人源M2三联体靶抗原BPO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

目的用基因工程的方法克隆表达抗线粒体抗体二亚型（AMA-M2）的3个靶抗原侧链二氧酸脱氢酶复合体E2（BCOADC-E2）、丙酮酸脱氢酶复合体E2（PDC-E2）、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2（OGDC-E2）及其连接形成的三联体BPO-E2融合蛋白，以用于人原发性胆汁性肝硬化（PBC）的早期发现和临床诊断。方法针对BCOADC-E2、PDC-E2、OGDC-E2的cDNA序列设计引物，从正常人的淋巴细胞中提取RNA，通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段，经测定序列验证后插入表达载体pET28a（＋），构建重组表达载体pET28a（＋）-BCOADC-E2、pET28a（＋）-PDC-E2、pET28a（＋）-OGDC-E2、pET28a（＋）-BPO-E2，转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE、Western-blot等鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明，成功地构建了4种重组质粒。IPTG诱导表达后，获得4种融合蛋白。经免疫学鉴定，重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化（PBC）的实验室诊断。     

结核杆菌抗原Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位的预测及鉴定

目的 鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Rv0173中的HLA-A*0201限制性CTL表位.方法 应用数据库SYFPETTHI预测结核杆菌Rv0173中可能存在的HLA-A*0201限制性CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位.结果 位于Rv0173氨基酸序列肽3(21-30aa)和抗原肽7(161-170aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMCs增殖,并诱导产生特异性杀伤活性.结论 肽3(RLSQSADQYL)(21-30aa)和肽7(LLRGGGLVNL)(161-170aa)是抗原Rv0173上HLA-A*0201限制性CTL的优势表位,可作为结核疫苗设计的候选表位.     

氯吡格雷相关的致死性全血细胞减少1例报告

1 临床资料患者,女,82岁,因"发热并发现‘全血细胞减少'1 d"于2010年7月29日收入我院血液科.既往有"冠心病、心律失常、高血压病"病史,2010年7月6日患者因"急性冠脉综合征"在心内科治疗,当时查血常规三系正常,出院后予"氯吡格雷、普伐他汀、单硝酸异山梨酯"口服.患者于2010年7月28日上午起出现发热,体温最高39.2℃,稍觉恶寒,无寒战,伴有腹泻、解黄稀便,无腹痛、恶心及呕吐,自述近两日觉左足疼痛明显、活动受限,无活动性出血,无头晕心悸.     

原发性粒细胞肉瘤5例

<正>粒细胞肉瘤(granulocytics arcoma,GS)是由不同阶段未成熟粒细胞在髓外浸润并形成肿块的一组病变。一般发生在白血病发病时、复发后,也可发生在白血病发病前,但最终发展为急性髓细胞性白血病(AML)。因形态学难与非霍奇金淋巴瘤(NHL)鉴别,临床工作中无特征性病理依据时,极易造成误诊,近年来随着病理检查、免疫组化在临床工作中的广泛应用,GS得到进一步地认识。笔者对在瑞金医院血液科进修期间(2008年1～12月)收治的GS 5例进行分析,进一步提高对本病的     

PBL教学法在实验诊断学教学中的应用

目的探讨PBL模式在实验诊断学教学中的应用。方法将80名5年制临床医学本科学生分为两组,对照组40名,采用传统讲授法进行实验诊断学教学：实验组40名,采用PBL模式进行教学。比较两组学生所学知识的掌握情况,调查学生对两种实验诊断学教学法的评价。结果实验组学生所学知识的掌握情况优于对照组,对PBL教学法的满意度评价较高。结论PBL教学法提高了学生学习的主动性、积极性、自学能力和综合素质,使教与学双方得到了良好的互动,提高了教学质量。     

颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响

目的 探讨颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响.方法 ①在U937细胞中加入终浓度为100 ng/ml的乙酰肉豆蔻佛波酯(phorbol mynstate acetate,PMA),刺激2 d后,再加入不同组合的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、葡萄球菌的脂膜酸(lipoteichoic acid,ETA)、颗粒溶素(granulysin,GNLY),刺激培养4 h后收集细胞上清,用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的含量.②在U937细胞或原代单核细胞中加入GNLY后,在37℃条件下,刺激4 h,收集上清,以ELISA分析MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1,单核细胞趋化因子-1)和RANTES(reduced upon acti-vation normal T expression and secreted,正常T细胞活化时表达和分泌减少因子)的含量;收集细胞并抽提总RNA后,以实时荧光定量RT-PCR方法检测部分基因表达水平的改变.结果 加入GNLY后,LPS诱导U937细胞分泌的TNF-α水平显著增加(P<0.05);U937细胞或单核细胞的MCP-1、RANTES的mRNA水平显著增加(P<0.05),上清液中MCP-1和RANTES水平也增加(P<0.05).结论 GNLY可促进LPS诱导单核细胞分泌TNF-α,本身可刺激单核细胞表达MCP-1、RANTES增高,这为以后进一步研究颗粒溶素的作用机制打下了基础.     

灵武地区青年人龋病患病状况调查

目的调查了解灵武地区青年人龋病患病的发展状况,掌握详实的基线资料以利今后防治工作的开展。方法由口腔专业人员参考《第二次全国口腔健康流行病学调查方案》的标准,对灵武地区2001—2005年8114名应届高中毕业生进行龋病及相关因素和防治的现况调查。结果灵武地区高中毕业生龋患率、龋均逐年变化不大（r=-0.345,P=0.570;r=-0.619,P=0.196）,总体有所下降;龋齿充填比率逐年有所提高,2005年较2001年有明显提高（r=0.924,P=0.025）;女性患病率高于男性（χ2=28.854,P〈0.001）;汉族发病率高于回族（χ2=7.782,P=0.005）。结论随着口腔健康教育的开展和普及,灵武地区青年人龋病患病率有所降低,龋齿充填率明显提高。但是应强调进一步加强学校青年学生的口腔健康知识的宣教工作,做到早预防、早发现、早治疗,降低患龋率,提高龋齿充填比率。     

异丙酚联合阿托品开展无痛人流的临床观察

我院自１９９８年４月起使用异丙酚作为麻醉药联合阿托品开展无痛人流，经临床观察效果显著，现报道如下。１资料与方法１１临床资料选取我院自１９９８年４月至１９９８年１０月行人流术患者１３２例，均为健康妊娠妇女，年龄２１～３５岁，平均年龄（２８０±４５...     

结核分枝杆菌Rv0309抗原的重组表达、纯化和鉴定

目的重组表达结核分枝杆菌Rv0309蛋白,以进一步探讨其免疫效应。方法将结核分枝杆菌抗原Rv0309的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Rv0309重组质粒。将重组质粒转入大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果获得了pGEX4T-Rv0309重组子,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达重组Rv0309蛋白,其条带大小约23000,与预期结果相符。结论成功地进行了结核分枝杆菌抗原Rv0309的基因克隆与重组表达,为进一步研制新型结核病疫苗打下了基础。