基因-病毒治疗系统CNHK300-小鼠内皮抑素对裸鼠胃癌的抗肿瘤作用

目的探讨新构建的基因-病毒治疗系统CNHK300-小鼠内皮抑素murineendostatin（CNHK300-mE）对胃癌的抑制作用。方法通过胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型观察该病毒治疗系统对胃癌生长和肿瘤血管生成的抑制作用。用电镜观察该病毒在肿瘤细胞中的复制情况及肿瘤细胞的超微结构改变。用酶联免疫吸附（ELISA）法检测mE基因在体内的表达。用免疫组织化学的方法检测腺病毒外壳蛋白六邻体（hexon）、增殖细胞核抗原（PCNA）及vWF因子相关抗原的表达情况。采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果CNHK300-mE能在肿瘤细胞内复制,高表达mE,在第7天时,达到（2115±770）ng/ml（范围1745～3000ng/ml）;明显抑制胃癌皮下移植瘤的生长及瘤内的血管生成,并可引起胃癌细胞的凋亡[治疗组小鼠肿瘤细胞凋亡率（78.4±9.1）%,对照组仅（15.2±0.5）%,P〈0.01],抑制肿瘤细胞增殖[治疗组小鼠PCNA指数（55.0±1.4）%,对照组为（74.1±0.4）%,P〈0.05]。结论CNHK300-mE能在小鼠胃癌内增殖复制,高效表达mE基因,抑制胃癌生长。     

转染Caspase-1基因对人胃癌细胞株生物学特性影响的研究

目的 探讨转染Caspase-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响。方法 将人凋亡基因Caspase-1的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株X-108。对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中CEA含量及裸鼠致瘤性进行分析。结果 导入的Caspase-1基因使细胞增殖周期发生变化，G1期细胞数目增多，S期细胞数目减少。转染细胞培养液CEA含量有下降趋势胃癌细胞株X-108-Caspase-1体外生长速度明显受抑，裸鼠体内致瘤性降低．肿瘤生长缓慢。结论 Caspase-1不能促使X-108胃癌细胞凋亡，但可以使其增殖受抑，肿瘤细胞的恶性程度降低。     

肝动脉化疗栓塞术联合自体DC蛳CIK细胞治疗BCLC C期肝癌的随机对照研究

目的：探讨肝动脉化疗栓塞（TACE）联合DC-CIK细胞治疗BCLC C期肝细胞癌的疗效。方法60例BCLC C期HCC患者随机分为治疗组与对照组,治疗组患者采用TACE联合DC-CIK治疗,对照组患者只行TACE治疗,比较两组患者的免疫功能、半年和1年生存率。结果治疗组全血T细胞亚群CD3+CD8+明显升高,CD3+CD4+明显下降,较治疗前差异有统计学意义（P<0.05）。两组半年生存率分别为67.9％、48.1%（P<0.05）,一年生存率分别为53.6%、29.6%（P＜0.05）。结论 TACE联合DC-CIK细胞联合治疗比单纯TACE治疗效果更好,是BCLC C期肝细胞癌的一种有效的治疗方法。     

化疗药物靶向肿瘤相关免疫抑制性细胞的研究进展

肿瘤相关免疫抑制性细胞在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要的免疫抑制作用,肿瘤的发展和转移常伴有这些细胞的异常聚集。调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)和髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)是免疫抑制性细胞网络的主要成分,它们通过直接或间接作用负向调节其他免疫细胞,抑制抗肿瘤的免疫反应。最新研究显示,有些常规化疗药物除可直接杀伤肿瘤细胞外,还可降低Treg和MDSC的数量,抑制其功能,从而增强抗肿瘤免疫功能。因此,将化疗药物作为预处理方案,凭借其免疫调节作用联合后续的过继性细胞免疫治疗可有效增强抗肿瘤免疫应答。化学免疫治疗策略将改变人们对传统化疗抗肿瘤地位的认识,继而更加合理地应用化疗药物。     

化疗药物治疗双原发肿瘤继发急性白血病1例及文献复习

近年来,随着化疗的大量开展,继发性白血病发病率逐年升高,笔者报道1例卵巢癌并发乳腺癌患者经化疗、放疗后出现急性粒-单细胞白血病,从初次化疗至诊断急性白血病的时间为37个月,起病急、生存期短。文献报道烷化剂、拓扑异构酶I抑制剂、铂类均易诱发继发性白血病。造血干细胞移植可降低病死率、延长无进展生存期。     

替吉奥治疗晚期乳腺癌的研究进展

替吉奥(S-1)是第三代氟尿嘧啶衍生物的口服抗癌剂,毒副作用小、疗效确切、给药方便。在大量的临床试验及不断的临床应用中,其展示出对晚期乳腺癌(advanced breast cancer,ABC)治疗的良好效果,将来有望成为乳腺癌治疗的一线化疗药物。     

溶瘤腺病毒SG7605-11R-P53对肝癌细胞的体外杀伤作用

目的:研究携带细胞穿膜肽11R和P53的溶瘤腺病毒SG7605-11R-P53对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:以本课题组前期实验构建的携细胞穿膜肽11R和P53的溶瘤腺病毒SG7605-11R-P53和不携11R的溶瘤腺病毒SG7605-P53感染肝癌细胞HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Huh7和正常成纤维细胞株BJ,Western blotting检测感染后细胞P53和11R-P53的表达情况,TCID50法检测SG7605-11R-P53和SG7605-P53在肝癌细胞中的增殖能力,MTT法检测SG7605-11R-P53对肝癌细胞及正常细胞的杀伤作用。结果:SG7605-11R-P53和SG7605-P53能在肝癌细胞中高表达P53和11R-P53蛋白。SG7605-11R-P53可在HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中大量增殖,其增殖倍数是SG7605-P53的10~100倍,但在正常BJ细胞内几乎不增殖。SG7605-11R-P53在MOI=0.1时对Hep3B细胞的杀伤率达90%,对于正常BJ细胞只有当MOI=50时才有很弱的抑制作用;SG7605-11R-P53对4种肝癌细胞杀伤作用的大小依次为Hep3B、HepG2、Huh7和SMMC-7721细胞。结论:携带细胞穿膜肽11R和P53的SG7605-11R-P53溶瘤腺病毒体外对4种肝癌细胞株均有较好的靶向杀伤作用,尤其对Hep3B细胞的杀伤作用最强。     

氧依赖性降解结构域-RANTES融合基因腺病毒表达载体的构建及体外趋化活性观察

目的:构建携带活化T细胞表达和分泌调节因子(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES/CCL5) 基因及氧依赖性降解结构域(oxygen-dependent degradation domain,ODD)融合基因的重组腺病毒,并观察其体外趋化活性。方法:PCR法将人RANTES基因与ODD融合,构建携带该融合基因的重组腺病毒SG511-CCL5-ODD;增殖实验观察重组腺病毒增殖特性,ELISA法观察常氧和缺氧条件下RANTES蛋白的表达;趋化试验观察重组腺病毒感染肝癌细胞后的趋化活性。结果:成功构建携带人RANTES-ODD融合基因的重组腺病毒SG511-CCL5-ODD;增殖实验表明重组腺病毒具有肿瘤选择性复制的特性;缺氧条件下重组病毒转染肝癌细胞后RANTES蛋白表达量均比常氧条件下高(P<0.05),显示ODD可有效调节RANTES蛋白表达;趋化试验表明重组腺病毒感染肝癌细胞具有趋化NK92细胞的作用。结论:重组腺病毒SG511-CCL5-ODD体外能有效感染肝癌细胞株HepG2和Hep3B,并在ODD调控下表达RANTES蛋白,有效发挥体外趋化NK92细胞的活性。     

多靶向VEGF-EGFR的Fc融合蛋白EVP1的构建及其结合特性【创新点评：一种富有潜力的多靶向抗体类肿瘤治疗药物】

目的:构建能同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的Fc融合蛋白EVP1,并分析其多靶向结合功能,为后续的抗肿瘤研究奠定基础。方法:利用PCR方法扩增Herin基因和Flt-1基因Ig样第二结构域(Flt-1D2)编码序列,全序列合成带有点突变的人IgG1的Fc段编码序列,利用重组PCR方法将Herin、Flt-1D2和Fc基因依次连接,构成Herin-Flt-1D2-Fc基因(命名为EVP1基因)。再将EVP1编码基因插入质粒pDC659,构建携带EVP1基因的腺病毒穿梭质粒pDC659-EVP1。将质粒pDC659-EVP1与腺病毒骨架载体pPE3-F35共转染至293细胞,包装获得表达EVP1融合蛋白的非增殖型腺病毒Ad5/35-EVP1,经PCR鉴定,扩增、纯化病毒,采用50%组织培养感染剂量(TCID50)法测定病毒滴度。用MOI=11的腺病毒Ad5/35-EVP1感染293细胞,4 d后收集细胞培养上清液。采用硫酸铵盐析法和Protein G亲和层析对融合蛋白EVP1进行纯化。Western blotting检测细胞培养上清液中融合蛋白EVP1的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中融合蛋白EVP1的含量。采用间接免疫荧光实验和Octet Red 96生物分子相互作用分析仪对融合蛋白EVP1的靶向结合特性进行定性和定量检测。结果:成功包装出腺病毒Ad5/35-EVP1,滴度为5.4×109PFU/ml。腺病毒Ad5/35-EVP1-293细胞系统能有效表达融合蛋白EVP1;MOI=11时,融合蛋白EVP1的表达量为(1 613.94±24.65)ng/ml。蛋白EVP1与高表达EGFR的A431细胞和高表达HER2的人卵巢癌SK-OV-3细胞有良好的结合能力,与抗原EGFR、HER2、VEGF结合的亲和力常数Kd分别为4.55、18.70和0.63 nmol/L。结论:成功制备多靶向融合蛋白EVP1,它能高效结合VEGF、EGFR受体家族成员,具有良好的抗肿瘤临床应用价值。     

携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡

目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果: CNHK500-h TRAI L能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.