急性髓系白血病细胞p16基因结构及mRNA表达分析

为了解p16基因在急性髓系白血病(AML)发病中的意义,用PCR-SSCP和Northern blot方法分析了16例AML细胞p16基因结构及mRNA的表达。研究结果表明,16例未发现p16基因的缺失、突变。初治和复发的12例AML的p16 mRNA表达水平明显低于4例长期缓解者及正常对照者。1例p53突变AML的p16 mRNA有明显升高,提示p16基因在AML发病中可能不占重要地位,而在AML细胞抑制正常造血的逐步恶化中起一定作用,在p53突变时,其表达反馈性升高显示一种反馈环路失衡。     

去乙酰化酶抑制剂诱导白血病细胞凋亡过程中Daxx的表达变化

Daxx是新近发现的细胞核内的一种新型转录调控蛋白,有研究表明它参与fas通路诱导的凋亡,我们在白血病细胞系HL 6 0和K5 6 2中观察了组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠和曲古抑菌素A (TSA)诱导白血病细胞凋亡过程中Daxx蛋白表达情况。材料和方法1　主要试剂　丁酸钠和TSA(Sigma公司产品)分别溶于磷酸缓冲液(PBS)和二甲基亚砜(DMSO)中,置于- 2 0℃冰箱。RPMI 1 6 4 0购自Gibco公司。2　细胞培养　HL 6 0和K5 6 2细胞引自中国典型培养物保藏中心。接种于含1 0 %胎牛血清、1 0 0U/ml青霉素和1 0 0μg/ml链霉素的RPMI 1 6 4 0培养液中,…     

丁酸钠诱导人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1分化作用中细胞外信号调节激酶通路的改变

本研究探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路在丁酸钠（NaB）诱导人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1分化中的作用,阐明丁酸钠诱导SKM-1细胞分化的分子机制.用Western blot方法检测总ERK和磷酸化ERK的表达水平;将ERK特异性的抑制剂PD98059与丁酸钠联合应用,观察它们对SKM-1细胞生长曲线的影响及分化效应,并用Western blot方法检测P21和组蛋白脱乙酰酶（HDAC）蛋白质的表达水平.结果表明：SKM-1细胞经1mmol/L的丁酸钠作用后,总ERK的表达水平未发生变化,而磷酸化ERK的表达水平下降;丁酸钠及丁酸钠＋PD98059均可以上调P21和HDAC蛋白质的表达水平,且丁酸钠联合PD98059的作用强于丁酸钠单用.结论：ERK通路抑制是丁酸钠诱导SKM-1细胞分化的重要分子机制.     

川芎嗪对急性放射性损伤小鼠骨髓单个核细胞淋巴细胞功能相关抗原-1表达的作用研究

目的:检测川芎嗪对急性放射性损伤小鼠骨髓单个核细胞淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达变化的影响,探讨放射损伤后骨髓造血功能恢复的可能机制.方法:42只小鼠随机分为正常组、对照组和川芎嗪组.对照组和川芎嗪组首先进行总剂量为6.0 Gy 60Coγ射线一次性全身均匀照射;照射后川芎嗪组每只小鼠立即喂饲盐酸川芎嗪注射液2 mg,对照组喂饲生理盐水0.2 ml,均每日2次.照射后第7、14和21 d测定各组小鼠的外周血细胞计数、骨髓单个核细胞计数、骨髓巨核细胞计数、骨髓造血组织面积和骨髓单个核细胞LFA-1的表达水平.结果:照射后第7、14和21 d川芎嗪组外周血细胞计数、骨髓单个核细胞计数、巨核细胞计数和骨髓造血组织面积均显著高于对照组(P<0.05或 P<0.01);7 d和14 d川芎嗪组及对照组骨髓单个核细胞LFA-1表达水平呈进行性增高,且川芎嗪组LFA1表达水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);21 d川芎嗪组骨髓单个核细胞LFA-1的表达水平已开始下降,且低于对照组(P<0.05).结论:急性放射损伤早期骨髓单个核细胞LFA-1呈高表达;川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓造血功能恢复起促进作用的机制之一可能是通过增强受照射小鼠骨髓单个核细胞LFA-1表达实现.     

Sonic hedgehog信号通路对AGM区来源的成血-血管细胞增殖、迁移和分化作用

目的探讨Sonichedgehog（Shh）信号通路对小鼠主动脉-中肾-肾上腺（AGM）区来源的成血．血管细胞增殖、分化和迁移的影响。方法联合应用抗小鼠CD34、Flkl单克隆抗体（单抗）的磁珠，从孕11dBALB／c鼠胚胎AGM区分离培养成血-血管干细胞，并同时培养AGM区来源基质细胞，用流式细胞术对所分离细胞进行表型鉴定。用免疫组织化学法检测基质细胞表达Shh蛋白的情况；借助TransweU细胞共培养体系，观察在AGM的基质细胞共培养体系中，不同浓度的Shh活性肽及其单抗对成血．血管干细胞增殖、细胞周期、迁移及向内皮细胞定向分化的影响。结果AGM区基质细胞高表达Shh蛋白（阳性率高达90％以上），并可促进成血-血管干细胞增殖，其增殖效应可被10．00μg／mlShh单抗阻断；0．10-10．00μg／ml外源性Shh活性蛋白与AGM区基质细胞共培养的成血-血管干细胞，可使成血．血管干细胞长时间增殖，并促进细胞迁移，但并不诱导细胞凋亡与分化；而当0．10-10．00μ／ml外源性Shh活性蛋白作用于单独培养的成血-血管干细胞，细胞经过短时间增殖后，随后发生凋亡并向内皮细胞分化。结论Shh信号通路参与了成血-血管干细胞的增殖、分化、凋亡及迁移等生物学特性的调控，但其具体作用存在时空的差异，AGM区微环境对Shh信号通路具有整合和调试的作用。     

Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂作用下K562细胞凋亡的影响

为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1／2反义寡核苷酸转染K562细胞后对顺铂诱导凋亡的影响，采用流式细胞术检测顺铂作用下K562细胞周期变化；以脂质体作为载体，转染Chk1／2反义寡核苷酸于K562细胞，用Western blot和共聚焦显微镜检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后Chk1／2蛋白表达；用流式细胞术检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后顺铂作用下细胞凋亡率。结果发现，10μmol／L顺铂作用下K562细胞出现S期阻滞，Chk1／2反义寡核苷酸对K562细胞中Chk1／2蛋白表达有明显抑制作用，转染Chk1／2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K562细胞凋亡率，Chkl和Chk2联合转染作用优于单独转染。结论：Chk1／2可作为白血病增敏治疗的有效靶点。     

髓系白血病原代细胞和肿瘤细胞株ATM转录水平的研究

共济失调毛细血管扩张症(ataxiatelangiectasis,AT)是一种罕见的常染色体隐性遗传病,以进行性中枢神经元变性、免疫缺陷、对放射线及其类似药敏感及患癌率高为特点。1995年Shilob确定AT为单基因遗传病,指出它是由于AT基因突变所致,并将此致病基因命名为ATM (ATmutated)。在淋巴细胞白血病中,有ATM基因普遍存在缺失的报道,同时伴随ATM蛋白表达的降低和缺失[1 5] 。在髓系白血病中,ATM的表达率未见报道,为此,我们重点研究了ATM基因在髓系白血病中的表达谱情况。对象和方法1　研究对象　2 2例白血病患者,其诊断符合FAB协作组诊断标…     

Multiple defects of cell cycle checkpoints in U937-ASPI3K, an U937 cell mutant stably expressing anti-sense ATM gene cDNA

Ataxia--telangiectasia(AT)isanautosomalre-cessivemultisystemdisordercausedbytheheterozy-gousorhomozygousmutationofATMgene(ATrnutant).Atthecellu1arlevel,itischaracterizedbyhypersensitivitytoradiationorradiation--mimiccytcrtoxicagentsandinefficientcelIcycIecheckpointacti-vation[]'2J.ATMgeneencodesa350kdnuc1earphosphoproteinthatcontainsatitsCOOHterminusaphosphatidylinositol3kinase(Pl3K)catalyticdo-main.ATMproteinfunctionsincontrollingcellcyclecheckpointsinrespondingtoDNAdamageandpro-tect…     

重组人血小板生成素的临床应用观察

目的:评价沈阳三生制药厂的重组人血小板生成素(rhTPO)对患者血小板减少的疗效和安全性。方法:11例血液恶性肿瘤患者和9 例难治性ITP患者皮下注射rhTPO1.0g/(kg·d),动态监测注射后血小板增长情况。结果:肿瘤化疗组使用rhTPO 9 d后,血小板计数较对照组明显升高(P<0.05),血小板恢复至100×109/L需19±9.4 d,较对照组24±6.2天明显缩短。难治性ITP组显效6例,良效3例,总有效率100%。无明显不良反应。结论:rhTPO对化疗后骨髓抑制引起的血小板减少及难治性ITP患者的严重血小板减少有促进血小板生成作用,无明显不良反应。     

用共聚焦显微镜研究plk1在秋水仙胺和长春新碱抗肿瘤效应中的作用

目的：研究plk1在秋水仙胺和长春新碱抗肿瘤效应中的作用。方法：采用Western blotting和共聚焦显微镜检测秋水仙胺、长春新碱及plk1 反义寡核苷酸（Asodn）处理对K562细胞plk1及γ微管蛋白表达的影响。结果：Western blotting 检测结果提示秋水仙胺和长春新碱不影响plk1和γ微管蛋白的表达量，但共聚焦显微镜观察发现秋水仙胺和长春新碱影响plk1在分裂期聚集和中心体形成。plk1 Asodn处理不仅可明显降低plk1蛋白表达，而且影响γ微管蛋白聚合形成中心体。结论:秋水仙胺和长春新碱抗肿瘤效应可能是通过plk1介导的抑制γ微管蛋白聚合形成中心体来实现的,plk1具有作为肿瘤治疗靶点的可能性。