三七不同部位提取物体外抗氧化功效研究

目的:研究三七不同部位提取物的抗氧化功效,为三七化妆品原料的开发提供实验依据.方法:采用超氧阴离子自由基清除活性实验及羟自由基清除活性实验检测三七根、茎、叶、花提取物对超氧阴离子自由基及羟自由基的清除活性,依据自由基清除率计算半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50).采用H2O2诱...     

滇细辛水提取物小鼠灌胃给药毒性和体内抗炎活性研究

目的 考查滇细辛水提取物小鼠灌胃给药急性毒性和体内抗炎作用。方法 采用近似最小致死量联合最大耐受量法测定小鼠灌胃给药急性毒性反应;采用巴豆油致小鼠耳廓肿胀实验、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验、以及大鼠植入性棉球肉芽生成实验,评价滇细辛水提取物体内抗炎效应。结果 小鼠急性毒性实验结果表明：①滇细辛水提取物小鼠灌胃给药最小致死量为15.12g/kg（折算为77.62g生药/kg）,最大耐受量为13.62g/kg（折算为69.92g生药/kg）;②给药后3、7、14d,与溶媒组比较,滇细辛水提取物各给药组动物体重无明显差异;③实验结束后解剖发现,滇细辛水提取物各给药组部分动物肾脏颜色变浅。体内抗炎实验结果表明：①与溶媒组比较,滇细辛（0.84g/kg,折算为4.31g生药/kg）明显降低巴豆油致炎小鼠耳廓肿胀度。②角叉菜胶致炎60、120、240、360min时,滇细辛（0.84g/kg,折算为4.31g生药/kg）明显降低角叉菜胶致炎大鼠足趾肿胀度。③与溶媒组比较,滇细辛（0.42、0.84g/kg,折算为2.16g生药/kg、4.31g生药/kg）对大鼠植入性棉球肉芽重量无明显影响。结论 滇细辛水提取物存在一定毒性,且其主要毒性靶器官为肾脏。滇细辛水提取物对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀等急性、亚急性炎症具有明显抑制作用,而对大鼠植入性棉球肉芽所致慢性炎症无明显抑制作用。     

三丫苦茎总提取物及分段样品抗菌活性研究

云南省药物研究所/云南白药集团创新研发中心/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室,云南 昆明 650111     

阿德福韦膦酸酯衍生物的肾毒性及抗HBV活性评价

目的 研究单非甾体抗炎药羧酸酯衍生物阿德福韦单硫代L-氨基酸酯的肾细胞毒性及抗HBV活性.方法 采用HK-2人肾小管上皮细胞株,从细胞形态学、细胞生长和增殖活性及细胞结构损伤检测几方面评价了目标化合物的肾细胞毒性;采用HepG2.2.15细胞株,从细胞毒性与HBV-DNA抑制率方面评价了目标化合物抗HBV的作用效果.结果 化合物均具有不同程度抗HBV的活性,其中,5a、5c、5e活性较强(EC50为22.73 ～ 29.72 μmol·L-1);化合物5c、5d作用24、48 h后对HK-2细胞产生的形态学改变、细胞毒性(IC50＞1 mmol·L-1)及不同浓度下LDH释放率均明显优于阳性对照Adefovir dipivoxil作用细胞24、48 h后的形态学、细胞毒性(827.18、446.99 μmol·L-1)及LDH释放率.结论 设计的化合物5c、5d具有抗病毒活性及较低的肾细胞毒性,有进一步研究的价值.     

一种高纯度和高活力的大鼠脑微血管内皮细胞的提取及原代培养方法

目的建立一种纯度和活力较高、简单实用的大鼠脑微血管内皮细胞分离及原代培养方法,为建立体外血脑屏障提供材料。方法采集1-2周SD大鼠大脑皮质,应用Ⅱ型胶原酶和分散酶/胶原酶连续消化法,筛网过滤法及20%BSA和44%Percoll两次梯度离心法获得脑微血管段后,接种于培养瓶中进行原代培养,采用倒置显微镜对所培养的细胞进行形态学观察,以Ⅷ因子相关抗原免疫染色法对其进行鉴定。结果体外培养2 h后,微血管内皮细胞爬出血管段进行贴壁生长,3⁴ d呈典型的铺路卵石样结构,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达呈阳性,可见细胞胞质呈棕色,阳性细胞占99%以上。结论该方法能成功地分离并培养出高纯度的大鼠脑微血管内皮细胞,对体外血脑屏障的建立以及脑微血管内皮细胞的生物学特性和功能的深入研究具有重要意义。     

不同温度及pH值对人结肠腺癌细胞模型的影响

目的:建立人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞模型并对其药物研究的方法进行初步探讨。方法:通过测定跨细胞膜电阻(TEER)、荧光素通透量及碱性磷酸酶(AKP)评价Caco-2细胞模型,用MTT法考察HBSS缓冲液在不同pH值、不同温度及不同时间条件下对Caco-2细胞的毒性。结果:各项指标的测定值符合要求,表明本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性和通透性良好;进行药物Caco-2细胞吸收潜性研究时,药物作用4 h之内对Caco-2细胞模型没有影响。结论:建立的Caco-2细胞模型可用于药物吸收机制研究。     

黔产钩藤药材茎枝和叶的HPLC指纹图谱比较

目的:比较黔产钩藤带钩茎枝和叶的HPLC指纹图谱,分析二者化学成分的差异,为钩藤叶的后续研究提供实验依据。方法:采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版计算钩藤带钩茎枝和叶各10批样品的HPLC指纹图谱的相似度,以钩藤碱和异钩藤碱为指标成分进行指纹图谱比较,色谱条件为Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.02%氨水(B)梯度洗脱(0~45 min,30%~60%A;45~75 min,60%~64%A;75~90 min,64%~70%A;90~95 min,70%~70%A),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长245 nm,进样量10μL。结果:确定了16个共有峰构成10批钩藤茎枝药材的特征指纹图谱,各批样品的相似度均>0.87;16个共有峰构成10批钩藤叶特征指纹图谱,各批样品的相似度均>0.80。结论:钩藤叶中异钩藤碱含量高于钩藤茎枝,但二者含有的钩藤碱含量相差不大。建立的指纹图谱条件能用于比对钩藤茎枝和叶中主要化学成分,为钩藤叶的药用研究提供参考。     

灯盏乙素苷元4’-N-取代氨甲基苯甲酸酯-7-取代烟酸酯衍生物的合成与体外抗氧化活性研究

本研究以灯盏乙素苷元,N-取代氨甲基苯甲酸以及6-取代烟酸为原料,在偶联剂DCC/DMAP的作用下经4步反应制备了灯盏乙素苷元4’-N-取代氨甲基苯甲酸酯-7-取代烟酸酯衍生物1a~1f,并经1H NMR,ESI-MS以及HRMS确证结构。对化合物1a~1f进行了神经细胞氧化损伤保护活性与理化性质研究,结果显示,烟酸酯结构的引入能够提高化合物抗氧化活性以及水溶性,其中化合物1d具有较高的水溶性、体外稳定性及抗氧化活性,值得进一步研究。     

万丈深提取物对脾虚模型小鼠健脾消食作用研究

目的 制备小鼠脾虚模型,探讨万丈深Crepis phoenix Dunn.提取物的健脾消食作用。方法 将实验动物随机分为空白组、模型组、阳性对照（参苓健脾胃颗粒10.3 g·kg^–1）组、万丈深水提物（1.0、2.0、4.0 g·kg^–1）剂量组、万丈深醇提物（1.0、2.0、4.0 g·kg^–1）剂量组,除空白组外,其余各组小鼠采用大黄联合番泻叶灌胃诱导小鼠脾虚证候模型。造模成功后,各组小鼠以20 mL·kg^–1灌胃给予相应样品,1次/d,连续7 d。以小鼠体质量、自主活动量、体温、食物利用率、脾脏指数、胃排空率、小肠推进率、胃肠激素等为指标,评价万丈深的健脾消食作用。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量增长量、食物利用率、体温、自主活动量、血清胃动素（MTL）水平、血清胃泌素（GAS）水平、胃排空率、脾脏指数降低,血清血管活性肠肽（VIP）水平、小肠推进比升高,表明小鼠脾虚证候模型制备成功。与模型组比较,万丈深水提物对小鼠体质量增长量、食物利用率、体温、脾脏指数具有明显的改善作用,但对小鼠自主活动量、血清MTL水平、血清GAS水平、血清VIP水平、胃排空率、小肠推进比无明显改善;万丈深醇提物对小鼠体质量增长量、食物利用率、自主活动量、血清MTL水平、血清VIP水平、胃排空率、小肠推进比、脾脏指数具有明显的改善作用,但对小鼠体温及血清GAS水平无明显改善。结论 万丈深具有明显的健脾消食作用,且醇提物的健脾消食作用优于水提物,其机制可能与调节胃肠激素及免疫力有关。     

取代非环核苷混膦酸酯类衍生物的合成及生物活性

为寻找抗乙肝病毒(HBV)取代非环核苷混膦酸酯有效的结构优化策略。以阿德福韦单L-氨基酸酯和单非甾体药物羧酸酯为先导化合物,结合核苷类似物阿巴卡韦与阿拉莫韦的结构特征,采用亚结构拼合原理设计并合成了6-取代嘌呤非环核苷膦酸单L-氨基酸酯、单非甾体药物羧酸酯前药(9a~9l),其结构经¹H NMR,ESI-MS,ESI-HRMS确证。采用HepG2 2.2.15细胞株、HK-2细胞株进行了目标化合物抗HBV活性以及肾细胞毒性评价。结果表明,化合物9a具有较强的抗病毒活性与作用选择性(EC₅₀ 0.48 μmol/L,SI 763.72),具有较低的肾细胞毒性以及较高的化学与酶学稳定性,值得进一步深入研究。