碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体联合洛铂对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,bFGF mAb)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响.Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率.激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态.Western blotting检测细胞内凋亡相关蛋白表达.结果:CCK-8法检测结果显示,细胞培养48 h后,bFGF mAb组和LBP组的细胞增殖受到抑制,但两药联用后的增殖抑制作用明显高于单用LBP及bFGF mAb(P＜0.05).Annexin V-FITC/PI结果显示,联合组早期、晚期凋亡率分别为(27.83±1.23)％和(39.32±1.01)％,与bFGF mAb的(6.25±0.19)％、(14.54±0.25)％和LBP的(16.54±0.39)％、(21.02±0.98)％相比,明显高于单药组的抑制率(P＜0.01).激光共聚焦显微镜显示联合用药诱导的细胞核裂解率较单用bFGF mAb及LBP的细胞核裂解率明显增多.Western blotting检测结果显示联合组BAX、Caspase-3、Caspase-9、PARP表达量较药物单用组明显增加,而Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达量明显降低.结论:bFGF mAb联合LBP通过抑制Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达,上调BAX、Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白表达,对肺腺癌A549细胞起到抑制增殖和诱导凋亡的作用.     

应用酵母双杂交技术筛选HERG钾通道相互作用蛋白

目的筛选心肌细胞内哪些蛋白质与HERG钾通道存在相互作用。方法 (1)通过PCR方法扩增编码心脏herg基因N端的cDNA片段(HERG-NT,aa 1-403)和C端的cDNA片段(HERG-CT,aa 669-1159),分别克隆进入pGBKT7载体,构建pGBKT7-herg-NT和pGBKT7-herg-CT诱饵质粒;(2)将被诱饵质粒转化的AH109分别涂布于SD/-Trp、SD/-Trp/-His、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/X-α-Gal平板上,以观察诱饵蛋白是否自我激活报告基因;(3)将已被诱饵质粒转化的AH109分别与预转染于Y187的人类心脏cDNA文库进行酵母双杂交,分离阳性克隆中的cDNA,并测序。结果 (1)成功构建诱饵载体pGBKT7-herg-NT和pGBKT7-herg-CT,测序结果表明herg-NT和herg-CT都和"GAL4 DNA-BD-C-Myc"在同一读框,没有PCR引起的突变;(2)"诱饵"蛋白HERG-NT和HERG-CT均未能自我激化报告基因Ade2、Mel1和LacZ,弱激活报告基因His3,应用5mmol/L的3-AT可以有效抑制HERG-NT或HERG-CT所引起的组氨酸表达;(4)经过严格筛选后,发现Caveolin-1、FHL2和PTPN12等15种蛋白与HERG-NT存在相互作用,Myotrophin等8种蛋白与HERG-CT相互作用。结论成功应用酵母双杂交技术,以HERG钾通道蛋白的氨基端或羧基端为诱饵蛋白,筛选HERG钾通道的相互作用蛋白(Caveolin-1、FHL2、PTPN12、Myotrophin等),这些蛋白质可能与HERG存在相互作用。     

脊髓性肌萎缩的康复评估及治疗研究进展

脊髓性肌萎缩(SMA)是一种常染色体隐性遗传的神经肌肉罕见病, 其主要特征是脊髓前角运动神经元缺失导致对称性、进行性肌无力。本病目前尚无有效治愈方法, 积极进行康复干预有助于延缓患儿病情发展、提高生活质量。此外近年来针对SMA的药物治疗也取得一定进展。本文拟对近年来关于SMA的康复评估、治疗研究进展以及并发症防治情况作一简要综述。     

基于高通量测序技术对人参花及其易混淆品鉴定研究

目的 利用高通量测序技术对人参花及其易混淆品进行鉴定，并利用ITS2测序技术验证高通量测序技术对物种鉴定的准确性。方法 对人参花掺伪样品扩增产物进行高通量测序，使用cutadapt、PEAR、PRINSEQ、Usearch、RDP classifier、SINTAX软件获得分类单元(operational taxonomic unit，OTU)序列，舍弃菌类、unclassified等非绿色植物序列；为避免假阳性情况发生，删除序列数<100条或碱基数<200 bp的OTU序列。对人参花、西洋参花、三七花的ITS2扩增产物进行测序，利用MEGA 11.0对人参花、西洋参花、三七花的ITS2、OTU、GenBank上下载的碱基序列构建邻接法系统聚类树、遗传距离、种间信息位点及对ITS2、OTU碱基序列分别进行Blast分析来验证高通量测序技术对物种鉴定的准确性。通过构建ITS2及OTU碱基序列二级结构对人参花、西洋参花、三七花进行比对分析，根据物种间二级结构的不同对物种进行鉴定。结果 高通量测序共得到54 653条有效序列，人参花、三七花、西洋参花的序列号分别为OTU1、OTU2、OTU3及对应的有效序列分别为31 325，857，442条。通过对各物种的ITS2及OTU碱基序列进行Blast检索，均支持各个物种。人参花与西洋参花、三七花种间遗传距离分别为0.010，0.033，人参花与西洋参花、三七花分别有2，7个信息位点；邻接法系统聚类树显示各个物种均独立聚为一支，其中人参花与西洋参花聚为一大支与三七花并列。人参花与西洋参花二级结构一致，但与三七花在臂Ⅳ及臂Ⅳ与臂Ⅰ之间有A、B、C 3处不同。结论 基于高通量测序技术能够准确鉴定人参花、西洋参花、三七花，对掺伪样品亦具有较强的鉴别能力，为市售人参花样品鉴定提供一定思路。     

共同性外斜视猫的眼内直肌组织脑源性神经营养因子蛋白及mRNA表达观察

目的 观察共同性外斜视猫内直肌中脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA的表达变化，并探讨其与共同性外斜视发病的相关性。方法 28只雌性猫随机分为A、B、C组及对照组，每组各7只。A、B和C组猫分别全天配戴15^△棱镜2、4、6个月，对照组猫全天配戴平光镜6个月。麻醉各组猫后取眼内直肌组织，Masson染色后测算猫眼内直肌纤维横截面积及肌卫星细胞数，分别采用RT-qPCR法和WESTERN Blotting法检测各组猫眼内直肌BDNF mRNA和蛋白。结果 与对照组比较，A、B、C组猫的眼内直肌肌纤维横截面积小、肌卫星细胞数少(P均<0.05)。A、B、C组及对照组猫的眼内直肌BDNF mRNA相对表达量分别为0.51±0.05、0.41±0.04、0.10±0.04、1.00±0.10,BDNF蛋白相对表达量分别为0.85±0.11、0.66±0.05、0.14±0.05、0.97±0.09，与对照组比较，A、B、C组猫的眼内直肌BDNF mRNA及蛋白相对表达量低(P均<0.05)。结论 共同性外斜视猫的眼内直肌组织BDNF mRNA及蛋白表达低...