幽门螺杆菌UreB-Omp11融合蛋白的重组疫苗候选株构建和融合蛋白的表达、纯化及免疫学活性

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)UreB-Omp11融合蛋白的重组疫苗候选株,在大肠杆菌中表达UreB-Omp11融合蛋白,并检测其免疫学活性。方法:用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的ureB和omp11基因并用重叠延伸PCR法获得ureB-omp11融合基因,将融合基因ureB-omp11插入原核表达载体pET30a( )、pET28a( )及pMAL-c2X中,筛选出合适的表达系统并进行融合蛋白的表达,采用Western blot对表达产物进行鉴定,并用Amylose亲和层析法纯化融合蛋白,应用SDS-PAGE方法对纯化产物进行分析,纯化的融合蛋白辅以免疫佐剂皮下免疫小鼠,Western blot对免疫小鼠血清进行检测。结果:特异PCR法、酶切鉴定并经测序分析后证实融合基因ureB-omp11克隆入表达载体pET30a( )、pET28a( )与pMAL-c2X中;重组菌TB1(pMAL-ureB-omp11)经诱导获得了高效表达的MBP-UreB-Omp11融合蛋白,该融合蛋白可以被Hp免疫小鼠血清和Hp阳性患者血清中的相应抗体所识别,纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。通过大肠杆菌抗原吸收法纯化免疫小鼠血清后,与纯化的融合蛋白进行杂交,结果显示在Mr134000处出现特异杂交带,融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。结论:成功地构建并筛选出了HpMELHP27融合蛋白UreB-Omp11的重组疫苗候选株TB1(pMAL-ureB-omp11),为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了基础。     

17βE2对切除卵巢兔动脉粥样硬化与血液流变学的作用

目的: 探讨17βE₂对卵巢切除(OVX)兔的AS斑块、血脂代谢及血液流变学的影响。方法: 34只成熟未孕雌兔分为4组:A为NC;B为Sham+CHO;C为OVX+CHO;D为OVX+CHO+17βE₂。喂养12周,喂养前与12周后测定血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB;测定全血粘度、血浆粘度、AIRC及纤维蛋白原。喂养12周后处死,测定AS斑块面积与主动脉总面积百分比。结果: ①AS斑块面积与主动脉总面积之比,A、B、C、D组分别为0.02±0.00、0.42±0.15、0.67±0.23、0.12±0.11,B组小于C组(P＜0.05)、D组明显小于C组(P＜0.01)。②血脂TC、TG、LDL-C、ApoB,B、D组明显小于C组(P＜0.01)。③血液流变学:全血粘度、血浆粘度AIRC与纤维蛋白原D组明显低于C组(P＜0.01)。结论: 17βE₂能抑制脂质斑块沉积,改善血脂代谢,减轻高脂血症,改善血液流变学。这可能是雌激素抑制AS形成的部份机理。     

人骨髓间质干细胞向造血细胞分化潜能的实验研究

目的:在体研究人骨髓间质干细胞(hBMMSCs)向造血细胞分化的潜能。方法:将hBMMSCs经尾静脉注射给环磷酰胺处理的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠,利用流式激活细胞分析系统(FACS)检测hBMMSCs输注后存活35d的SCID小鼠外周血、骨髓和脾脏中人源性造血细胞的表型和水平。结果:hBMMSCs输注组外周血(PB)、骨髓(BM)和脾脏(spleen)中可检测到人CD45⁺/H-2D^d-、CD34⁺/H-2D^d-细胞,而对照组PB、BM和脾脏均未检测到上述表型的人造血细胞。结论:hBMMSCs具有向造血细胞分化的潜能。     

Egr-1基因剔除减少炎性相关因子在实验性胰腺炎中的表达

目的：探讨Egr-1基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。 〖HTH〗方法：利用Egr-1基因剔除小鼠，采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型，观察Egr-1基因剔除后，胰腺组织水肿、MPO水平、血清淀粉酶水平、肺组织MPO水平的改变。并利用定量PCR的方法，检测胰腺组织中炎症相关因子组织因子（TF）、纤维蛋白溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）、单核细胞趋化吸引蛋白1（MCP-1）、Gro-1、IL-6和细胞间黏附分子-1（ICAM-1） mRNA的表达。 〖HTH〗结果：Egr-1基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显轻于野生型，但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显差异；肺组织MPO水平明显低于野生型。定量PCR检测结果表明， Egr-1基因剔除组，胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6　mRNA的表达，明显少于野生型组。 〖HTH〗结论：Egr-1基因剔除可明显减轻急性胰腺炎的严重程度，其作用可能通过减少胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6的表达而实现。     

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。     

结核分枝杆菌CFP-10／ESAT-6融合蛋白模拟抗原表位的筛选

目的探讨噬菌体展示随机肽库技术在结核分枝杆菌培养滤过蛋白10（CFP-10）／早期分泌抗原靶点6（ESAT-6）融合蛋白（CE融合蛋白）模拟抗原表位筛选中的应用。方法以抗CE融合蛋白多克隆抗体为靶分子，对随机噬菌体7肽库进行筛选，经3轮生物淘选后，随机选取18个单噬菌体进行测序分析。采用双抗体夹心和竞争ELISA方法对测序后噬菌体进行阳性克隆及其活性鉴定。采用间接ELISA方法，选取阳性单噬菌体与CE融合蛋白分别对20份活动性肺结核患者和10份有卡介苗接种史健康人的血清标本抗体进行检测。结果经过3轮生物淘选，能与靶分子特异性结合的噬菌体得到了明显富集。18个单噬菌体测序共获得9种序列，其中单噬菌体5、6、18的氨基酸序列均包含Trp-Asp-Ala-Thr（WDAT）保守序列，该序列与ESAT-6第58-61位氨基酸的序列一致。9种序列中各取1个单噬菌体经双抗体夹心和竞争ELISA检测，有7个单噬菌体（1、5、6、10、13、14、18，S／N值依次为9.2、9.7、9.4、8.9、9.6、9.9、9.0）确定为具有免疫活性的阳性克隆。选取含有WDAT保守序列的阳性单噬菌体5与CE融合蛋白分别对2种血清标本抗体进行间接ELISA检测结果显示，单噬菌体5对2种血清标本抗体检测的吸光度值均高于CE融合蛋白（分别为0．931±0．298 vs 0．317±0．157、0．496±0．073 vs 0．118±0．026，均P〈0．05）；单噬菌体5对活动性肺结核患者血清标本抗体的检出率（95％，19／20）明显高于CE融合蛋白（60％，12／20），而对有卡介苗接种史健康人血清标本抗体的检出率（9／10）低于CE融合蛋白（10／10）。结论利用噬菌体展示随机肽库技术成功筛选出7个CE融合蛋白的模拟抗原表位，并获得了定位于ESAT-6第58-61位氨基酸序列的CE融合蛋白的1个线性B细胞抗原表位，提高了ELISA检测的敏感性，为进一步研究CE融合蛋白的?     

磷酸化蛋白质组学方法在信号网络解析中的应用

信号转导是细胞对各种外界刺激的应答反应，蛋白磷酸化或去磷酸化是信号从胞外流向胞内并导致细胞效应过程中的关键机制。磷酸化蛋白质组学(phosphoproteomics)是采用蛋白质组学的分析方法，研究细胞中所有磷酸化蛋白质及其修饰过程，从整体上观察细胞中被修饰的磷酸化蛋白质的状态及其变化，进而分析特定磷酸化修饰对生命过程的调控作用及其分子机制。     

严重会阴部挫裂伤治疗方案探讨

目的探讨会阴部严重挫裂伤治疗的合理方案，提高治疗质量。方法通过回顾我院收治的18例会阴部严重挫裂伤病例的治疗过程，总结与分析了这类损伤不宜Ⅰ期修复的原因和结肠造瘘术在治疗中的作用。结果本组18例会阴部严重挫裂伤，均在早期清创缝合修复，后因感染，同时并发不同程度、不同范围的皮肤坏死而造成缺损和伤口裂开。均需再次清创、皮瓣转移和植皮予以修复。在此过程中，采用结肠造瘘术来控制创面感染和预防创面继发感染，收到了良好效果。结论严重会阴部挫裂伤创面的早期治疗，特别是污染重、挫伤重、损伤范围大的，均不宜Ⅰ期修复。早期行结肠造瘘术对预防和控制会阴部创面感染能起到重要的作用。     

起搏负荷超声与常规多普勒超声心动图对冠心病检出率的比较

目的　通过食道心房起搏负荷试验 ,使用彩色多普勒超声心动图对左心室室壁运动状态及左心室舒缩功能改变进行评价 ,以提高冠心病诊断的检出率 ;方法　使用心脏程序刺激仪经食道起搏导管调整心率达次极量 ;同时使用彩色多普勒超声心动仪进行左心室室壁运动记分并记录二尖瓣口及主动脉瓣环部血流频谱 ;结果　经食道心房起搏增加心脏负荷 ,应用左心室每搏量 (SV)、主动脉瓣环部流速积分 (VTIAO)、等容舒张时间 (IVRT)、二尖瓣口流速积分(VTIMV) )、快速充盈分数 (RFI)及室壁运动记分指数 (WMSI)作为指标在冠心病诊断中可提高检出率 ,以WMSI结合其它两项左心室舒缩功能阳性指标 ,其冠心病诊断的检出率为 95 % ,假阳性率为 3% ;结论　经食道心房起搏彩色多普勒负荷超声心动图 (TPDE)在冠心病诊断中有较高的应用价值 ,因其简便、实用和安全 ,宜在临床广泛推广使用     

再生柞蚕丝素蛋白对人骨髓间充质干细胞体外扩增的支持作用

大量的研究表明家蚕丝素蛋白具有良好的生物相容性。而对于柞蚕丝素蛋白在医用生物领域的研究报道在国内外尚较少。本研究选择再生柞蚕丝素蛋白为研究对象，观察了人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）在再生柞蚕丝素膜上的粘附、生长及表面抗原的变化。结果在1h观察再生柞蚕丝素对hBMSCs的粘附力几乎与胶原相同，明显优于家蚕丝素和聚苯乙烯培养板。MTT法检测结果显示在第4d hBMSCs在再生柞蚕丝素膜上的增殖明显高于其他各组。电镜观察结果显示hBMSCs在再生柞蚕丝素膜上能够很好的粘附、生长，细胞间能相互连接形成片状结构。流式细胞仪检测再生柞蚕丝素蛋白对hBMSCs表面抗原的表达亦无明显影响。本研究结果显示再生柞蚕丝素蛋白体外支持hBMSCs的粘附、生长，具有良好的细胞相容性。