miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠发病的作用

目的:探讨在体过表达miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脱髓鞘病变的作用。方法:构建含稳定表达miR-30a的shRNA慢病毒载体,以含有空载体的慢病毒为对照(LV-ctrl)。雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(normal)、对照慢病毒(LV-ctrl)组和miR-30a慢病毒(LV-miR-30a)组,2组慢病毒经尾静脉注射,注射7 d后用MOG35-55多肽免疫小鼠。Kono 5分法检测发病情况,快蓝(LFB)染色及透射电镜检测脊髓脱髓鞘程度及髓鞘结构的变化。结果:LV-ctrl组小鼠在MOG_(35-55)多肽免疫的第10天开始发病,到第21天,其Kono评分为2.57±0.79,LV-miR-30a组小鼠的Kono评分显著低于LV-ctrl组小鼠;miR-30a处理可显著提高小鼠体质量增长率,同时LFB评分也较LV-ctrl组显著增加;髓鞘超微结构显示LV-ctrl组小鼠脊髓髓鞘板层松解且稀疏,而LV-miR-30a组小鼠的髓鞘结构相对完好,髓鞘厚度显著大于LV-ctrl组。结论:过表达miR-30a可以明显减缓EAE的发病,减轻脊髓脱髓鞘程度。     

Ro25-6981对脑缺血再灌注模型大鼠海马齿状回颗粒下层nestin和BrdU表达的影响

目的:研究Ro25-6981对成年大鼠短暂性脑缺血再灌注海马齿状回颗粒下层(subgranular zone,SGZ)神经干细胞增殖的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠在进行侧脑室置管7 d后,随机分为正常组、假手术组和脑缺血再灌注组,每组又分别再分为Ro25-6981组和生理盐水组。缺血再灌注组大鼠采用四动脉阻断前脑缺血再灌注模型,即缺血15 min再灌注1、3、7、14、21、28 d和35 d,缺血前15 min经侧脑室套管注射Ro25-6981或生理盐水。各组大鼠均采用免疫组织化学显示SGZ区Brd U、nestin阳性细胞的表达情况,采用免疫荧光双重标记法检测再灌7 d时SGZ区Brd U/nestin双标阳性细胞数量的改变。结果:脑缺血再灌注生理盐水组SGZ区nestin阳性细胞表达再灌1 d时开始增多,7 d时达到峰值,14 d时急剧下降,至35 d时降至正常水平;缺血前给予Ro25-6981,各时间点的nestin阳性细胞表达均有所下降,其中在3、7 d和14 d时减少明显,差异有统计学意义(P0.05)。脑缺血再灌注生理盐水组SGZ区Brd U阳性细胞再灌1 d开始增殖,7 d达到峰值,35 d降至正常水平;缺血前给予Ro25-6981,各时间点的Brd U阳性细胞表达均有所下降,其中在3、7、14 d和21 d时减少明显,差异有统计学意义(P0.05)。与脑缺血再灌注生理盐水组相比,Ro25-6981可以降低脑缺血再灌7 d海马SGZ区的Brd U/nestin双标阳性细胞密度,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Ro25-6981可以抑制前脑缺血再灌注后海马SGZ区神经干细胞的增殖,提示NR2B参与并促进了前脑缺血再灌注引起的神经干细胞的增殖。     

6%和8%缺氧对新生大鼠脑白质损伤的差异及其机制

目的:观察新生大鼠不同缺血缺氧(hypoxia-ischemia,HI)条件下脑白质的损伤状况,并探其损伤的机制。方法:新生3 d SD大鼠随机分为正常对照组、6%缺氧和8%缺氧损伤模型组,模型组大鼠进行右侧颈总动脉结扎,2 h后进行6%或8%缺氧,建立HI脑白质损伤动物模型。分别于2周、3周和4周取脑制作冰冻切片,免疫荧光检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)和髓鞘相关糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)的变化,RT-PCR检测增殖和分化相关因子硫酸软骨素蛋白多糖4(chrondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4)和类胰岛素一号增长因子(insulin-like growth factors-1,IGF-1)的表达,探索HI脑白质损伤的机制。结果:体重统计显示:与正常对照组大鼠相比,HI损伤后1周、2周、3周和4周时模型大鼠平均体重在各时间点均显著性降低;6%和8%模型大鼠平均体重在各时间点无显著差异。与对侧MBP和MAG荧光强度相比,3周和4周时6%缺氧组损伤侧MBP和MAG荧光强度的比值均较8%缺氧组减少(P0.05)。RT-PCR结果显示:同一时间点,6%缺氧组CSPG4的表达显著高于8%缺氧组(P0.05),而IGF-1的表达显著低于8%缺氧组(P0.05)。结论:6%或8%缺氧损伤均可造成新生大鼠明显的脑白质损伤,但6%氧损伤导致大鼠脑白质损伤较8%缺氧加重,其机制可能与不同缺氧程度导致的少突胶质前体细胞分化抑制因子CSPG4和增殖分化因子IGF-1的不同表达有关。     

过表达Olig2的少突胶质前体细胞在缺血缺氧脑白质损伤新生大鼠脑内的分化

目的:观察过表达特异性转录因子Olig2的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)移植在缺血缺氧(hypoxia-ischemia,HI)脑白质损伤新生大鼠脑内的分化情况。方法:用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的过表达Olig2的慢病毒感染原代分离纯化的大鼠大脑皮层OPCs,GFP阳性细胞计数测其感染率。将过表达Olig2的OPCs(Olig2组)或阴性对照病毒感染的OPCs(Vector组)脑立体定位注射到造模后7 d的HI模型大鼠胼胝体膝部,移植后2周,冰冻切片行免疫荧光染色观察OPCs的存活和分化情况。结果:Olig2-GV218病毒感染OPCs细胞48 h,荧光显微镜检测显示85%左右的OPCs细胞表达GFP;移植后2周,caspase-3荧光染色表明移植后绝大部分细胞存活,Vector组和Olig2组之间无统计学差异(P0.05);GFAP/GFP双阳性细胞在两组之间也无显著差异(P0.05);而Olig2组MBP/GFP双阳性细胞的荧光密度显著高于Vector组(P0.05)。结论:过表达Olig2可促进移植OPCs向少突胶质细胞分化。