白血病抑制因子反义寡核苷酸对髓母细胞体外生长的抑制作用

为进一步认识白血病抑制因子（LIF）对人髓母细胞瘤生长的生物学作用，我们使用LIF反义寡核苷酸，在髓母细胞内特异性阻断LIF基因表达并观察它对靶细胞的生物学效应。结果发现，被处理细胞的LIF表达降低至RT／PCR检出的阈值之下，抗LIF的免疫组织化学染色亦呈阴性，同时，这些细胞的生长速度明显减缓。相反，用与反义寡核苷酸互补的正义序列处理的细胞无论在基因表达／产生，还是在生长速度方面，均和正常培养细胞的细胞相似，本研究从而提示了一条以LIF为对象的髓母细胞瘤以及其它LIF生长依赖性肿瘤的基因和免疫治疗途径。     

Pax——一个发育相关的重要基因家族

Pax基因是进化上保守的一个基因家族,它们均编码128个氨基酸的保守成对结构域。Pax蛋白作为重要的转录调控因子,在胚胎发育过程中对组织、器官的特化起重要的调控作用。Pax基因发生突变会导致几种遗传综合症。另外,Pax基因的表达异常与一些癌变也有一定关系。     

建立只标记加成碱基的^32P后标记法以用于检测致癌物—DNA加成物

本文报道建立~(32)P后标记方法(~(32)P-Postlabeling Method)以用于检测致癌物-DNA加成物。其基本原理:用核酸酶P1(Nu.P1)完全消化DNA,释出5′单磷酸脱氧核苷(pN),而加成的碱基(Xi),则释出5′磷酸二脱氧核苷(pXipN);经前列腺酸性磷酸酶(PAP)作用后,分别生成N和XipN,然后经T_4多聚核苷酸激酶(PNK)作用,将[γ-~(32)P]ATP的~(32)P转移XipN的5′末端上,生成标记*pXipN而N不被标记。经聚乙烯亚胺(PEI)纤维素薄层纯化、分离和放射自显影,则可确定已加成的碱基,若DNA量已知,则可进行定量分析。在人羊膜上皮细胞FL中,适量苯并(a)芘[B(a)P]处理24b后,可分离到4个加成物斑块,其总相对标记量(Relative Adduct Labeling,RAL)有剂量依赖性关系。     

细胞色素P450调节剂对DNA加合物形成的影响

人羊膜上皮细胞ＦＬ系分别接触ａ－萘黄酮（０．６ｍｍｏｌ·Ｌ￣（－１））β－萘黄酮（２０ｐｍｏｌ·Ｌ￣（－１））２４ｈ后，再用苯并（ａ）芘［Ｂ（ａ）Ｐ，１０ｕｍｏｌ·Ｌ￣（－１）］处理２４ｈ，用３２Ｐ后标记技术测定以Ｂ（ａ）－ＤＮＡ加合物。结果发现，阳性对照组，ａ－萘黄酮预处理组及β－萘黄酮预处理组加合物的量分别为（加合物个数／１０’个核苷酸）：４．７±０．２（１００％），１．８±０．９（３８．３％），１６．０±２．２（３４０．１％）．该实验结果直接显示了纳胞色素Ｐ４５０调节剂对肿瘤发生影响的作用水平。亦为药物对致癌物代谢影响的研究提供了一种方法．     

介绍一种大鼠肝细胞的分离和培养方法

介绍分离、纯化大鼠肝细胞(用胶元酶二步灌流和PercoⅡ不连续密度离心)及分离后的培养。此方法可靠易行，可制备出质量合格的肝细胞(实质细胞)。讨论了保证分离和纯化成功的一些关键步骤、条件和原理．提出分离肝细胞应首选胶元酶Ⅳ，PereoⅡ的渗透压和pH也是影响肝细胞的漂浮密度和存活能力的因素。     

深圳地区手足病肠道病毒5′端非编码区部分基因克隆和序列分析

目的：分析深圳地区手足口病病人肠道病毒（EV）5′端非编码区（5′UTR）部分基因序列，了解本地区手足口病病人EV感染的基因型。方法：设计特异性引物，建立检测EV的RT－PCR方法，对临床疑诊为EV感染的病人的粪便和／或咽拭子、脑脊液标本进行检测，并对5例典型手足口病病人中分离株的PCR阳性扩增产物进行克隆和序列测定。结果：分离出的5株EV5′UTR基因的核苷酸同源性为85.5%－99.3%，与EV71 BrCr原株、CVA9、CVA16和CVB同源性为86.3% -93.3%。结论：深圳地区手足口病EV5′UTR与几种常见的肠道病毒血清型同源性均较高，提示可能存在多种基因型的肠道病毒感染。     

性激素受体及相关生长因子在前列腺基质细胞中的表达

目的：探讨前列腺基质增生的发病机制与性激素以及相关生长因子的关系。方法：应用RT－PCR的方法研究了在人前列腺不同细胞类型中Smoothelin的表达，研究了雄、雌激素受体及相关生长因子在前列腺基质细胞中的表达，以及它们在前列腺基质细胞分化中表达的变化。结果：Smoothelin是前列腺平滑肌细胞特异性的标记蛋白；雄激素受体（AR）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)、角化细胞生长因子（KGF）主要在前列腺成纤维细胞中表达，而雌激素受体（ER）、转移生长因子β1（TGFβ1）主要在平滑肌细胞中表达。结论：前列腺基质增生与雌激素受体和转移生长因子β1的过度表达密切相关。     

人胎盘基因表达谱芯片的初步研究

目的 制备人胎盘基因表达谱芯片,前用于基因差异表达分析。方法用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探针打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组三氧化二砷处理的K562细胞总RNA,纯化mRNA后反转录成cDNA。再以限制性显示技术进行荧光标记,将两组荧光标记的样品混合后与芯片进行杂交。杂交后清洗芯片,干燥后对芯片进行扫描,分析杂交结果。结果 建立了较可靠的制备与检测基基表达芯片的方法,并筛选出45个差异表达基因片段。结论 制备的人胎盘基因表达谱芯片可有效地应用于基因的差异表达分析。     

吡那地尔对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 :探讨ATP敏感性K+ 通道 (KATP)开放剂吡那地尔 (pinacidil,Pin)对缺氧缺糖再复氧损伤大鼠大脑皮层神经细胞的保护作用。方法 :体外培养大鼠大脑皮层神经细胞 ,细胞培养至 10d ,建立神经细胞缺氧缺糖损伤模型 ,观察Pin及KATP阻断剂格列苯脲对缺氧缺糖不同时间 ,再复氧 2 4h后细胞死亡率、丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活力的影响。结果 :缺氧缺糖、再复氧后大鼠的神经细胞死亡率均显著升高、MDA生成增多、SOD的活力下降 ,Pin干预后 ,细胞死亡率下降、MDA生成减少、SOD的活力升高 ;格列苯脲能拮抗Pin这种保护作用。结论 :Pin对缺氧缺糖损伤神经细胞具有保护作用 ,并与拮抗氧自由基有关     

氧化型胆固醇下调血管平滑肌细胞金属蛋白酶组织抑制剂基因表达

目的：研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法：离体培养免主动脉血管平滑肌细胞，分别用胆固醇、Triol与25-OH负载细胞，狭缝杂交测定TIMP-1mRNA表达，细胞免疫化学测定MMP-9与ITMP-1蛋白表达。结果：Triol与25-OH(1mg/L,24h）抑制TIMP-1 mRNA及蛋白表达，对MMP-9蛋白表达无影响。结论：氧化型胆固醇可以下调血管平滑肌细胞TIMP-1基因表达。