八宝丹对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的观察八宝丹(BBD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移能力的影响。方法体外培养HUVEC,使用不同浓度BBD进行干预,MTT法检测HUVEC增殖情况,倒置显微镜观察细胞形态、划痕损伤,Transwell实验观察细胞损伤修复及迁移能力。结果 BBD能显著降低HUVEC的活力,抑制HUVEC增殖,抑制HUVEC的损伤修复和迁移能力,并呈现剂量依赖性。结论 BBD具有抑制HUVEC增殖和迁移的作用。     

莲子心总生物碱及总生物碱高氯酸盐对MG63细胞迁移和迁移体生成的影响

目的 研究莲子心总生物碱（TAL）和总生物碱高氯酸盐（TALP）对MG63细胞迁移及迁移体生成的影响,探讨其治疗骨肉瘤的作用机制。方法 将对数生长期的MG63细胞,分为空白组、TAL组和TALP组,空白组不加药物,TAL组和TALP组以10、20、40、60、80、100μg/mL TAL和TALP培养液分别干预24、48 h后采用CCK8法检测各组细胞增殖率;根据CCK8实验结果,取24 h IC50的一半剂量约为50.0μg/mL稀释成不同浓度的含药培养基来干预细胞,即2组实验组分别加入50.0、25.0、12.5、6.25μg/mL TAL和TALP干预24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移率,并计算迁移抑制率为50%的药物浓度;MG63细胞传代培养15～20 h后采用激光共聚焦显微镜、透射电镜观察细胞迁移体的生成和形态结构;将细胞分成空白组、TAL组和TALP组,后2组根据划痕实验结果,取细胞迁移抑制率约为50%时的药物浓度进行干预15～20 h,计算并比较各组迁移体生成的数量变化。结果 与空白组比较,20、40、60、80、100μg/mL TAL和40、60、80、100μ...     

基于筋骨中和初探骨关节炎中医康复的新策略

筋骨系统是人体力学平衡的核心因素,在结构上相互依存,在功能上相互协调;在生理上互用,在病理上互损。筋骨失和,则力学失衡,引起局部微环境的生物学因素改变,是骨关节炎的关键病因。基于筋骨理论,以筋骨中和为切入点,借助人体力学理论,揭示"筋束骨、骨张筋"科学内涵;从以筋为先角度,借助肌筋膜理论,探索筋骨失和力学机制,丰富骨关节炎的病因病机;从筋骨并重角度,整合现代康复核心理念,构建"预防-保健-治疗-康复-养生"五位一体的诊疗方案,旨在为骨关节炎中医康复提供新策略。     

基于计算机模拟探讨牛膝治疗骨关节炎软骨退变机制

目的 基于生物信息学和网络药理学方法,筛选荣筋拈痛方君药牛膝相关活性成分,通过动物体内体外实验观察其对骨关节炎相关治疗靶点的影响。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库筛选中药牛膝主要活性成分和治疗靶点;通过GEO数据库获得与疾病的差异表达基因,并进行交叉分析;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测牛膝主要活性成分对骨关节炎大鼠体内体外富集治疗靶点的影响。结果 牛膝作用骨关节炎相关活性成分共20种,槲皮素为其中重要成分之一;靶基因共3个,其中骨桥蛋白（OPN）,纤维蛋白溶解抑制剂-1（PAI-1）等为该网络中的关键基因;基因本体（GO）分析共获得相关条目227条,涉及到的功能包括创伤生理反应调节（GO：1903034）,创伤反应负调节（GO：1903035）等。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析获得相关通路12条,涉及细胞外基质受体相互作用（hsa04512）等。动物实验中,与正常组比较,模型组OPN,PAI-1 mRNA和蛋白表达量增加与模型组比较,槲皮素组OPN,PAI-1 mRNA和蛋白表达量降低（P<0.05）。细胞实验中,与正常组比较,模型组OPN,PAI-1蛋白表达量增加,Ⅱ型胶原（CollagenⅡ）蛋白表达量降低;与模型组比较,槲皮素组和抑制剂组OPN,PAI-1蛋白表达量降低,CollagenⅡ蛋白表达量明显增加（P<0.05）。结论 牛膝可能主要通过其活性成分（槲皮素）下调软骨细胞OPN,PAI-1靶mRNA表达,上调CollagenⅡ蛋白表达,实现抑制软骨退变,防治骨关节炎。     

miR-148-5p靶向H型血管调控因子Slit3的实验研究

目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3’UTR互作的miRNAs,构建野生型和突变型Slit3-3’UTR重组荧光素酶报告载体,和miRNAs表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶报告基因测定荧光素酶活性验证miRNA对Slit3-3’UTR的靶向作用。结果 与假手术组相比,模型组Slit3 mRNA表达水平略上调和平均光密度显著上调,生物信息学预测Slit3-3’UTR与miR-148a-5p、miR-148b-5p、miR-410-3p、miR-129-5p和miR-374-5p存在碱基结合位点,野生型Slit3-3’UTR共转染miR-148b-5p荧光活性下调至空白对照组的68.91%,突变型Slit3-3’UTR共转染miR-148b-5p荧光活性未见下调。结论 Slit3可能是绝经后骨质疏松症H型血管的调控基因,miR-148b-5p与Slit3-3’UTR的靶向结合直接调控Slit3的表达水平。     

白花蛇舌草对大肠癌耐药移植瘤细胞凋亡的影响

目的探讨白花蛇舌草(HDW)在体内诱导大肠癌HCT-8/5-Fu耐药细胞凋亡情况及其作用机制。方法构建大肠癌HCT-8/5-Fu耐药细胞皮下移植瘤动物模型,按照瘤体积大小随机将30只移植瘤小鼠分为对照组、5-Fu组、HDW组各10只,分别给予生理盐水0.1 mL/10 g、5-Fu 20 mg/kg、HDW 1 g/kg灌胃,其中对照组、HDW组每周灌胃6 d,5-Fu组连续灌胃3 d后停药1 d,均连续6周。测量并记录各组瘤体体积;采用TUNEL染色法观察大肠癌HCT-8/5-Fu耐药移植瘤细胞凋亡情况;采用RT-PCR和免疫组化法检测移植瘤组织中Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达情况。结果与对照组比较,5-Fu对移植瘤的生长无明显影响(P>0.05),HDW治疗可显著抑制移植瘤的生长(P<0.05);5-Fu对HCT-8/5-Fu耐药细胞移植瘤的细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达无明显影响(P均>0.05);HDW能诱导移植瘤组织中HCT-8/5-Fu细胞凋亡,显著下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达和上调Bax的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。结论HDW可诱导大肠癌HCT-8/5-Fu耐药移植瘤细胞凋亡,抑制Bcl-2表达和促进Bax表达是其重要作用机制。     

解毒消癥饮调控肝癌细胞HIF-1的表达抑制肝癌血管生成的机制研究

目的:解毒消癥饮(JXY)是应用于围手术期消化道肿瘤的临床验方。前期工作表明,其可抑制肝癌血管的生成,可能与下调缺氧诱导因子-1(HIF-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达有关。但该方如何下调HIF-1及VEGF的表达进而抗肿瘤血管生成的机制尚不清楚。为探讨JXY抑制肝癌血管新生的作用机制,本文从表观遗传学角度出发,考察JXY对组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达情况,从分子水平研究该方调控VEGF表达的作用机制。方法:制备JXY乙酸乙酯提取物,体外建立常氧和乏氧条件下HepG2肝癌细胞的培养,MTT法检测不同乏氧时间下HepG2肝癌细胞的存活率,RT-PCR法检测HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA水平,用以确定乏氧模型构建成功。MTT法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率的影响,RT-PCR法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平的影响,Western blot法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF、HIF-1α、CBP和P300蛋白表达的影响。在体建立HepG2肝癌细胞裸小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为模型组和JXY组,模型组给予生理盐水,JXY组给予0.06 g/kg/d JXY。Western blot法和免疫组织化学法检测瘤体VEGF、VEGFR、HIF-1α蛋白表达的影响。结果:与常氧组比较,随着乏氧时间的延长,HepG2肝癌细胞存活率先降低后升高,在乏氧7h时达到波谷(P0.01)。此时间点HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA的表达水平也明显升高。随着JXY浓度的升高,乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率逐渐降低,VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白表达水平也受到抑制,呈现剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在乏氧条件下HepG2肝癌细胞p300和CBP的蛋白表达水平明显高于常氧组,给予不同浓度JXY后, CBP、P300蛋白的表达量逐渐减弱,有剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在体实验也观察到JXY对裸小鼠皮下移植瘤VEGF、VEGFR和HIF-1α蛋白表达水平呈现明显的抑制作用。结论:JXY可能通过抑制组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达水平,抑制其与HIF-1α结合形成HIF-1α/p300(CBP)低氧诱导复合物,进而抑制VEGF的转录,最终抑制肿瘤新生血管的生成。     

槲皮素治疗类风湿关节炎的作用机制探讨

目前,治疗类风湿关节炎的优选策略是控制炎症与其他病理反应,缓解其疼痛不适等临床症状。槲皮素具有抑制炎症介质的表达和分泌、抗氧化、免疫调节、抑制基质金属蛋白酶的生成,以及抑制滑膜细胞增生等多种生物活性,可抑制类风湿关节炎的病理进程。槲皮素在预防和治疗类风湿关节炎上具有广阔的应用和发展前景。     

清达颗粒对AngⅡ诱导的高血压小鼠肾脏损害的干预研究

目的:探讨清达颗粒对AngⅡ诱导的高血压肾损伤小鼠血压及相关病理的影响。方法:将18只小鼠随机分为3组:对照组、模型组及给药组,其中模型组及给药组予AngⅡ通过植入式胶囊渗透压泵连续灌注28d以建立高血压模型。给药组予清达颗粒灌胃给药,剂量为22. 9mg/天/0. 2ml,对照组和模型组予等体积的生理盐水灌胃,每天1次,连续给药28d。结果:与模型组对比,清达颗粒能够抑制血压的升高幅度,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,清达颗粒能够明显改善肾小动脉及肾小球硬化,降低肾小球内胶原阳性比例(P 0. 05)。结论:清达颗粒能降低AngⅡ诱导的高血压小鼠的血压、减轻肾脏损伤。