深圳市献血人群HIV感染现状分析

目的为了控制艾滋病病毒(HIV)通过血液传播，提供低危献血员定期献血，提高血源质量，降低输血风险。方法通过分析1995～2003年献血人群检测结果和HIV感染现状，找出易感人群进行防范、教育，防止HIV的传播。结果通过近10年的努力深圳市血液中心共筛出艾滋病病毒抗体(抗-HIV)阳性者18例。其中有偿供血者确认抗-HIV阳性4例，占有偿供血者总数的20．69／10万；无偿献血者确认抗-HIV阳性14例，占无偿献血总数的4．72／10万。18例抗-HIV确认阳性者人口学分析结果表明：流动人口占88．89％，18～40岁的青壮年占83．33％，临时工、服务行业占83．33％。结论表明不论无偿献血和有偿供血者都要进行严格的血液筛查，加强流动人口的管理，加大宣传防治艾滋病(AIDS)的力度，提高全民的防范意识，预防、控制AIDS的传播。     

低载量隐匿性乙型肝炎病毒检测和序列分析

目的对低载量隐匿性乙型肝炎病毒进行Q-PCR定量检测和BCP序列分析。方法采用诺华公司NAT方法筛查35332份献血者HBV DNA,有18例确认为HBsAg-/HBV DNA＋,48例为可疑HBV DNA＋血样,使用Q-PCR和Nested-PCR方法对48例可疑血样进行定量检测和BCP区域扩增和测序;并与野毒株BCP序列作比对分析。结果从48例可疑HBV DNA＋血样中成功应用Q-PCR定量检出HBV DNA阳性6例,均为隐匿性乙型肝炎（OBI）,并获得6例BCP序列,发现在TA富含区的变异相对较多,1例样品发生缺失变异,6例OBI血样共有14个变异位点在BCP区域。结论本方法能对可疑标本进行检测和定量,通过BCP区域的检测进行OBI的确认。     

深圳献血人群隐匿性乙型肝炎病毒全基因序列系统进化树分析

目的了解深圳献血人群隐匿性乙型肝炎B和C基因型及亚型的分布规律,研究不同毒株全基因序列进化关系。方法对30例HBsAg(-)/HBV DNA(+)标本进行基本核心启动子/前C区(BCP/PC,295 bp)、HBV全基因(3 162 bp)巢式PCR扩增,PCR产物克隆后测序。2者均为阳性的5份标本合成3 215 bp长的全基因序列,与GenBank中已发表的HBV A～H基因型23株的全序列进行系统进化树分析确定基因型,将所属基因型B和C亚型再作系统进化树分析,以确定基因亚型。结果获得5例全基因序列,4例为C型,1例为B型。分属于C2,C2,C2,C1和B2亚型。3例C2亚型与日本、马来西亚基因亚型的进化距离最近,C1株与马来西亚和泰国2例携带者的病毒株进化距离最近。B2株与印度尼西亚华裔基因亚型的病毒株进化距离最近。结论深圳献血人群隐匿性乙型肝炎感染病毒基因亚型有C2,C1,B2,以C2亚型为主。     

核酸检测中两种核酸提取方法的比较

为了提高输血安全，有效缩短EIA的“窗口期”，检出病毒变异株，降低血源性病毒的传播，深圳市血液中心除按献血法要求对血液进行常规检测外，还对常规检测结果合格的血液标本进行核酸检测。     

深圳献血员HBsAg阴性HBVDNA阳性的追踪分析

目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析，以期发现血清转换期标本。方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg)，丙型肝炎抗体(抗-HCV)，爱滋病抗体(抗-HIV)，梅毒螺旋体抗体(抗-TP)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)，对各项结果均为阴性者进行核酸检测(NAT)筛查，对HBVDNA阳性献血员进行核酸定量追踪。结果从16512人份标本中筛出8份HBVDNA阳性，其中7例HBVDNA定量检测均能检测出HBVDNA的拷贝数，1例因HBVDNA含量过低不能检出拷贝数，随后追踪标本中HBVDNA含量均无显著性变化，未发现血清转换期献血员。结论所用酶联检测试剂及NAT筛查试剂均有较高灵敏度，核酸定量检测试剂定量较准确，HBVDNA定性检测结果为阳性并不一定说明体内有较高含量的HBVDNA拷贝数，应加大核酸筛查力度，才能发现血清转换期标本，从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据。     

甲基橙间接微容量比色校正法的建立及应用

实验室微容量器具的校正大多采用水银重量法 ,其结果准确可靠但操作繁琐 [1 ]。千分尺校正法又只能校正刻度吸管 [2 ] 。这些方法均不合适校正实验室仪器的加样针及试剂加注部分。本文参考文献 [3]的基础上 ,应用酶标仪微量比色进行间接校正 ,经应用 ,结果良好。1　材料与方法1.1　实验器材　瑞士智能加样仪 ;DIAS酶免疫分析仪 ;SL T酶标仪 ;美国 96孔平底微板 ;芬兰数字加样器 ;SOFT2 0 0 0读数分析软件。1.2　校正液 A及 B　 1.5 mmol/ L 和 0 .15 mmol/ L 的甲基橙水溶液 ,校正加样仪加血清时应每 10 0 ml校正液加入丙三醇 5 m l调…     

深圳地区2003—2012年献血者HBsAg／NAT检测结果情况分析

目的分析深圳地区2003—2012年期间献血者HBV感染的流行走势情况。方法所有献血者血样均使用进口与国产酶联免疫试剂,以及血液病毒核酸检测（NAT）方法筛查HBsAg和HBVDNA,采用X^2检验进行统计分析献血者感染HBV的流行趋势。结果深圳地区2003—2012年采血量稳步增长,HBsAg阳性检出率总体呈下降趋势。HBsAg＋／NAT＋与HBsAg＋／NAT-检出率结果相当（1．2：1）;献血者中HBsAg-／HBVDNA＋阳性率呈升高趋势。不同年龄组献血者HBV感染率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论酶联免疫与NAT方法为重要的互补检测手段,能进一步确保输血安全,而隐匿性乙型肝炎病毒感染呈升高态势,应引起高度重视。     

深圳市无偿献血血液筛查结果分析

目的 :了解深圳无偿献血输血感染性疾病真实感染情况。方法 :采用血清学实验 EL ISA (酶联免疫吸附试验 )、 RIBA (重组免疫印迹试验 )、 WB (免疫印迹试验 )、 TRU ST (甲苯胺红不加热血清试验 )、 TPHA (梅毒螺旋体血凝试验 )和中和实验及分子生物学实验 PCR (聚合酶链反应 )进行血液初筛和对阳性结果进行确证分析。结果 :深圳市无偿献血输血感染性疾病 HBV、抗 - HCV、抗 - HIV和梅毒流行率分别为 0 .79%、 0 .0 92 %、 4 .4 5 / 10万和 0 .6 3%。结论 :应提高目前试剂的特异性和灵敏度 ,进一步确保输血安全。     

深圳市无偿献血者丙型肝炎检测结果回顾性分析

目的了解深圳无偿献血人群抗-HCV感染情况。方法对深圳市2000～2004年220218名无偿献血者血液标本抗-HCV ELISA试剂筛查阳性率进行分析比较，并对部分ELISA结果阳性的标本进行RIBA（重组免疫印迹试验）确认分析。结果深圳市无偿献血者HCV感染率呈逐年明显下降趋势（P〈0．005）。低于全国平均水平；抗-HCV ELISA试剂的存在一定的假阳性。结论应大力提倡无偿献血，提高检测试剂的特异性和灵敏度。进一步确保输血安全。     

锁核酸结合分子信标技术检测乙型肝炎病毒DNA G1896A点突变研究

目的研究和评估乙型肝炎病毒（HBV）DNA G1896A点突变的实时荧光PCR检测方法。方法收集经测序验证HBV DNA G1896A未突变的野生型样本150例和已发生突变的突变型样本58例,在突变区域设计分子信标探针,点突变处进行锁核酸处理,利用荧光PCR方法检测HBV前C区G1896A点突变;再从临床标本中随机抽取18例、8例和19例荧光PCR结果分别显示为G1896A突变的标本、杂合的标本以及野生型的标本的PCR产物进行序列测定。结果突变型质粒和野生型质粒的检测灵敏度均可以达到100copies/ml;突变型探针检测高浓度的野生型质粒时无检测信号,野生型探针检测高浓度突变型质粒时无检测信号;突变型模板在总杂合模板中的比例达到5%时则都可以将突变型检测出来;序列测定的8例G1896A突变标本、6例杂合标本和19例野生型标本的PCR产物结果和荧光PCR检测结果完全吻合。结论实时荧光PCR检测方法可以快速、简便、准确地检测HBVDNAG1896A点突变,是检测点突变的重要方法,具有重要的临床应用价值。