HMGB1对HPV16型重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法 通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给与HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box注射,开展肿瘤抑制试验、小鼠免疫状态观察、肿瘤相关信号检测等研究。结果 A box蛋白与疫苗联用,即可显著降低模型小鼠HMGB1血清水平,抑制肿瘤组织中NF-kB的mRNA高表达,提高疫苗的抗肿瘤活性。同时,它还可减少IL-4、促进IFN-g产生,使体内免疫平衡由Th2向Th1偏移。虽然A box对于Bax的影响并不显著,但在接种疫苗并注射A box蛋白后,由肿瘤引起的NF-kB、Bcl-2、c-IAP2、VEGF、MMP-9的表达提高、Bax表达降低均得到显著扭转。结论 HMGB1分子可以削弱HPV重组腺病毒载体疫苗的免疫效果,其机制可能是HMGB1在调节免疫平衡状态及控制肿瘤细胞的凋亡、浸润、转移等多层面均能参与并发挥重要作用。     

大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用

目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗）,并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH,腹腔内注射免疫大鼠数次后,取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6,体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体,用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度,并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系,分别有6株属于IgGl亚型,2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化,其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl,用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量,用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒,而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗,可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法,成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。     

ARTERIALIZED FREE FLAP REPORT OF FOUR CASES

In 1985, we applied an arterialized vein stem free flap in 4 cases with success in 3. In making this flap the superficial vein with the covered skin of the limb was used. In operation the flap was inverted and the 2 ends of the vein stem were anastomosed with the artery of the recipient area. Rapid arterial blood flow not only provided blood supply to the flap, but through the "venous network shunt" and "tidal pressure difference of artery" maintained blood circulation of the flap. The details of technique and the changes of blood circulation after flap transfer are described, as are indications advantages and mechanism of blood circulation of the flap, and factors affecting the circulation.     

Vero细胞肠道病毒71型灭活疫苗的纯化及鉴定

目的建立Vero细胞肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的纯化工艺。方法病毒收获液经离心澄清、福尔马林灭活和超滤浓缩后,采用Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析和Source 30Q离子交换层析2步层析法纯化EV71,进行各项检定及分析后除菌过滤。结果经纯化的疫苗各项纯化指标均符合中国药典2010年版的要求,杂蛋白去除率>99.9%;病毒纯化液在电镜下观察到典型的EV71病毒颗粒,经SDS-PAGE及Western blot分析,检测到与文献报道大小相符的EV71 VP1、VP2、VP3及特异性免疫反应;制备成疫苗后免疫大鼠能产生特异性中和抗体。结论本实验建立了Vero细胞的EV71灭活疫苗的纯化工艺,纯化后制备的EV71灭活疫苗具有较好的免疫原性。     

带蒂脐旁轴型皮瓣修复上肢皮肤缺损

带蒂脐旁轴型皮瓣是以腹壁下动脉的脐旁穿支为蒂的皮瓣。应用该皮瓣修复５例上肢瘢痕创面均获成功。其中２例修复手背瘢痕，１例修复肘部瘢痕，１例修复手掌瘢痕，１例修复肘部创面。皮瓣最大面积２３ｃｍ×１０ｃｍ，最小面积１６ｃｍ×７ｃｍ，蒂部形成管状。术后石膏固定，３周后断蒂，皮瓣全部成活。该皮瓣血管恒定，切取容易。适用于修复手掌、手背、腕部及前臂近端，特别是肘部的瘢痕或创面。     

手部神经血管蒂皮瓣的临床应用

我院自１９６２年５月至１９９２年１月，应用手部神经血管蒂皮瓣２７例，其中指神经血管蒂皮瓣３８例，示指背侧岛状皮瓣（第Ｉ掌骨背动脉）２４例，手背第ＩＩ骨背动脉皮瓣７例，小鱼际皮瓣３例，修复手部皮肤损。术后除１例指神经血管蒂皮瓣失败外，余均成活，经１２上月－１２年随访功能优良率为９４．４％。我们在文中介绍了各种皮瓣的优缺点，皮瓣设计，手术要点，并讨论了皮瓣的解剖学规律及手术适应证。     

超声引导下经皮微波消融治疗肝细胞性肝癌术后复发灶远期疗效评估

目的评价肝细胞性肝癌(hepatic cellular carcinoma,HCC)手术后复发灶(直径≤5 cm)超声引导下经皮微波消融(microwave ablation,MWA)治疗的远期疗效及其影响因素。方法 2005年5月~2011年12月,89例HCC复发患者行经皮微波消融治疗。所有HCC复发患者在MWA治疗后1个月均行超声造影、增强CT或者增强磁共振检查;以及血生化检查,包括血清甲胎蛋白(AFP)、肝功能等。结果消融治疗1个月后,病灶完全消融率91%(81/89)。HCC经皮MWA治疗后,1、3、5、7年生存率分别为73.3%、53.7%、39.6%、17.3%。肿瘤大小(P=0.046)、肿瘤数目(P=0.001)、Child-Pugh分级(P=O.023)、AFP水平(P=0.003)以及HCC早期复发(≤1年)(P=0.013)为总体生存率的单因素回归分析的危险预后因素。肿瘤数目(P=0.000)、Child-Pugh分级(P=0.000)和AFP水平(P=0.001)是HCC经皮MWA治疗后总体生存率重要的独立危险因素。结论经皮MWA对于肝细胞性肝癌切除术后复发灶是有效、安全的治疗方法 。     

表达人乳头瘤病毒16型E6E7重组腺病毒疫苗对小鼠的免疫和抗肿瘤效应

目的 评价HPV16 E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒(PK-HPV-ad5)治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应.方法 使用基因重组技术构建PK-HPV-ad5疫苗,并通过小鼠免疫试验,检测小鼠总抗体和特异性IFNγ,同时将造模小鼠分成疫苗组和对照组,分别对其进行抑瘤试验、TC-1肿瘤细胞挑战试验和肿瘤切除后防复发试验.结果 HPV16 E6E7诱导的总抗体第12天的水平相对较高(1:400～1:600);3批次疫苗特异性IFNγ在第14天与对照组比较分别升高8.6、5.9和8.9倍,差异有统计学意义(t=15.721、6.967和14.342,P均＜0.01).抑瘤试验表明疫苗剂量为107IU/只时小鼠肿瘤生长率为0,与对照组比较差异有统计学意义(确切概率法,P＜0.01),3批次疫苗验证有效剂量为107IU/只时肿瘤抑制率可达80％(8/10)以上.TC-1肿瘤细胞挑战试验结果显示:小鼠先接种疫苗能引起特异性的免疫应答,并能保护90％(9/10)的小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击;肿瘤切除后防止复发试验提示在注射相同剂量疫苗时,对104个/只和105个/只肿瘤细胞造模小鼠,第0、5天免疫组肿瘤复发数少于第5,8天免疫组(1/10,4/10 vs 8/10,7/10).结论 PK-HPV-ad5疫苗能诱导小鼠产生特异性的免疫应答,对抗肿瘤复发有治疗潜力.