胰酶消化传代;取第3代细胞进行流式分析,脂肪和成骨诱导鉴定;收集不同代的细胞分别用MTT法、流式细胞仪和爬片分析法检测细胞增殖活性、细胞周期、凋亡率及黏附能力。结果与结论：人脐带间充质干细胞的细胞表型CD105＋/CD29＋/CD44＋/CD31-/CD34-/CD45-/HLADR-,可诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞;传代培养第3～23代细胞形态无明显变化,生长曲线基本一致,第28代后细胞增长缓慢;流式分析发现第33代细胞较第3代G0/G1减少17.9%、S＋G2/M增加103.4%、细胞凋亡率增加316.7%,差异均有显著性意义（P〈0.01）,第3～18代细胞间G0/G1、S＋G2/M、细胞凋亡率和黏附细胞数差异均无显著性意义（P〉0.05）。提示在体外长期培养环境中,随着传代次数的递增,人脐带间充质干细胞的增殖及黏附能力下降,细胞凋亡率增加,总的生物活性呈逐渐下降趋势,其最佳生物活性期出现在培养第3～18代之间。     

青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及联合化疗药物的抗肝癌效应

目的: 研究青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用,并检测其是否影响HepG2细胞对化疗药物的敏感性。方法: 采用CCK-8法观察不同浓度青蒿琥酯对HepG2细胞生长增殖的影响;克隆形成实验检测青蒿琥酯对HepG2细胞克隆形成的影响;Hoechst 33258染色观察青蒿琥酯作用HepG2细胞后细胞形态的变化;PI单染流式细胞术检测青蒿琥酯对HepG2细胞周期以及亚二倍体率的影响;Annexin V-PI双染测定青蒿琥酯对HepG2细胞凋亡的影响;CCK-8法检测青蒿琥酯对HepG2细胞化疗药物敏感性的影响。结果: (1)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,能有效抑制其增殖,随着浓度的升高,增殖抑制率越高,IC₅₀值为19.2 μmol/L。(2)青蒿琥酯作用HepG2细胞7 d后,能有效抑制HepG2细胞形成的克隆数。(3)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,Hoechst 33258染色可见实验组细胞胞核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。(4)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,PI单染流式细胞术检测细胞周期发现实验组细胞明显阻滞于G₂期。(5)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,PI单染实验检测实验组出现明显的亚二倍体凋亡峰;Annexin V-PI 双染实验检测实验组细胞出现明显的早期凋亡细胞群。(6)青蒿琥酯分别联合化疗药物5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星作用于HepG2细胞48 h后,能明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为3.33、2.02和1.71。结论: (1)青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡。(2)青蒿琥酯能提高人肝癌HepG2细胞对5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星的敏感性。