大鼠体外多器官细胞共培养模型的建立

目的 建立大鼠体外多器官细胞共培养方法.方法 采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞和真皮成纤维细胞,用锥虫蓝染色法检测细胞分离成活率,用单层贴壁法分别培养;采用飞片法,将5种细胞的飞片放入同一培养皿,用体积分数为10%的FBS DMEM培养基培养7 d,用噻唑蓝(MTT)比色法比较原代细胞在单独培养和共培养时的生长情况.结果 建立的大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞、真皮成纤维细胞分离方法稳定,细胞分离成活率均达90%,其中胶原酶消化法培养肝细胞的存活率达90.3%,两步消化法培养肾细胞的细胞存活率达91.9%,心肌细胞的胶原酶消化法细胞存活率达93.0%.3～15 d的心肌细胞搏动频率比较,差异无统计学意义(P>0.05),差速贴壁法培养的肺泡巨噬细胞存活率可达90.8%,以胶原酶消化法培养的原代真皮细胞存活率达92.7%,细胞生长状态良好.5种原代细胞的多器官细胞共培养结果显示,共培养时细胞生长增殖情况良好,单独培养与共培养细胞生长曲线基本重合.结论 所建立的大鼠多器官细胞共培养方法是成功的.     

乙基亚硝基脲诱导转基因小鼠基因突变的研究

[目的 ]用乙基亚硝基脲 (ENU)进一步验证携带xylE基因的转基因小鼠在体内基因突变研究中的应用价值。 [方法 ]用ENU对转基因小鼠进行诱变处理 (i.p .5 0mg/(kg·d) ,连续 5d)后 ,从脾脏组织DNA中回收带有靶基因xylE的pESnx质粒 ,通过电穿孔法转化大肠杆菌 ,筛选突变体 ,检测突变率 ,并对突变靶基因进行测序分析以确定突变类型。 [结果 ] (1)ENU诱发转基因小鼠脾脏组织xylE基因的突变率为 1 2 48× 10 -4 ,显著高于自发突变率 ;(2 )ENU诱发基因突变的类型包括碱基的颠换、转换以及由于碱基的缺失或插入所引起的移码突变。 [结论 ]该转基因小鼠是检测体内基因突变的一种有效的动物模型。     

聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性评价

目的检测聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性。方法应用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)、体外培养CHO细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓微核试验检测聚乙二醇修饰降纤酶的遗传毒性。结果 Ames试验结果显示每平皿100、20、4、0.8、0.16 U各个剂量组,在加或不加S9代谢活化系统时对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535所诱发的回复突变菌落数均与溶剂对照的突变菌落数相近。体外培养CHO细胞染色体畸变试验结果显示2.5、5.0和10.0 U.mL-1各个剂量组在加S9代谢活化系统于24 h和不加S9代谢活化系统于24 h、48 h培养的CHO细胞染色体畸变率与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。小鼠骨髓微核试验显示425、850、1700 U.kg-1各个剂量组对ICR小鼠的微核诱发率与溶剂对照组比较均无显著差异(P>0.05)。结论聚乙二醇修饰降纤酶对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对哺乳动物培养细胞的染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应。表明聚乙二醇修饰降纤酶在本实验条件下无遗传毒性。     

xylE-ICR转基因小鼠模型体内致突变试验的规范化研究

本文通过ＭＮＮＧ作用于ｘｙｌＥＩＣＲ转基因小鼠,按１／１０ＬＤ５０给药,每天１次,连续５ｄ,最后一次给药后２１ｄ,测小鼠肝组织突变率为２１．４６×１０－５,与对照组（＜４．３８×１０－５）比相差极其显著（Ｐ＜０．０１）,表明该检测方法可作为规范化程序,对诱变物进行致突变研究的系统分析。     

康普瑞汀磷酸钠对大鼠胚胎发育毒性的研究

目的:探讨抗肿瘤药物康普瑞汀磷酸钠(combretastatin A-4 disodium phosphate,CA4P)对SD孕鼠胚胎发育的毒性作用。方法:80只孕鼠随机分为低剂量(0.15 mg/kg)组、中剂量(0.50 mg/kg)组和高剂量(1.50 mg/kg)组及对照组(生理盐水),每组20只,给药容积均为10 m L/kg。于妊娠第6~15日尾静脉注射给药,每日1次。妊娠第20日解剖孕鼠,检查母体妊娠与胎鼠畸形情况。结果:与对照组比较,高剂量组的着床率、胚胎吸收率均有显著升高,活胎率降低,差异均有统计学意义(P0.05);妊娠后期高剂量组孕鼠体质量增长显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);中、高剂量组的胎盘质量、活胎体质量、活胎顶臀长以及尾椎数、掌骨数、枕骨数、胸骨数均显著减少(P0.05);各剂量组未见胎鼠外观及内脏畸形。结论:本实验条件下,CA4P对亲代孕鼠未观察到不良反应的剂量水平(NOAEL)为0.50 mg/kg,对胚胎、胎仔发育的NOAEL为0.15 mg/kg,对胎仔致畸作用的NOAEL为1.50 mg/kg。     

红景天苷注射液遗传毒性的研究

目的：检测红景天苷注射液的遗传毒性。方法：应用微生物回复突变实验（Ames实验,5 000、500、50、5.0、0.5μg/皿）、体外培养CHO细胞染色体畸变实验（2 0001、000、500μg/mL）和小鼠骨髓微核实验法（1 500、750、375μg/kg）检测红景天苷注射液的遗传毒性。结果：红景天苷注射液对鼠伤寒沙门菌无致突变性,对体外培养CHO细胞染色体无致畸变作用,对ICR小鼠无诱发骨髓嗜多染红细胞微核的效应,三个实验结果均呈阴性。结论：红景天苷注射液不具有遗传毒性。     

筛选xy1E-ICR转基因小鼠纯合子和建系的初步研究

目的：我们已成功地建立了以邻苯二酚氧化酶ｘｙ１Ｅ为靶基因,ｐＥＳｎｘ穿梭质粒为载体的ｘｙ１Ｅ－ＩＣＲ转基因小鼠致突变检测模型,为使该模型最终能成为商品并推广应用,必须繁育并筛选出ｘｙ１Ｅ－ＩＣＲ转基因小鼠的纯合子,从而建立纯系转基因小鼠。为此本研究对ｘｙ１Ｅ－ＩＣＲ转基因小鼠的首建鼠（ｆｏｕｎｄｅｒｍｏｕｓｅ）３１＃转基因小鼠进行繁殖传代,通过传统育种方式与分子生物学检测相结合的方法筛选出纯合子转基因小鼠,并在此基础上建立了转基因小鼠纯系。方法及结果：１转基因小鼠的繁殖传代：将３１＃转基因小鼠…     

新生小鼠心脏细胞体外共培养体系的建立及其在心肌细胞增殖研究中的应用

目的 建立新生C57乳鼠心肌细胞和成纤维细胞体外原代培养和共培养体系,探讨不同日龄乳鼠心脏细胞的体外增殖特征.方法 分离不同日龄C57新生小鼠的心肌细胞和成纤维细胞,分别进行原代培养和共培养,观察细胞的形态和活力变化,测定CyclinD1、CDK4、GATA4、Nkx2.5以及FGF1的表达.结果 差速贴壁90 min后成纤维细胞先贴壁,培养12h后心肌细胞几乎全部贴壁;共培养心肌细胞多以细胞团的形式贴壁生长.出生5d以内的乳鼠心肌细胞数量明显增加,共培养的心肌细胞活力更大、增殖速度快;出生5d以后乳鼠的心肌细胞数量变化并不明显.出生5d内乳鼠心肌细胞中CyclinD1和CDK4的表达量较高,且共培养的心肌细胞表达量要高于单独培养的心肌细胞表达量.GATA4、Nkx2.5和FGF1的表达随日龄增大而增加.结论 成功建立了新生小鼠心肌细胞和成纤维细胞的体外共培养体系;出生5d内的乳鼠心肌细胞体外培养时具有较强的增殖能力,且成纤维细胞能促进心肌细胞的增殖,GATA4、Nkx2.5和FGF1有阻止心肌细胞增殖作用.出生5d后乳鼠的心肌细胞增殖能力减弱甚至消失.