IFN-γ、IFN-α和TNF对ECV304细胞TRAIL、DR4、DR5和Fas表达的调节作用

病毒感染常导致血管内皮细胞发生凋亡 ,引起机体出现发热、出血、休克等临床症状。TRAIL、DR4、DR5和Fas是肿瘤坏死因子及其受体超家族中参与细胞凋亡的重要分子。我们用IFN α、IFN γ和TNF刺激ECV30 4细胞 ,研究其对膜型TRAIL、DR4、DR5和Fas表达的调节作用 ,以此为模型 ,探讨急性病毒感染等疾病体内所诱导产生大量细胞因子与内皮细胞凋亡发生的关系。将ECV30 4细胞用 10 %FCSRPMI16 4 0培养基培养。调整细胞浓度为 5×10 4 /ml,铺于 2 5cm2 的细胞培养瓶中 ,培养 5h后分别加入IFN γ(5U/ml)、IFN α(2 0U/ml)和TNF…     

医学免疫学本科生理论课教学探讨

医学免疫学是医学本科生必修的一门医学基础课程,学科本身具有概念抽象、各部分内容联系密切、在细胞和分子水平发展迅速等特点,如何根据医学免疫学自身的特点和教学中存在的问题,有针对性地选择适合本学科的教学方式和手段,对于学员理解和掌握医学免疫学课程,提高教学效果至关重要,根据几年来的教学经验,就本科生的理论课教学谈几点体会。     

CD155在结肠癌组织和细胞系中的表达及临床意义

目的：探讨CD155在结肠癌组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系，检测CD155在不同结肠癌细胞的表达。方法：应用组织微阵列技术和免疫组织化学EnVision二步法，检测72例结肠癌患者的结肠癌组织和72例正常结肠组织对照中CD155的表达情况。FCM检测结肠癌细胞（Colo 205、SW 480和SW116）的CD155表达情况。结果：CD155在正常结肠组织对照中无阳性表达，在结肠癌组织中其阳性表达率为41．18％，两组之间的阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．005）。不同分化程度、不同Dukes分期结肠癌组织之间CD155的阳性表达率差异无统计学意义（P〉0．995、P〉0．750）；CD155阳性表达强度与分化程度和Dukes分期之间无相关性（P=0．665、P=0．768）。FCM检测Colo 250、SW 480和SW116结肠癌细胞的CD155阳性表达率分别为79．3％、95．1％和92．7％。结论：鉴于CD155在结肠癌组织中的高表达，可以利用CD155与NK细胞启动性受体（CD226／CD96）的结合，进一步启动NK细胞对结肠癌的活化杀伤作用，从而为结肠癌的免疫治疗提供新的思路。     

将新技术进展融入生理学教学探讨

为了使生理学学科跟上医学教育的发展,必须将各学科新技术进展融入到本科生教学中,注重学生创新意识与创新能力的培养.就流式细胞术、电子显微镜技术和小动物成像技术在生理学方面的新进展、新应用加以介绍,可为教师授课提供参考.     

超抗原SEB对CD8+T细胞凋亡诱导配体表达的影响

为了探讨超抗原SEB对CD8 T细胞凋亡诱导配体在细胞胞内和膜表面表达的影响,以SEB及PHA刺激PBMC,用免疫荧光染色结合三色流式细胞术,分析比较刺激前后PBMC中CD8 T细胞三种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF-α在细胞胞内和膜表面表达的变化.结果表明,SEB上调FasL在CD8 T细胞胞内(34.8%至42.5%)和TRAIL在CD8 T细胞膜表面(7%至20.7%)的表达,SEB还可同时上调TNF-α在CD8 T细胞膜表面(7%至45.7%)及胞内(23.9%至88.7%)的表达.说明SEB能上调不同凋亡诱导配体在CD8 T细胞膜表面或胞内的表达,这可能是SEB影响CD8 T细胞效应功能的方式之一.     

检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

带有GFP标签的汉滩病毒糖蛋白表达载体的构建

目的:构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)真核表达载体,并进行初步表达鉴定.方法:以peGFP-C1质粒为模板扩增GFP片段,将其插人真核表达载体pFLAG-CMV3中,构建成可表达带有GFP标签分泌型蛋白的载体pFLAG-CMV3-GFP.扩增HTNV-G1、HTNV-G2,分别插入上述载体,转染293T细胞,采用检测GFP标签蛋白的夹心ELISA法检测转染细胞培养上清中分泌型重组蛋白的含量.结果:酶切及测序证实带有GFP标签的HTNV-G1、HTNV-G2表达载体构建成功,分别命名为pFLAG-G1-GFP/pFLAG-G2-GFP,转染细胞的培养上清中可以检测出带有GFP标签的融合蛋白.结论:成功构建了带有GFP标签HTNV-GP的重组质粒并成功表达,为深入研究HTNV感染后机体针对HTNV-GP的特异性免疫应答规律奠定了实验基础.     

mLAIR-1分子在小鼠胸腺中的分布

目的 研究mLAIR-1分子在小鼠胸腺中的分布.方法 RT-PCR法检测mLAIR-1基因在正常小鼠胸腺细胞的表达,通过流式细胞术分析mLAIR-1在胸腺细胞发育不同阶段表达的变化,并采用免疫组织化学染色从形态学上观察mLAIR-1在胸腺的分布.结果 RT-PCR和流式细胞术的结果表明mLAIR-1在小鼠胸腺中有表达,尤其是在CD4-CD8-双阴性和CD4-CD8 单阳性阶段表达水平较高.免疫组化的结果显示该分子在胸腺的皮质区和髓质区均有表达,在皮髓质交界处以及髓质区表达更为明显.结论 mLAIR-1在小鼠胸腺细胞上有着明确的分布,并且在胸腺细胞分化发育的不同阶段具有不同的表达格局,提示该分子在胸腺的发育过程中可能有比较重要的作用.     

黑色素瘤抗原-A10蛋白在肺癌中的表达及意义

目的：观察黑色素瘤抗原(MAGE)-A10在不同类型肺癌的表达分布和临床意义。方法：应用组织芯片技术、免疫组化S-P法研究MAGE-A10在65例肺癌患者的表达情况，并分析其与病理类型、病理分级的关系。结果：MAGE-A10蛋白在小细胞肺癌、肺鳞癌和肺腺癌的阳性表达率分别为36．4％、76．5％和40．0％，在大细胞肺癌和支气管肺泡癌中未见阳性表达。MAGE-A10蛋白在小细胞肺癌与非小细胞肺癌的表达率未见差异，与肺鳞癌、肺腺癌的病理分级也无明显关系。结论：MAGE-A10分子在肺鳞癌中表达率最高，肺腺癌和小细胞肺癌次之，大细胞肺癌和支气管肺泡癌中未见表达，对鉴别诊断可能有辅助意义，并可能成为某些肺癌生物学治疗的潜在靶点。     

接触抑制下调CD112和CD155在ECV304细胞上的表达伴有对NK细胞杀伤的抵抗

目的：研究细胞培养接触抑制条件下，ECV304细胞表面CD112和CD155表达的变化及其对NK细胞杀伤敏感性的变化。方法：以ECV304细胞接触抑制为模型，应用免疫荧光染色和流式细胞术分析，观察CD112和CD155分子在对数生长状态和发生接触抑制状态ECV304细胞上表达情况的变化；采用51Cr-4h释放试验，观察NK细胞对2种状态ECV304细胞杀伤活性的改变。结果：CD112和CD155分子在ECV304细胞发生接触抑制时表达水平明显低于对数生长期细胞。NK细胞对发生接触抑制的ECV304细胞的杀伤率比对数生长期的细胞有所下降。结论：接触抑制会使ECV304细胞对NK细胞杀伤有一定抵抗，同时伴有CD112和CD155分子表达的下调，两者间是否存在因果关系值得进一步深入探讨。