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目的:构建人舌鳞状细胞癌/大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)体外共培养的实验模型,研究神经轴突导向因子Semaphorin 3A(Sema3A)及其受体Neuropilin-1(NRP-1)在肿瘤排斥神经的现象中可能发挥的作用。方法:鉴定Sema3A在人舌鳞状细胞癌细胞系SCC25中的表达以及NRP-1在大鼠DRG神经元中的表达,建立人舌鳞状细胞癌/大鼠DRG体外共培养的实验模型,针对NRP-1靶点进行特异性拮抗,观察SCC25排斥DRG轴突生长的程度变化。结果:免疫荧光结果显示,Sema3A在SCC25中表达,而NRP-1在大鼠DRG神经元中也呈阳性表达;共培养实验结果表明,DRG组织块中NRP-1被特异性拮抗后,SCC25对DRG轴突的排斥程度较对照组明显减弱。结论:Sema3A及其受体NRP-1在SCC25排斥大鼠DRG轴突生长过程中起着重要作用。 相似文献
12.
目的 通过检测口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中全长型脾酪氨酸激酶[SYK(L)]的表达、与淋巴结转移的相关性分析,探讨SYK(L)对OSCC发生发展和转移的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫印迹(Western blot)、免疫组织化学法检测SYK(L)在27例OSCC及其癌旁组织中表达的差异,并采用14例正常口腔黏膜作为对照,探讨其与OSCC发生及转移的关系。结果 OSCC组织中SYK(L)表达量明显低于正常牙龈组织(P<0.01),同一患者癌组织中SYK(L)表达量比癌旁组织低(P<0.05);淋巴结转移组患者的SYK(L)表达量普遍低于未转移组患者(P<0.05)。结论 SYK(L)可能与OSCC的发生和发展有关,作为抑癌基因在肿瘤的淋巴结转移过程中起至关重要的作用。 相似文献
13.
目的:扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE—A9(melanoma antigen A9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE—A9单抗.观察其在肝细胞癌中的表达。方法:从人肝癌组织提取总RNA,用RT—PCR从中扩增出MAGE—A9 cDNA,插入载体pMD18-T中.测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE—A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后.制备抗MAGE—A9单抗.免疫组化检测MAGE—A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果:获得MAGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,SDS—PAGE分析其相对分子质量为35kD。获得抗MAGE—A9单抗,MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21%(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性,统计学分析MAGE—A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论:有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE—A9抗原,且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性.MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。 相似文献
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目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)基因的表达与患者对长春碱类药物化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据.方法:共入选35例NSCLC患者,随机分入长春瑞滨(NVB)联合顺铂(PDD)或卡铂(CBP)组成NP方案化疗组和吉西他滨(GEM)联合PDD或CBP组成GP方案组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA的表达,以Western blot检测β-tubulin-Ⅲ蛋白的含量. 结果:NP组19例,GP组16例,两组患者临床特点无明显差别,对化疗总的有效率相似,在NP组内,有效10例,无效9例,有效患者的肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA测量值为4.8±1.9,而无效患者为15.8±8.0,两者有显著性差异(P<0.01);有效患者β-tubulin-Ⅲ蛋白的测量值为3.7±1.5,无效患者为13.5±6.2(P<0.01).GP组7例无效,9例有效,有效与无效患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ mRNA和β-tubulin-Ⅲ蛋白表达均无显著性差异(P>0.05).结论:NSCLC患者肿瘤组织中β-tubulin-Ⅲ基因的表达与患者对长春碱类药物的敏感性有关,β-tubulin-Ⅲ基因高表达,提示对长春碱类药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗. 相似文献
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目的:观察不同年龄组小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4(TLR2/4)表达水平的差别,以及该细胞在脂多糖(LPS)刺激下,炎症因子TNF-α分泌水平的差别。方法:采用real-time PCR和流式细胞技术,检测低龄组和高龄组小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平的差异;同时检测1μg/mL大肠杆菌(E.coli)LPS或1mg/L牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)LPS刺激后,两组细胞TLR2/4表达水平的变化;采用ELISA技术检测炎症因子TNF-α分泌水平的变化。结果:刺激前,两组细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平均无明显差别。E.co-li LPS或P.gingivalis LPS刺激后,低龄组细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达水平均明显高于高龄组(P〈0.05),其分泌的TNF-α水平也显著高于高龄组(P〈0.05)。结论:年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平没有显著影响,但增龄性变化可能导致TLR2/4功能的减退。 相似文献
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目的:研究1,25(OH)2D3缺乏对小鼠下颌体及髁突骨形成的影响及机制。方法:利用组织化学、免疫组织化学和western-blot等方法比较分析6周龄野生型(WT)和1α(OH)ase-/-小鼠髁突的骨形成及其与下颌体骨形成的差异。结果:与WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠髁突骨量明显增加,ALP和I型胶原的阳性面积也明显增加,而下颌体的骨量明显减少,ALP和I型胶原的阳性面积明显减少。1α(OH)ase-/-小鼠的下颌体PTHR和IGF-1蛋白表达水平轻度减少,而在髁突中PTHR和IGF-1蛋白表达水平明显增加。结论:内源性1,25(OH)2D3在小鼠下颌体骨形成中发挥了重要作用,PTH通过和PTHR结合在IGF-1的介导下在髁突骨形成中发挥重要作用。 相似文献
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目的:观察rhTGF-β1对rhIL-1α作用下大鼠髁突软骨细胞蛋白多糖4(PRG4)表达的影响.方法:酶消化法获取髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定.细胞上清液中加入10 ng/ml的rhIL-1α,48 h后加入10 ng/ml的rhTGF-β1.不同时间点应用RT-PCR检测PRG4 mRNA的表达情况,ELISA法检测PRG4蛋白的分泌变化.结果:加入rhIL-1α 24、48、72 h组的PRG4表达量与对照组均有统计学差异(P<0.05),且逐渐降低.48 h组再加入rh TGF-β1 24h后PRG4表达量与对照组无统计学差异(P>0.05),而48 h后与各组均有统计学差异(P<0.05),且最高.结论:rhTGF-β1可以上调髁突软骨细胞PRG4的表达,且可逆转IL-1α的下调作用. 相似文献
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目的: 探索并鉴定甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone related protein,PTHrP)与Bmi-1的结合作用,为进一步研究PTHrP相关信号转导通路提供线索?方法:应用RT-PCR方法体外扩增鼠源性PTHrP基因,经测序后重组人原核表达载体pGEX-2TK,将构建正确的pGEX-2TK/mPTHrP原核表达载体转化E.coli BL21,IPTG诱导表达?表达产物经活性鉴定,通过体外GST pull-down技术和免疫印迹实验,检测PTHrP与Bmi-1蛋白的相互作用?结果:成功构建和表达了重组载体pGEX-2TK/mPTHrP;通过体外蛋白质结合实验证实了PTHrP与Bmi-1蛋白可以相互作用?结论:PTHrP与Bmi-1蛋白之间存在相互作用,此结果为研究PTHrP介导的下游信号转导通路的机制奠定了基础? 相似文献
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目的:研究 Notch1在大鼠舌癌模型发生发展过程中的表达变化。方法:将40只 SD 大鼠随机分为对照组(A 组10只)和实验组(B、C、D组各10只),使用质量百分比浓度为0.004%的4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO)饮用水喂养实验组 SD大鼠,用蒸馏水喂养对照组 SD大鼠。B、C、D组分别于8、16、24周取大鼠舌体组织;A 组在8、16、24周同时各取3只、3只、4只作为正常对照。行常规组织学观察,并使用免疫组织化学法检测 Notch1在病变不同阶段的舌粘膜内的表达。结果:4NQO可以有效诱导大鼠舌黏膜鳞状细胞癌的发生。在不同的给药时间点,可以诱导大鼠舌黏膜产生不同程度的癌前病变。Notch1在正常舌黏膜、癌前病变、舌鳞癌中的表达逐渐增高(P<0.01)。随着异常增生程度的增加,阳性表达部位逐渐由基底层向表层扩展,且 Notch1的膜型表达逐渐增多。结论:Notch1的高表达及其在细胞膜上的集中表达可能与舌癌的发生、发展过程相关。 相似文献
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目的构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,稳定转染小鼠成纤维细胞(NIH3T3)并检测其表达,为使用细胞因子拮抗剂基因治疗牙周炎奠定实验基础。方法Trizol法提取人乳腺癌组织总RNA,RT-PCR方法扩增目的基因。胶回收、纯化后产物与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序鉴定正确后将重组克隆载体与真核表达质粒pEGFP-N1分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,体外连接。重组DNA转化感受态细菌E.coliTOP10,筛选阳性克隆并鉴定。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA由脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选20d,RT-PCR检测基因的表达,ELISA检测蛋白的表达。结果重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra经PCR及双酶切鉴定均证实人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。稳定转染NIH3T3细胞后,RT-PCR得到目的基因片段,ELISA检测到目的蛋白的表达。结论本实验成功构建了编码人IL-1ra基因的重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,并获得了稳定表达目的蛋白人IL-1ra的NIH3T3细胞系,为牙周炎基因治疗的后续研究奠定了实验基础。 相似文献