钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺增强阿霉素杀伤MCF-7/ADR细胞的机制研究

目的研究钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)增强阿霉素诱导乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及其相关机制。方法用MTT法测定阿霉素、EBB单独及联合用药对阿霉素杀伤乳腺癌多药耐药细胞系(MCF-7/ADR)及其亲代细胞系(MCF-7)的作用的IC50值,用不同浓度EBB处理MCF-7/ADR细胞后用FACS法分析EBB对阿霉素诱导细胞凋亡及对mdr1mRNA和P-gp蛋白水平表达的影响,通过激光共聚焦显微镜观察EBB处理前后及用EBB预处理24和48h后MCF-7/ADR和MCF-7细胞内阿霉素浓度的改变。结果MTT结果显示EBB对MCF-7和MCF-7/ADR都具有抗肿瘤活性;EBB还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,MCF-7组两药相互作用指数(CDI)值为0.73,MCF-7/ADR组CDI值为0.49,其对耐药细胞的协同作用更为明显。随EBB剂量增加,低剂量阿霉素诱导MCF-7/ADR细胞凋亡增加而且P-gp蛋白表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,而且用EBB预处理MCF-7/ADR细胞24和48h后细胞内阿霉素和罗丹明浓度也逐渐提高。结论EBB是有效的肿瘤细胞化疗药物,它不但能直接抑制P-gp功能还具有下调P-gp蛋白表达的作用,从而有效逆转MCF-7/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对耐药细胞的杀伤作用。     

重组融合蛋白抗CD20Fab-LDM的构建、表达及体外活性研究

目的构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性。方法采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot鉴定纯化产物;采用FACS方法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用冷乙二醇法制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM;采用MTT法鉴定抗CD20Fab-LDM对CD20+Raji细胞特异性的细胞毒作用。结果DNA序列测定结果表明抗CD20Fab-LDP融合蛋白已构建成功,可溶性表达产物的产量可达4mg.L-1以上,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,与抗CD20Fab的亲合常数相当,抗CD20Fab-LDM体外能特异性杀伤Raji细胞,IC50值为0.9×10-10mol.L-1。结论成功地构建了抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并获得可溶性高效表达,表达产物具有与相应靶抗原结合的活性,并成功制备了抗CD20Fab-LDM强化融合蛋白,体外能特异性杀伤CD20+的Raji细胞。     

抗CD3/抗CD20偶联物的制备及其介导激活T细胞杀伤活性研究

目的：研究抗CD3/抗CD20抗体偶联物介导的激活T细胞杀伤活性。方法：通过SPDP偶联，经分子筛层析法纯化得到抗CD3/抗CD20抗体偶联物，并用FACS和玫瑰花环试验鉴定纯化产物；采用^51Cr释放试验测定该抗体偶联物介导的体外靶向杀伤活性。结果：纯化的抗CD3/抗CD20抗体偶联物具有与jurkat(CD3^ )和Daudi细胞（CD20^ )的结合活性，且能同时将Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环；在体外能介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞。结论：抗CD3/抗CD20抗体偶联物体外能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞，为B细胞恶性肿瘤临床治疗提供实验依据。     

抗CD20 嵌合抗体突变型Fab′片断诱导凋亡过程中活性氧Caspase-3 的变化

 目的 研究抗CD20嵌合抗体突变型Fab’片断诱导Raji细胞凋亡过程中活性氧（ROS），Caspase-3的变化。方法 利用MTT法测定突变型Fab’片断抑制细胞生长，形态学方法观察凋亡细胞的变化，用流式细胞仪检测DCFH—DA荧光探针标记细胞内I的S的变化，以及用酶标仪和Westernblot检测细胞内Caspase-3的变化。结果 MTT法测定突变型Fab’片断对Raji细胞的生长具有抑制作用，其抑制作用呈明显的剂量依赖性，荧光显微镜下观察细胞出现凋亡，流式细胞仪，酶标仪以及Westernblot检测细胞内ROS，Caspase-3的表达增高，并与作用时间，剂量呈依赖关系。结论 ROS，Caspase-3表达的增高，在抗CD20嵌合抗体突变型Fab’片断诱导Raji细胞凋亡的过程中起到重要作用。     

新形势下如何增强高等医学院校教师综合素质

在知识和人才日趋成为核心竞争力的今天，应从师德建设、更新教育理念、培养有层次的人才梯队、激发创新能力等多方面入手，增强高等医学院校教师综合素质，以适应21世纪高等医学教育的需要。     

抗人乳腺癌细胞膜表面角蛋白CK8的单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立针对多药耐药人乳腺癌细胞膜表面差异抗原的抗体库,并鉴定抗角蛋白CK8特异性的单克隆抗体。方法：采用细胞免疫和杂交瘤技术制备单克隆抗体库,经免疫沉淀得到抗原-抗体复合物,SDS-PAGE分离目的抗原,质谱测序,Western blot验证及激光共聚焦显微镜观察抗原分子的细胞膜定位。结果：成功筛选到稳定分泌抗CK8分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（7F9）。结论：文中所研制的单克隆抗体具有与乳腺癌细胞膜表面CK8分子特异结合的活性,在上皮来源肿瘤标志物CK8的临床检测及CK8相关生物学活性研究中具有广泛应用前景。     

嵌合抗CD20Fab诱导Daudi细胞凋亡

为了研究嵌合抗CD20基因工程抗体Fab的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制,本研究采用竞争性免疫荧光抑制实验,证实抗CD20 Fab片段能竞争性抑制亲本鼠源性抗CD20单克隆抗体HI47和Daudi细胞CD20的结合。MTT法测定嵌合抗CD20 Fab对Daudi细胞生长的影响,结果显示嵌合抗CD20 Fab对Daudi细胞的生长具有抑制作用,抑制作用呈剂量依赖性,其IC50为69μg/ml;利用流式细胞仪测定嵌合抗CD20 Fab诱导细胞凋亡作用,结果显示嵌合抗CD20 Fab可诱导 Daudi细胞凋亡,其凋亡率是Rituxan的2倍。这些实验结果证实嵌合抗CD20 Fab通过诱导Daudi细胞凋亡的机制抑制Daudi细胞生长。     

导向药代动力学研究

本文用~(125)I标记导向药物测定其药时曲线和体内分布,提出初步数学模型,计算出其药代动力学参数,并与柔红霉素(DNR)在白血病患者的药代动力学参数进行比较,以评估导向药物在临床应用中的价值。与此同时建立了测定导向药物HI30-PAD-DNR中柔红霉素的水解产物柔红酮(daunomycinone,DNRO)非同位素测定导向药物血药浓度方法。为将来导向药物Ⅰ期和Ⅱ期临床     

125I标记抗CD20 HI 47 F(ab')2性质研究

目的 :对12 5I标记的抗CD2 0HI 4 7F(ab’) 2 性质进行研究。方法 :采用NBS法进行碘标 ,并测定标记物的标记率、免疫活性分数、放化纯度、亲和常数和体外稳定性。结果 :测定标记率为 87 4 % ,免疫活性分数为 0 4 0 8,放化纯度 >95 % ,亲和常数为 3 2× 10 9M-1,体外 4℃存放 5天 ,放化纯度降低至 0 2 1。结论 :标记物具有较高的放化纯度、免疫活性和稳定性 ,为体内治疗打下良好的基础。     

地塞米松促胎肺成熟的两种用药方式对糖耐量异常孕产妇及围生儿的影响

目的观察地塞米松促胎肺成熟用药方式对糖耐量异常孕产妇及围生儿的影响。方法将2005年6月至2006年6月我院40例糖耐量异常的孕产妇分为A组(肌注地塞米松组)和B组(羊膜腔注射地塞米松组)。观察用药前后血糖、尿酮体和胎心监护变化,以及两组新生儿窒息、高胆红素血症的发生情况。结果孕妇肌注地塞米松后3餐后2h血糖有明显升高,尿酮体于晚餐后增多。应用地塞米松期间10例出现胎心监护改变,停药后全部恢复正常。肌注地塞米松组新生儿高胆红素血症的发生率高于羊膜腔注射地塞米松组。结论两种用药方式均可导致糖代谢紊乱,糖代谢紊乱可能对糖耐量异常孕产妇及围生儿产生不良影响,尤以肌注地塞米松组更明显,应用时必须加强监护,同时尽量避免重复用药。