双光子成像技术在大鼠放射性皮肤损伤修复评估中的应用

目的 采用双光子激发荧光（TPEF）成像技术,无创、活体评估X射线引起大鼠皮肤放射性损伤发展和修复过程。方法 24只SD大鼠采用随机数表法分为4组,健康对照组、25 Gy组、35 Gy组和45 Gy组,每组6只。照射后不同时间评估皮肤损伤程度,通过TPEF成像技术在体检测表皮细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）[NAD（P）H]和真皮胶原纤维荧光信号的病理改变。结果 第10天,各辐射组大鼠出现红斑和脱皮;第15~20天,随着辐射剂量地增加,辐射组出现递进性的渗出、水肿和溃疡;第25天,25 Gy组开始修复,其他组仍有渗出和溃疡。第10天,25、35和45 Gy组表皮细胞NAD（P）H荧光信号减少,乳头层和网状层荧光信号值减少,与健康对照组比较,差异有统计学意义（t=24.145、28.303、26.989、6.654、7.510、7.997,P<0.05）;第30天,25 Gy组表皮细胞NAD（P）H和真皮胶原纤维开始修复,颗粒层、棘层和基底层细胞出现荧光信号,35、45 Gy组未出现NAD（P）H荧光信号;25 Gy组乳头层和网状层荧光信号均逐渐增高,但仍低于健康对照组（t=115.133、17.431,P<0.05）,而45 Gy组未出现荧光信号。结论 TPEF技术可以无创、活体检测X射线照射后表皮细胞和真皮胶原纤维信号损伤和修复的病理变化。     

人HNF4α基因真核表达载体的构建与鉴定*

目的体外构建人肝细胞核因子4α（HNF4α）基因真核表达载体,并初步鉴定其在HepG2细胞的表达。方法从肝癌手术患者获得肝组织,分离得到肝组织总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增HNF4α基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+）真核表达载体,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确。提取质粒,转染HepG2细胞,48 h后裂解细胞,应用抗HNF4α行Western blot检测目的蛋白。结果从临床肝癌患者肝组织中成功分离得到总RNA,扩增出HNF4α基因,经筛选、酶切鉴定和测序,确认pcDNA3.1-4α真核表达载体构建成功。在转染HepG2细胞48 h后,检测显示53 kDa位置有明显融合蛋白条带。结论我们成功构建了HNF4α基因真核表达载体,体外转染HepG2细胞成功表达HNF4α蛋白,为后续研究奠定了基础。