磁刺激和碱性成纤维细胞生长因了对脊髓损伤后神经再生的影响

脊髓损伤预后不良的主要原因为伤后继发性损害和神经再生困难。碱性成纤维细胞生长因子（BFGF）是一种能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞增殖的多肽生长因子，对神经具有保护作用。     

鼠骨骺增殖区细胞的分离鉴定和克隆构建PTHrp基因真核表达载体

[目的]分离、鉴定大鼠骨骺生长板增殖区软骨细胞,克隆甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrp）基因并构建真核表达载体pEGFP-IRES2-PTHrp.[方法]Percoll不连续密度梯度离心法分离生长板增殖区软骨细胞,用X型胶原抗体和电镜鉴定,提取总RNA,RT-PCR方法获得PTHrp基因的全长cDNA,插入pCR2.1 TA克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pEGFP-IRES2.[结果]分离出增殖区软骨细胞,经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒.[结论]准确分离增殖区软骨细胞并成功构建了PTHrp基因的真核表达载体,为进一步揭示PTHrp的生物学功能及其在在软骨细胞的分化和骨骼形态发生中的作用奠定了基础.     

表达增强型绿色荧光蛋白的骨肉瘤细胞亚株建立及生物学特性

目的 建立经绿色荧光蛋白基因转染的骨肉瘤细胞亚株并研究其生物特性。方法 利用脂质体转染增强型绿色荧光蛋白真核表达质粒（pEGFP-N1）人人骨肉瘤MG63细胞系，通过有限稀释法和细胞电泳，获得两株细胞克隆M6和M8，经体外细胞增殖、软琼脂形成、生长曲线、裸鼠成瘤试验综合分析其生物学行为改变。应用组织形态学观察、染色体分析、软琼脂克隆形成法研究癌细胞的生物学特性。结果 M6和M8两株在细胞电泳率和侵袭性上差异有统计学意义（P〈0．05），其中M6的群体倍增时间为38．4h，软琼脂形成率为18．7％，M8群体倍增时间为23．0h，软琼脂形成率为29．3％。裸小鼠背部皮下接种M6和M8，发现M8成瘤时间短，细胞增殖快，但在4周内两者均不发生转移。结论 骨肉瘤细胞亚系有不同的转移特性，GFP的整合及表达未对MG63细胞的生长状态造成明显影响，可作为报告基因进一步了解骨肉瘤细胞转移的差异性分析。     

哈氏棒联合CD钩矫正脊柱侧凸的临床应用(附50例临床分析)

目的　总结哈氏棒联合CD钩治疗脊柱侧凸的手术技术及临床疗效。方法　脊柱侧凸患者 5 0例 ,术前Cobb角平均 6 0 .7°,采用哈氏棒联合CD钩 (简称HCD)治疗 ,术后随访 8～ 6 5个月。结果　术后Cobb角平均 2 5 .8°,平均矫正率5 7.3% ,3例发生断棒 ,无其它并发症发生。90 %的患者对手术效果表示满意或基本满意。结论　HCD系统操作简便 ,固定可靠 ,并发症少 ,疗效满意 ,是一种很实用的脊柱侧凸矫正方法     

永生化人前软骨干细胞株的构建

背景：前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。 目的：以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株。 方法：采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞。利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照。阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线。以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达。 结果与结论：贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别。传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P < 0.01)。与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P < 0.01)。第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性, 成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400 bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560 bp处有一特异形扩增条带, 未转染的原代细胞未见条带。提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株。     

周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的影响

目的观察周期性单轴牵张应力对大鼠前软骨干细胞增殖相关基因的影响。方法采用四点弯曲应力仪分别以2000μstrain和4000μstrain的牵张力刺激前软骨干细胞1h,并设空白对照组,荧光定量PCR检测相关增殖基因PCNA和CyclinD1的表达情况,并用免疫荧光检测力学激前后Ki67阳性细胞的表达情况。结果2000μstrain刺激组细胞表达PCNA以及CyclinDl较对照组高（P〈0．05）,免疫荧光检测提示2000μstrain刺激组的细胞核内Ki67表达较对照组明显增多;而4000μstrain刺激组细胞PCNA的表达与对照组相比明显降低（P〈O．05）,而CyclinD1降低不明显（P〉0．05）。结论适宜的周期性单轴牵张力能引起大鼠前软骨干细胞相关增殖基因的表达增加。     

壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架的生物相容性研究

制备壳聚糖/纳米羟基磷灰石(CS/nHA)分层复合支架,对其进行细胞毒性评价.分离培养大鼠软骨细胞接种于支架,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长情况.动物皮下埋植试验观察其组织相容性.实验结果证实壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架具有良好的生物相容性,有望成为较好的骨软骨组织工程支架.     

RNA干扰抑制骨肉瘤MG-63细胞β-catenin的表达

目的通过抑制Wnt信号通路核心蛋白β-catenin在骨肉瘤细胞系MG-63中的表达,探讨β-catenin对MG-63细胞的生长、细胞侵袭性以及耐药性等方面的作用。方法设计合成β-catenin的si RNA序列,LipofectamineTM2000转染入MG-63细胞。用RT-PCR和Western blot法检测干扰后β-catenin的mRNA和蛋白表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,CCK-8法检测细胞增殖,利用阿霉素检测细胞耐药性。结果干扰后,实验组细胞的β-catenin mRNA和蛋白表达较对照组和空白组显著降低(均P<0.05);细胞周期检测实验组与对照组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);Transwell法结果显示实验组细胞侵袭能力较对照组和空白组显著下降(均P<0.05);CCK-8法检测显示实验组细胞增殖力较对照组和空白组略有降低,但差异无统计学意义(均P>0.05);多柔比星敏感性检测显示实验组较对照组和空白组细胞生长抑制率显著增加(均P<0.05)。结论特异性抑制β-catenin基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力,并...