TRAF-6真核表达载体的构建和转染牙龈上皮细胞

目的:构建TRAF-6与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,为研究其在口腔疾病发病中的作用奠定基础。方法:应用基因重组技术,将反转录PCR得到的TRAF-6基因,克隆入荧光真核表达载体pEGFP-N3中,用含卡那霉素LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子经HindⅢ和KpnⅠ双酶切分析、PCR鉴定。重组质粒酶切鉴定正确后,以脂质体转染牙龈上皮细胞。分别由间接免疫荧光和免疫组织化学检测目的蛋白的表达。结果:获得的TRAF-6基因重组真核表达质粒,经间接免疫荧光和免疫组化检测,TRAF-6成功转染上皮细胞。结论:成功克隆TRAF-6基因,构建了融合有TRAF-6基因的真核表达质粒,对其在体外进行了表达,并转染牙龈上皮细胞,为进一步的研究奠定了基础。     

转染骨形成蛋白(BMPs)Ⅱ型突变受体前后Tca8113细胞周期相关因子表达及凋亡的研究

目的 :明确转染BMP -II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用 ,以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理。方法 :检测转染BMP -II型突变受体的Tca8113舌癌细胞 (Tca8113ZR细胞 )和Tca8113细胞的细胞周期相关因子 (CyclinD1,CDK -4 ,p2 7和p5 7)的表达及凋亡 ,以明确突变受体对细胞周期及生长的影响。结果 :转染了BMPⅡ型突变受体后 ,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论 :BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用 ,BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变。     

bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的：探讨bFGF和TGF-β对体外培养的人牙髓f细胞增殖和分化能力的影响。方法：采用MTT法分别测定了bFGF和TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓十细胞分化能力的影响。结果：0～40ng／mL范围内，bFGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖，EL具有浓度和时间依赖性，而TGF～8促增殖作用较弱；两肯联合作用，促增殖作用无显著提高，而促分化作用显著增强，不仪细胞形态明显改变，而且碱性磷酸酶活性显著提高，DSP、DMP-1呈阳性表达，向成牙本质细胞样细胞分化。结论：bFGF和TG-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用，为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。     

矿化液对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的 探讨矿化液对人牙髓干细胞(DPSCs)生长特性的影响.方法 用含一定浓度的β-甘油磷酸钠、抗坏血酸和地塞米松的矿化液诱导人牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学染色、von Kossa染色方法,观察和检测矿化液诱导后细胞形态、超微结构、表型和矿化基质分泌的变化,以未诱导组为对照.结果 矿化液连续培养7d,人DPSCs细胞形态明显改变,呈牙本质样极化细胞表现,另一侧为增大的胞体;超微结构显示,诱导后的细胞体积增大,核浆比例下降,胞浆细胞器丰富;诱导前细胞不表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OC),诱导后均表达;连续培养21d,诱导组细胞形成多个矿化结节.结论 矿化液能诱导人DPSCs向成牙本质细胞样细胞分化并产生矿化基质.本研究从细胞水平上揭示了人DPSCs向成牙本质细胞分化机理,为人DPSCs应用于牙髓损伤的修复再生提供了依据.     

IgG4相关性疾病的临床特征研究

背景IgG4相关性疾病（IgG4-RD）是一种少见的慢性炎症伴纤维化疾病,其临床表现缺乏特异性,易造成漏诊或误诊。目的分析IgG4-RD患者的临床特征。方法回顾性分析2015年1月至2019年9月郑州大学第一附属医院收治的106例IgG4-RD患者的临床资料,包括一般资料、实验室检查结果、影像学检查结果、组织病理学和治疗情况,并通过电话或查询病史资料的方式进行随访,随访时间截至2020-01-01。结果106例IgG4-RD患者中,男69例,女37例;发病年龄（54.6±13.1）岁。最常见受累器官包括淋巴结（67.0%）、涎腺（37.7%）、胰腺（35.8%）等。单个器官受累17例（16.0%）,中位受累器官为3（2,4）个。女性涎腺、泪腺受累发生率高于男性,胰腺受累发生率低于男性（P<0.05）。96.1%（99/103）的患者血清IgG4≥1.35 g/L,79.6%（82/103）的患者血清IgG4≥2.7 g/L。与血清IgG4<2.7 g/L患者相比,血清IgG4≥2.7 g/L患者反应指数（RI）值、嗜酸粒细胞计数、IgG水平、IgG2水平、低补体血症发生率更高以及受累器官数目更多（P<0.05）。胰腺受累组低补体血症发生率高于未受累组,肾脏受累组低补体血症发生率高于未受累组,涎腺/泪腺受累组累及器官数目及嗜酸粒细胞增多症发生率高于未受累组（P<0.05）。88例患者接受单用糖皮质激素或激素联合免疫抑制剂治疗,临床缓解率为97.2%。86例患者获得随访,其中32.6%（28/86）的患者出现复发。结论IgG4-RD临床特点在性别以及不同受累器官之间存在差异,血清IgG4升高可能代表更高的疾病活动度,及时使用激素或激素联合免疫抑制剂可有效缓解病情。     

柴芪汤对非酒精性脂肪肝大鼠固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的:观察柴芪汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)m RNA及蛋白表达的影响,探讨其防治NAFLD的可能机制。方法:将32只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、柴芪汤组和罗格列酮组,每组8只,采用高脂高糖高盐饮食喂养8周复制NAFLD模型,造模第一天开始用药,给予柴芪汤[5.67g/(kg·d)]及罗格列酮混悬液[3 mg/(kg·d)]灌胃干预,8周后检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及肝组织中TG含量;观察肝组织病理形态改变;Western Blot测定肝SREBP-1c蛋白表达;RT-PCR测定肝SREBP-1c m RNA表达。结果:模型组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平及肝组织中TG含量明显高于正常组(P0.05),2用药组各项指标低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);但2组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。2用药组SREBP-1c m RNA及蛋白表达水平较模型组降低,差异具有统计学意义(P0.05),但2用药组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:柴芪汤能够改善NAFLD大鼠肝脏脂肪变,其干预效果与西药罗格列酮相似,抑制SREBP-1c m RNA和蛋白表达,从而降低NAFLD大鼠血清ALT、AST、TG、TC、HLD-C、LDL-C,这可能是柴芪汤治疗NAFLD的机制之一。     

白血病抑制因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖和分化的影响

目的：探讨白血病抑制因子LIF对小鼠下颌突外胚间充质细胞增殖和分化的影响。方法：用含10^6u／L LIF的DMEM／F12培养小鼠下颌突外胚间充质细胞，MTT法、Brdu检测、流式细胞仪分析进行增殖及生长曲线测定；免疫组化鉴定分化状况。结果：含LIF的培养液使细胞的增殖活性增加，细胞处于未分化状况。结论：10^6u／L的LIF对细胞增殖起促进作用，并能有效抑制分化。     

Tea8113舌癌细胞转染骨形成蛋白-Ⅱ型突变受体前后细胞周期相关因子表达的定量分析

目的 明确转染骨形成蛋白（BMP）-Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用，以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法 检测转染BMP-Ⅱ型突变受体的Tca8113舌癌细胞（Tca8113ZR细胞）和Tca8113细胞的细胞周期相关因子Cyclind1、CDK-4、p27和p57的表达。结果 转染了BMP-Ⅱ型突变受体后，肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论 BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用，BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变。     

人重组骨形成蛋白-2诱导NIH3T3细胞向成骨细胞表型转化

目的探讨人重组骨形成蛋白一2 (rhBMP-2)对NU13T3成纤维细胞生物学行为的影响。方法培养 NIH3T3细胞，加人外源性rhBMP-2，用生长曲线、唾哇蓝(MIT)比色、流式细胞仪(FCM)分析、BrdU检测观察细胞的增殖和DNA合成，并检测碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)含量观察细胞是否有成骨趋向。结果加药组细胞的增殖活性下降、DNA合成变慢，All]活性和OC含量均增高。结论rhBMP-2使NIH3T3细胞增殖活性变弱，表现成骨细胞表型。     

人牙周膜干细胞矿化诱导分化的实验研究

目的：体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其体外矿化能力,为牙周组织工程提供可靠的种子细胞来源。方法：采用有限稀释法克隆分离纯化人牙周膜干细胞,将获得的第5代细胞用矿化液连续培养,观察矿化情况,进行矿化结节Von kossa染色;通过免疫组织化学染色技术检测诱导后细胞骨黏连素（ON）、骨桥蛋白（BSP）、Ⅰ型胶原（COLⅠ）、Ⅲ型胶原（COLⅢ）的表达。结果：人牙周膜细胞在体外可以叠层生长,形成肉眼可见的灰白色结节,Von kossa染色显示结节内有钙盐沉积,该细胞诱导21 d后有矿化相关蛋白COLⅠ、COLⅢ,BSP、ON的阳性表达。结论：人牙周膜干细胞在体外矿化液作用下出现向成骨细胞的分化。