胰蛋白酶差速脱壁法分离纯化人表皮干细胞

背景：表皮干细胞对于修复皮肤缺损具有重要意义，但如何方便、快捷地对所获取的表皮干细胞进行纯化培养一直没有比较好的技术方法。目的：拟应用胰蛋白酶差速脱壁法去除表皮干细胞中混杂的成纤维细胞。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006-06／2007—06在解放军军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室完成。材料：实验所用皮肤来源于20～30岁女性乳房缩小整形术患者，由北京协和医院整形外科提供。方法：无菌条件下切取皮肤，剪除皮下脂肪组织，采用胶原酶／Dispase酶和胰蛋白酶两步法体外分离培养表皮干细胞。待细胞生长达70％～80％融合时，加入胰蛋白酶消化尚未脱壁的细胞，30s～1min后吸出脱壁细胞，同法传代培养至第5代细胞。主要观察指标：第1，5代表皮干细胞表面标志CD29、CD49f、CD71的表达。流式细胞仪检测第5代细胞生长周期。免疫荧光检测第5代表皮干细胞和传代时胰蛋白酶消化30s～1min即脱壁细胞角蛋白19及波形蛋白的表达。透射电镜观察表皮干细胞超微结构。结果：第1代表皮干细胞CD29阳性率94．32％，CD49f阳性率86．24％，CD71呈弱阳性，经过4次胰蛋白酶差速脱壁去除混杂细胞后，第5代表皮干细胞CD29阳性率96．77％，CD49f阳性率96131，CD71呈弱阳性，82．58％表皮干细胞处于G0～G1期。第5代表皮干细胞角蛋白19呈阳性，波形蛋白呈阴性，而传代时胰蛋白酶消化脱壁的细胞角蛋白19呈阴性，波形蛋白呈阳性，证实为成纤维细胞。表皮干细胞呈克隆样生长，透射电镜下胞质中可见呈束状排列的角蛋白丝。结论：应用胰蛋白酶差速脱壁法能够简单、有效地获取纯化的表皮干细胞。     

药源性锥体外系不良反应

药源性锥体外系不良反应，为药物导致纹状体一黑质通路中多巴胺（DOpamine,DA）减少或多巴胺受体阻滞所致。其不良反应可分为四种临床类型：①震颤麻痹型（帕金森综合征）；②静坐不能症；③急性肌张力不全综合征；④迟发性运动困难。鉴于导致该不良反应除胃复安外，其他药物所致者也与日俱增，现分述如下。1吗丁啉吗丁啉是一种苯并咪唑类衍生物，主要成分为多潘立酮，能增加食道括约肌的张力，促进胃的排空，是一种新型的胃动力药。由于不易透过血脑屏障，不易产生中枢的不良反应，临床常用。但其中枢神经的不良反应也屡有报道，如刘传五…     

颈椎手术96例早期并发症分析

目的：分析颈椎手术早期并发症的发生原因及处理方法。方法回顾性分析96例颈椎手术患者的临床资料,其中脊髓型颈椎病56、颈椎骨折脱位21例、颈椎肿瘤11例、寰枢椎脱位5例、Chiari 畸形3例;颈椎前路手术57例、后路手术24例,前后联合手术15例,分析早期并发症发生率、发生原因及其对策。结果96例颈椎手术中27例出现并发症,发生率为29．2％,其中死亡1例,切口血肿2例,切口感染4例,脊髓或神经损伤3例,脑脊液瘘3例,喉返神经损伤2例,喉上神经损伤2例,肺部感染5例,尿路感染4例,无食管瘘及椎动脉损伤病例。前路手术并发症发生率24．6％（14/57）,后路手术并发症发生率36．8％（7/19）,联合入路手术并发症发生率40．0％（6/15）。结论颈椎手术早期并发症较多,严格掌握手术适应证,提高手术技巧,准确进行术前评估,精心术后护理,是减少颈椎手术后并发症的重要措施。     

数字技术在人工髋关节置换术中的应用

目的探讨数字化骨科技术在人工髋关节置换术中的应用。方法自2013-01—2013-12对12例髋关节周围疾病需要行人工髋关节置换术者采用计算机软件技术,术前将CT扫描数据导入Mimics软件建立骨盆和股骨近端的三维模型,计算机辅助分析髋臼及股骨近端的情况,确定合适的假体大小,并在计算机上模拟假体安装的手术过程,最后按照预定的手术方案实施手术。结果所有患者均获得随访6-10个月,平均8个月。末次随访时髋关节功能Harris评分：优6例,良5例,可1例。结论计算机三维重建、计算机辅助分析和模拟人工髋关节置换过程能提高手术的准确性和安全性,在人工髋关节置换术中具有良好的应用价值。     

黄芩苷衍生物的合成及其生物活性研究

目的为改善黄芩苷的溶解性,设计合成系列黄芩苷衍生物,并评价其抗脂质过氧化活性和抗肿瘤活性。方法以黄芩苷和环氧乙(丙)烷为原料,通过羟乙基化、羟丙基化、酯化反应合成了一系列黄芩苷衍生物;分别采用生化法和台盼蓝染色法测试目标化合物对小鼠脑脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的体外抑制作用及对白血病细胞HL-60的生长抑制活性。结果合成了13个黄芩苷衍生物,其结构经1H-NMR和MS确证。其中,化合物3⁶、116、11¹3为未见文献报道的新化合物。化合物1、6对MDA的抑制作用显著,化合物713为未见文献报道的新化合物。化合物1、6对MDA的抑制作用显著,化合物7¹0、12具有中等强度的抑制HL-60生长作用。结论黄芩苷结构中的酚羟基是其抑制脂质过氧化产物MDA的活性基团,葡萄糖醛酸的6位游离羧基是能够增强化合物抗肿瘤活性的有效基团。     

粘连性肠梗阻应用手术方案治疗体会

目的：探讨手术治疗粘连性肠梗阻的临床效果。方法将80例粘连性肠梗阻患者按照抛硬币方法随机分为两组,标记为实验组、对照组。对照组40例患者使用开腹手术治疗,实验组40例患者使用腹腔镜手术治疗,比较两组患者手术时间、进食时间、术中出血等情况。结果实验组患者手术时间、进食时间均明显短于对照组,而且术中出血明显少于对照组,切口长度显著短于对照组,两组间差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组患者术后并发症发生率为5.0%;对照组患者术后并发症发生率为20.0%,两组患者在并发症方面差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论与开腹手术治疗相比,腹腔镜手术治疗粘连性肠梗阻具有很好的临床效果,可明显缩短手术时间和进食时间,明显降低术后并发症发生率,促进患者健康恢复,提高患者生活质量。     

硬化剂治疗肝硬化食管静脉曲张的护理体会

肝硬化并食管静脉曲张是一种常见的慢性肝病,是由一种或多种病因长期持续或反复作用而致的弥漫性肝脏损害。最严重的并发症是食管下段和胃底静脉曲张破裂而致的上消化道出血,发生呕血及黑便,出血量多时可引起失血性休克和诱发肝性脑病。我科对16例食管静脉曲张（EV）患者行内镜下食管静脉曲张硬化剂注射（EVS）,达到了预防和治疗出血的目的,现将护理体会报道如下。     

不同时期家兔动脉粥样硬化模型的比较

目的 从动脉粥样硬化（AS）发生进展的不同时期,对家兔模型进行比较和研究。方法 新西兰白兔30只,随机分为5组,包括对照组和模型组,模型组又分为AS 4周组、AS 8周组、AS 12周组和AS 16周组,每组6只。对照组给予普通饲料喂养,模型组给予高脂饲料喂养。分别于实验0、4、8、12、16周给各组动物称质量,耳缘静脉取血,测定血清胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HGL）含量;通过石蜡切片HE染色及冰冻切片油红O染色对胸主动脉进行病理形态学观察。结果 实验4周时,模型组家兔体质量增加值明显高于对照组,而在实验8、12、16周时,二者比较没有明显差异。血脂测定显示,模型组TC和LDL水平增加幅度较大,TG和HDL水平增加幅度较小,但是与对照组比较差异有显著性（P<0.05、0.01）。组织病理学检查结果显示,实验4周时,模型组家兔在主动脉内皮下可见少量脂质沉积,油红O染色呈红色;实验8周和12周时,处于动脉粥样硬化脂纹期的不同阶段,病灶处内皮下可见大量的泡沫细胞聚集;实验16周时,处于动脉粥样硬化纤维斑块期,病灶表层可见覆盖以纤维帽,纤维帽下有数量不等的泡沫细胞,平滑肌细胞、炎细胞等。结论 家兔单纯给予高脂饲料喂饲4～16周,可造成不同病理分期的动脉粥样硬化模型。     

偏心导杆在经皮椎间孔镜手术穿刺中的应用效果分析

目的 探讨腰椎经皮椎间孔镜手术穿刺过程中应用偏心导杆的价值。方法 选择2017年9月至2018年11月合肥市滨湖医院36例L4/5或L5/S1节段腰椎间盘突出拟行手术的患者,依据随机数字表以及随机余数分组法,分别纳入A组（普通穿刺组）、B组（偏心导杆穿刺组）,每组18例。比较两组患者的穿刺次数、时间、透视次数、术后临床症状的变化和影像学结果差异。结果 B组的穿刺次数、透视次数、穿刺置套管时间均少于A组,差异有统计学意义（P<0.05）。术后根据患者临床症状的改变和影像学改变对手术效果进行评价,两组手术效果差异无统计学意义（P>0.05）。结论 应用偏心导杆穿刺可减少经皮椎间孔镜腰椎手术穿刺时间和次数。