融合表达pGEX—Tαl的发酵研究

为了研究重组人胸腺素α1(Tα1)工程菌的发酵工艺，在NBS—MICROS15L自动控制发酵罐中，利用分批培养和补料分批培养技术培养含融合表达载体／pGEX—Tαl的大肠杆菌DE3(lys)。采用分批培养，得到的最终菌体密度OD600为8，GST-Tαl融合蛋白的含量为0．1g／L(发酵液)；通过限制性流加补料，促进体系溶解氧能使发酵菌体密度及融合蛋白的含量显著提高，0D600可达32，融合蛋白的含量为0．7g／L(发酵液)，且融合蛋白主要以可溶形式表达，为后续蛋白纯化工作提供了便利。本研究确定了周期短、产率高且稳定的发酵工艺，为工业化生产重组Tα1打下了基础。     

重组人胸腺素α原体外对IFN-γ、IFN-α及TNF-α的影响

目的　在体外实验中考察克隆并表达的人胸腺素α原 (prothymosinα ,ProTα)对几种重要细胞因子IFN γ、IFN α和TNF α分泌的影响。方法　在体外分离脾淋巴细胞、脾巨噬细胞及腹腔巨噬细胞 ,用ELISA法检测ProTα对IFN γ、IFN α和TNF α分泌的影响。结果　 10 - 7mol·L- 1 ProTα明显促进脾细胞分泌IFN γ(P <0 .0 5 ) ,该浓度的ProTα也明显刺激小鼠脾巨噬细胞分泌IFN α(P <0 .0 1) ;在小鼠腹腔巨噬细胞中 ,ProTα能明显刺激IFN α和TNF α的分泌 (P <0 .0 1)。结论　在体外实验中 ,ProTα对细胞因子IFN γ、IFN α和TNF α的分泌均有促进作用 ,这为ProTα进一步体内研究奠定了基础     

重组人单核细胞趋化蛋白-1在骨肉瘤化疗过程中的作用

目的 观察重组人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在骨肉瘤化疗过程中的作用。方法 建立裸鼠荷人骨肉瘤动物模型。分别及联合应用重组人MCP-1和高剂量氨甲喋呤(HD-MTX)对其进行治疗，并设立空白对照。观察瘤体的生长及病理指标。结果 MCP-1可抑制骨肉瘤体的生长。但效果不理想；HD-MTX可明显抑制骨肉瘤体的生长，效果显著，但可出现肿瘤再生长；MCP-1可增强HD—MTX对瘤体的抑制作用，且能明显延迟肿瘤再生长的时间。结论 重组人MCP-1在骨肉瘤进行HD—MTX化疗过程中具有显著的增强治疗作用。     

腺相关病毒末端反向重复顺序折叠结构在真核细胞染色体基因组上的整合作用

腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变为折叠十字架结构，再以其发夹中的３＇－ＯＨ为引物合成另一股姊妹染色体ＤＮＡ，然后共价连接到亲代分子上，与辅助病毒Ａｄ２和ＰＡＡＶ／Ａｄ共转染真核生物细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交结果表明：插入这一折叠结构中由ＳＶ４０早期启动子控制的报告基因－新霉素抗性基因拷贝已整合到细胞基因组染色体上，这种以无细菌ＤＮＡ分子为支架的折叠结构不仅证明了Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的理论，而且可望为外源基因导入真核细胞提供新的又一系统。     

小鼠β趋化因子受体CCR5基因的克隆

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂ ｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用Ｍａｒａｔｈｏｎ ＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂ ｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｍ方法检测分析该ＡＤＬＤ，Ｎｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，     

Namalwa细胞干扰素制备系统的改进研究

本研究主要目的。旨在建立高产、低成本的Namalwa细胞干扰素制备系统。结果表明:用廉价易得的猪血清(10％)可代替传统的增殖培基中的小牛或胎牛血清;用本室配制的Eagle营养培基可代替进口RPMI1640培基作为细胞增殖培基,用无血清的Eagle培基和0.5％乳蛋白水解物(LH)培液可代替RPMI1640培基作为IFN诱导培基;此外,还就各种诱生剂的诱导性能及诱生IFN的各种最适条件进行了比较研究。     

关于4种干扰素促诱生剂作用的研究

本文报道了4种对Namalwa细胞干扰素有促诱生作用的“基因表达增强剂”,结果除进一步证实已有报道的丁酸钠(Sodium butyrate)和BrdU对Namalwa细胞干扰素有“促诱生作用”外,还首次发现中药刺五加多糖和羧甲基淀粉钠对该干扰素也有明显的“促诱生作用”。前者(刺五加多糖)可使干扰素效价增高约5倍左右,后者(羧甲基淀粉钠)可提高产量达8～20倍。此外,本文还对这几种干扰素“促诱生剂”的作用机理作了探讨,并指出今后进一步研究的方向。     

重组人胸腺素原α在大肠杆菌中的表达优化

在15L的生物反应器内,对重组人胸腺素原α（huPTMAα）在大肠杆菌TG－1中经IPTG诱导后的表达条件进行优化;应用NBS－MICROS15.L.T.DR型生物反应器（15L）,用工程菌E.coli pGEX－IN／PTMA,研究了诱导时不同的pH、温度、搅拌速率和IPTG浓度,利用正交试验对发酵条件进行了优化。经1次预试验和9次正式试验结果表明,huPTMAα的表达受溶氧条件的影响较显著,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因子,当其为250r/min时,表达水平最高。经SDS－PAGE和凝胶扫描发现表达蛋白占菌体蛋白的60％以上。该实验为工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件,对其稳定性,高效表达具有重要的指导意义。     

胸腺素а原的生物学活性及基因表达谱芯片分析

目的 :对一个新的胸腺素α原 (human prothymosinα,Pro Tα)进行生物学活性研究及基因表达谱分析。 方法 :用体外刺激小鼠脾细胞增殖进行实验及 EL ISA法检测 Pro Tα对 IL - 2和 TNF-α的诱导分泌作用 ,并用基因芯片技术对其表达谱进行分析。结果 :Pro Tα对小鼠脾细胞有明显的促进增殖作用 ,对 IL - 2和 TNF-α有明显的诱导分泌作用 (P<0 .0 1)。基因芯片研究发现 Pro Tα对蛋白酪氨酸磷酸酶基因、淋巴细胞抗原 6复合体、增殖相关基因 A等的表达有上调作用。 结论 :该新型Pro Tα在体外实验中有免疫调节活性 ,并诱导一些基因的表达。