装潢居室空气中挥发性化学物的遗传毒性研究

目的探讨装潢居室空气中挥发性化合物的遗传毒性.方法采用小鼠骨髓嗜多染性红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验检测居室装潢后空气中挥发性化合物的遗传毒性.结果该化合物对小鼠呼吸系统有明显的刺激作用,与阴性对照组比较,高、中、低剂量组的微核率、精子畸形率均有显著差异性.结论居室装潢后室内空气中挥发性化合物具有遗传毒性作用.     

含Arg-Gly-Asp肽与仿生PLGA-(ASP-PEG)材料结合的实验研究

设计合成含Arg-Gly-Asp[Arg(R)-精氨酸,Gly(G)-甘氨酸,Asp(D)-天冬氨酸]的非病毒基因载体的肽(K16-GRGDSPC) (K-赖氨酸,S-丝氨酸,P-脯氨酸,C-半胱氨酸),用其作材料聚(丙交酯-co-乙交酯)-(天冬氨酸-聚乙二醇)交替预聚物[PLGA-(ASP-PEG)]的表面修饰.合成K16-GRGDSPC, 将PLGA-(ASP-PEG)制成A、B、C三块薄片.薄片 A 、B与交联剂反应,反应后的薄片A再与肽反应,薄片 C作为对照.质谱仪(MS)、高效液相色谱分析仪(HPLC)检测肽的分子量及纯度;x线光电子能谱法(XPS)检测材料表面硫元素;分光光度仪检测残液未反应肽含量.HPLC检测肽的纯度为94.13%,MS检测肽分子量为2741.26.XPS检测改性薄片A中硫元素结合能为164 eV,碳、硫元素的含量比值(C/S)为99.746:0.1014;反应后薄片 B中硫元素结合能为162 eV与 164 eV,C/S为99.574:0.4255; 薄片 C中无硫元素.残液管OD值为0.069, 薄片A表面接枝肽密度为0.04 mg/mm2.提示通过交联剂可将所合成的肽K16-GRGDSPC结合到仿生材料PLGA-(ASP-PEG)表面.     

黄芪皂苷对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫增强作用

目的：研究黄芪皂苷（AS）增强巨噬细胞的免疫作用，探讨其调节机体免疫功能的机理。方法：在体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中加入不同浓度的AS后，观察其对巨噬细胞一氧化氮（NO）合成及对肿瘤细胞杀伤活性的影响；透射电子显微镜观察巨噬细胞的超微结构改变；应用激光扫描共聚焦显微术，结合特异性荧光探针Fluo-3／AM、观察AS引起巨噬细胞内Ca^2＋的变化。结果：50～800μg／ml AS作用细胞24小时后，NO分泌量增加，杀瘤活性加强，且呈量-效依赖关系；400蜡／ml AS作用细胞24小时后，透射电子显微镜观察可见细胞表面突起增多、增粗、增长；滑面内质网、溶酶体增多；50—800μg／ml AS作用细胞4小时后，细胞内Ca^2＋的浓度升高，并与药物浓度呈正相关。结论：AS能增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫作用；细胞内Ca^2＋浓度的升高可能是AS激活巨噬细胞，发挥免疫调节作用的机理之一。     

小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定

目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。     

大鼠肺纤维化形成中肺巨噬细胞增殖和凋亡的变化

目的:观察肺纤维化形成过程中,肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化。方法:气管内滴注平阳霉素(BLMA₅)(5mg/kg),观察注后14d和30d组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化以及细胞的MTT活力。结果:(1)BLMA₅14d组和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数分别多于sham14d和30d组,(分别P＜0.01,P＜0.05);但BLMA₅30d组的细胞数明显少于BLMA₅14d组(P＜0.05);(2)BLMA₅14d组巨噬细胞增殖指数高于sham14d组(P＜0.05),而BLMA₅30d组增殖指数低于sham30d组(P＜0.05);(3)BLMA₅14d和30d组凋亡细胞数分别多于sham14d和30d组(均P＜0.01),但BLMA₅14d组少于BLMA₅30d组(P＜0.05);(4)BLMA₅14d和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数MTT活力分别高于sham14d和30d组,分别P＜0.01,P＜0.05。结论:在肺纤维化形成过程中,肺巨噬细胞增殖能力先增强后减弱;而肺巨噬细胞凋亡始终增加,上述变化是导致肺巨噬细胞数量和功能变化的因素之一。     

生物工程技术制备人源抗-HBs Fab 片段

目的：用生物工程技术制备人源性抗-HBsFab。方法：将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBsFab基因克隆入pBAD/gⅢA载体，进而转化Tpo10大肠杆菌，对重组质粒菌发酵表达后，利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白。对所得包涵体依次变性，溶解，纯化后，利用透析进行复性，用Western blot检测Fab蛋白的特异性，Dot blot测定其生物学活性。结果：经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白，有较好的生物学活性，并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后，也可得到少量有活性的蛋白，但比例很小。结论；用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBsFab片段，发酵培养后，经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白。为人源抗-HBsFab片段的大量制备提供了有效手段。     

L-选择蛋白在小鼠肝癌细胞高低转移株HCa-F、HCa-P的表达及与肿瘤转移潜能的相关性

目的　探讨经淋巴道转移的小鼠肝癌细胞高低转移株HCa F、HCa P淋巴道转移能力及与淋巴细胞归巢受体L 选择蛋白的相关性。方法　应用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测小鼠肝癌HCa F、HCa P细胞表面L 选择蛋白的表达情况 ,再通过E 、P 、L 选择蛋白的抗体对细胞粘附实验的影响检测HCa F、HCa P细胞淋巴道转移潜能与L 选择蛋白的相关性。结果　L 选择蛋白在HCa F、HCa P细胞表面均有表达 ,且HCa F细胞的表达量明显高于HCa P细胞 (P <0 .0 1) ,HCa F细胞与淋巴结之间的粘附可被抗L 选择蛋白的抗体所阻断。结论　小鼠肝癌细胞高低转移株HCa F、HCa P细胞均表达L 选择蛋白 ,其程度与该细胞的淋巴道转移潜能正相关     

孕妇生殖道支原体感染的实验室诊断及方法学评价

目的探讨孕妇生殖道支原体感染的实验室诊断及方法学评价，以寻找一种适合孕期常规查体的方法。方法2004年1月至2004年6月，检验科随即机对200名孕妇的阴道分泌物同时运用超高倍显微镜、支原体（Uu、Mh）分离鉴定试剂盒及聚合酶链反应（PCR）技术进行支原体检测。结果方法一：超高倍显微镜检测阳性率29.5％（59／200）。方法二：支原体（Uu、Mh）分离鉴定试剂检测阳性率25％（50／200）。方法三：PCR检测阳性率18．5％（37／200）。应用SPSS软件包分析：方法一与方法二无显著差异（P〉0．05），方法一与方法三有显著差异（P〈0．05）。结论超高倍显微镜在孕妇生殖道的支原体活体检测方面有一定的诊断价值，其准确性较PCR技术有一定的差距，建议用于病原微生物的初筛诊断试验，确诊应与临床表现和其他确诊试验相结合。     

抗原致敏DC与CIK共培养体外抗肾癌效应的研究

目的： 探讨肾癌(RCC)抗原致敏树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养后的DC-CIK细胞对RCC的杀伤活性。 方法： 将健康成人外周血单个核细胞（PBMC）来源的DC经RCC(786-0细胞株)抗原致敏后与同源CIK细胞共培养，实验分3组：RCC抗原致敏DC与CIK共培养组（A组），未致敏DC与CIK共培养组（B组），单纯CIK组（C组）。流式细胞仪检测DC及CIK免疫表型。MTT法检测3组效应细胞对786-0细胞杀伤活性。 结果： 效靶比 20∶1 时，A、B、C组对786-0细胞杀伤活性分别为（70.64±8.26）%、（53.40±7.33）%、（46.64±6.01）%，各组比较差异显著（P<0.05）；以前列腺癌PC3细胞作靶细胞对照，A组对786-0及PC3细胞的杀伤活性有显著差异（P<0.05）。 结论： RCC抗原致敏DC与CIK共培养后的DC-CIK细胞可明显提高CIK细胞对RCC的杀伤特异性和杀伤活性。     

华北地区汉族群体15个短串联重复序列基因座遗传多态性分析

目的调查华北地区汉族人群15个短串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)基因座遗传多态性分布和群体遗传学数据。方法应用毛细管电泳技术和五色荧光复合扩增的方法,检测597名汉族无关个体的15个STR基因座基因型。结果15个STR基因座的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,所检测的15个STR遗传标记均具有高度多态性,杂合度均超过0.62,15个基因座的个体识别力在0.802~0.967之间,非父排除率在0.320~0·697之间,匹配概率在0.033~0.198之间。15个基因座的累积个体识别能力为0.999999以上,累积非父排除率为0.99999571,累积匹配概率为8.93×10-18。结论联合检测15个基因座可为亲缘鉴定和个体识别提供可靠的法医学证据,这15个STR基因座适用于中国人群的法医物证学检验。