高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株抑制性消减杂交文库的构建

应用抑制性消减杂交（suppression subtracted hybridization,SSH）技术,分别构建2个不同淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株的SSH文库,高转移文库以高转移能力细胞株Hca-F为检测子（tester）,同源的低转移能力细胞株Hca-P为驱赶子（driver）;低转移文库则相反.随机筛选2个文库阳性克隆进行测序,并在GenBank数据库中进行同源性比较.成功构建高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株SSH文库,高、低转移文库中分别包含995个及967个阳性克隆;其中,95%的阳性克隆含有300bp～1 000bp不等的插入片段;随机测序显示,文库中含有已知的基因、ESTs及与任何序列无同源性的新基因片段.     

甲状腺乳头状癌的诊断及转移相关的免疫组化研究

目的：评价CK19、p53和p63在鉴别甲状腺良恶性（乳头状癌）病变中的临床应用价值;了解p53、p63、cerbB-2和nm23与甲状腺乳头状癌转移的关系。方法：用免疫组织化学方法,检测57例甲状腺乳头状癌和57例甲状腺良性病变中CK19、p53和p63的表达及甲状腺乳头状癌中cerbB-2和nm23的表达。结果：CK19在甲状腺乳头状癌中的阳性率为91.2%,在良性病变中的阳性率1.76%;p53在甲状腺乳头状癌中的阳性率89.5%,在良性病变中的阳性率17.5%;p63在甲状腺乳头状癌中的阳性率22.8%,在良性病变中的阳性率12.3%。甲状腺乳头状癌中,cerbB-2阳性率为84.2%,nm23阳性率为91.2%,cerbB-2和nm23的表达强度呈正相关。p53、p63、cerbB-2和nm23在转移组和非转移组表达的阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：CK19和p53在甲状腺乳头状癌中表达率极高,是甲状腺乳头状癌病理诊断中非常有价值的辅助诊断指标;p63对鉴别甲状腺良恶性病变无明确意义;在甲状腺乳头状癌中cerbB-2和nm23的表达强度呈正相关;p53,p63,cerbB-2,nm23与甲状腺乳头状癌的转移无明显相关。     

肺炎颗粒的鉴别和含量测定

目的：建立肺炎颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别肺炎颗粒中青黛、桔梗及丹参；用高效液相色谱法对肺炎颗粒中盐酸麻黄碱进行定量分析。结果：定性鉴别方法准确，专属性强；盐酸麻黄碱的含量测定线性范围为0．0275～0．88根，r=0．9998（n=6），加样回收率98．0％～98．6％，RSD为0．91％～1．19％（n=9）。结论：所建立的方法可靠、准确、专属性强，可有效控制肺炎颗粒的质量。     

构建中药免疫数据库及对中药免疫规律的研究

建立中药免疫数据库,并以数据库为基础分析中药免疫规律。数据库所收录的中药全部来自《中国药典》2000年版的植物药,检索自1980年以来的有关这些药物的免疫研究的原始文献。对中药的生物学分类、入药部位、性味、归经、功效和免疫功能作用等进行标引,并建立中药免疫信息数据库。以中药免疫信息数据库为统计源,根据检索的结果统计不同类别的中药的数量和其中具有免疫作用的中药味数,用Excel处理数据并用统计软件SPSS进行Logistic回归分析。研究的结论证实了中医药理论的科学性。中药的功能分类、性味、归经等药性理论能够为中药药理研究提供理论指导,应该得到尊重与重视。     

冷应激对人绒毛膜促性腺激素诱导大鼠黄体与颗粒细胞功能的影响

目的为探讨冷应激对大鼠卵巢功能的影响。方法采用体外细胞培养法分离培养大鼠卵巢黄体、颗粒与卵母细胞,设37℃对照组与0、-5、-10、-15、-20、-25℃冷应激组,观察人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导黄体与颗粒细胞分泌孕酮与cAMP的变化,采用放免分析方法测定孕酮与cAMP生成含量,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率。结果-5～-25℃冷应激组黄体细胞和颗粒细胞孕酮含量均低于对照组(均P<0.05),与对照组比较,冷应激组黄体细胞基础cAMP生成量增加,除-20℃组外,差异均有统计学意义(均P<0.05);与对照组比较,除-10℃冷应激组颗粒细胞基础cAMP生成量下降外,其余各组均升高,且差异有统计学意义(P<0.05)。0～-25℃冷应激组细胞存活抑制率呈上升趋势。结论冷应激抑制hCG诱导黄体与颗粒细胞孕酮分泌,协同cAMP生成,使卵母细胞存活率下降,其作用机制有待深入研究。     

脑出血微创抽吸术联用单唾液酸四己糖神经节苷脂对大鼠脑水肿的影响

目的：探讨实验性脑出血微创抽吸术联合腹腔、血肿腔应用单唾液酸四己糖神经节苷脂（monosialoganglioside，GM1）对脑出血急性期脑水肿的影响。方法：将Ⅳ型胶原酶注入SD大鼠尾状核诱导形成脑出血10h后，向血肿腔内注入尿激酶溶解血凝块，实施微创血肿抽吸术排出脑内血肿，通过对抽吸组与抽吸腹腔给药组及抽吸血肿腔给药组之间的脑组织含水量测定，不同时间脑组织水通道蛋白4（Aquaporin-4，AQP4）免疫组化检测，对微创抽吸术联合2种途径应用GM1治疗脑水肿的疗效进行评估。结果：抽吸血肿腔给药组，抽吸腹腔给药组注胶原酶3d的脑组织含水量明显少于抽吸组（P〈0．05），注酶3d时间点血肿周围AQP4表达细胞数和累积光密度值小于抽吸组（P〈0．05），5，7d AQP4表达细胞数和累积光密度值减少明显（P〈0．01）。结论：大鼠脑出血微创抽吸术联合腹腔、血肿腔应用GM1治疗能减轻脑出血急性期脑水肿，AQP4参与脑水肿形成，而且可能是GM1减轻脑水肿的潜在靶点；微创血肿抽吸血肿腔给药用药量更少，脑出血治疗更经济。     

3种不同厂家环孢素A胶囊在健康人体的药动学和生物等效性

 目的研究3种环孢素A胶囊在健康中国人体内的药动学和生物等效性。方法健康志愿者18名,采用简化三交叉试验设计,单剂量口服试验或参比制剂200mg;于服药后48h内,抽取静脉血;用高效液相色谱法测定全血中环孢素A的含量;用DAS软件计算药动学参数并评价3种制剂的生物等效性。结果参比制剂新山地明及两种试验制剂因普兰他和田可的主要药动学参数:ρ_max分别为(947.161±174.985),(758.869±193.539)和(938.711±202.379)μg·L^-1;t_max分别为(1.694±0.645),(2.472±0.581)和(1.861±0.564)h;t_1/2分别为(25.014±17.692),(28.032±14.602)和(28.056±22.927)h;AUC_0-48h分别为(6563.683±1342.601),(6152.483±1066.901)和(6594.165±927.042)μg·h·L^-1;AUC_0-∞分别为(7113.479±1655.657),(6771.877±1240.034)和(7253.950±1228.181)μg·h·L^-1。结论经统计学分析,3种制剂具有生物等效性。     

原子吸收分光光度法分析食用禽畜肝脏中的锰

[目的]分析食用禽畜肝脏中必须微量元素锰的含量。[方法]采用原子吸收光谱法，对市售鲜品进行混酸湿法消化后测定。[结果]锰在0.00-2.60μg.ml^-1范围内具有良好的线性关系，相关系数为γ=0.9994，测定锰的RSD≤4.48%（n=5）。标准加入法测定回收率96.0%-104%。[结论]禽畜肝脏中含有丰富的微量元素锰。测定方法简单，结果准确，可用于禽畜肝脏中锰的检测。     

乙胺丁醇处理前后耻垢分枝杆菌mc2155细胞蛋白双向电泳图谱的差异分析

[目的]利用蛋白质组学方法，识别乙胺丁醇处理前后耻垢分枝杆菌mc^2155细胞后差异表达的蛋白质，为进一步探讨乙胺丁醇抑制分枝杆菌生长的作用机制及寻找新的抗结核药物作用靶标奠定基础。[方法]采用载体两性电解质pH梯度双向凝胶电泳技术分离乙胺丁醇处理前后耻垢分枝杆菌mc^2155细胞的总蛋白质，用PDQuest7．3．1图像分析软件比较分析，以识别差异表达的蛋白质。[结果]空白对照组有268个斑点，Ethambutol（EMB）处理组有蛋白斑点195个，在相对分子质量和pI值分布的任一区域，EMB处理组蛋白斑点数均少于空白对照组，其中在EMB处理组中特异表达的蛋白质斑点有23个。[结论]乙胺丁醇处理前后耻垢分枝杆菌mc^2155细胞的蛋白质组具有差异，这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究乙胺丁醇抑制分枝杆菌生长的作用机制并为寻找新的抗结核药物作用靶标奠定基础。     

紫外-可见分光光度法测定利福平栓剂在家兔体内的血药浓度

[目的]测定自制的利福平栓剂在家兔体中的血药浓度.[方法]采用紫外-可见分光光度法测定自制的利福平栓剂和混悬液分别直肠和口服给药相同剂量后在家兔体中的血药浓度,用3P97程序处理求利福平的主要药动学参数.[结果]利福平浓度在1.0～25.0 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9996),其平均回收率为100.30%(RSD=0.29%).直肠给药的主要药动学参数为Cmax=(11.19±1.82)μg/mL,Tmax=(1.17±0.78)h;口服给药的主要药动学参数为Cmax=(10.34±1.85)μg/mL,Tmax=(2.33±0.82)h.[结论]该方法简单、快速,两种制剂中栓剂更快达到最大血药浓度.