基于UHPLC-Q-exactive orbitrap MS和化学计量学分析的芪龙壮儿口服液质量评价研究

建立同时测定芪龙壮儿口服液中19种化学成分的UHPLC-Q-exactive orbitrap MS定量分析方法,并结合化学计量学分析比较不同批次样品的质量差异,为该制剂的质量评价提供依据。采用UHPLC-Q-exactive orbitrap MS方法测定了10批芪龙壮儿口服液中尿囊素、L-脯氨酸、焦谷氨酸、大麦芽碱、腺苷、L-苯丙氨酸、鸟苷、L-色氨酸、咖啡酸、毛蕊异黄酮苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷、芒柄花素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ和黄芪甲苷的含量,并利用Hiplot开源科研绘图平台及MarkerlynxXS软件对含量数据进行聚类热图分析、主成分分析(principal component analysis, PCA)和偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis, PLS-DA),综合评价不同批次芪龙壮儿口服液的质量差异。19个化学成分在各自浓度范围内线性关系良好(r≥0.999),精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于1.94%,平均加样回收率为...     

MAPK13调控胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化进程的机制研究

目的 本研究旨在分析丝裂原活化蛋白激酶13（MAPK13）在胆管癌组织及细胞中的表达水平并探讨其在胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）中的作用。方法 通过微阵列分析筛选胆管癌组织中差异表达的mRNA,通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白印迹及免疫组化染色验证MAPK13在肿瘤组织和细胞中的表达情况。进一步通过细胞转染构建MAPK13敲低（si-MAPK13）后,通过细胞活力实验检测胆管癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭性。最后,通过裸鼠成瘤实验检测MAPK13对体内成瘤及相关蛋白表达的影响。结果 本研究通过微阵列分析发现MAPK13在肿瘤组织中的表达存在显著差异,进一步通过qRT-PCR、蛋白印迹和免疫组化染色分析发现,与癌旁组织比较,MAPK13在mRNA和蛋白质水平的表达情况在肿瘤组织及细胞中均显著升高且差异具有统计学意义（t=27.92,6.90;均P<0.01）。进一步细胞活力检测表明,抑制MAPK13的表达后细胞增殖数量明显减少（F=32.13,P<0.01）。Transwell实验则显示细胞迁移和侵袭显著降低（F=52.88,38.14;均P<0.05）。与对照组比较,si-MAPK13组中E钙黏蛋白（E-cadherin）的表达较高,而N钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达较低,差异均具有统计学意义（F=77.00,78.73,25.9;均P<0.01）。最后裸鼠成瘤实验表明,当MAPK13的表达受到抑制后,肿瘤的体积和重量均显著低于对照组（F=8.99,73.81;均P<0.01）。结论 本研究表明,MAPK13可能通过促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭以及EMT进程,进而调控胆管癌进程。