AdCDES 对人肺癌细胞增殖抑制作用的研究

目的：观察构建的AdCDES重组腺病毒对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法：采用同源重组法构建AdCDES。用测定生长曲线和MTT法观察AdCDES和5FC系统对人肺腺癌细胞A549的生长抑制率。结果：AdCDES转染A549后对细胞生长有明显的抑制作用，且对细胞抑制率随。AdCDES、5 FC的浓度及药物作用时间的增加而增高，差别有统计学意义。结论：AdCDES和5 FC系统对肺腺癌细胞A549有明显抑制作用，为AdCDES用于基因治疗奠定了基础。     

乳腺癌rAdCDES基因治疗的体内外实验研究

恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康和生命的疾病.目前,将多种目的基因融合后行肿瘤基因治疗已为众多学者所关注.将胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和内皮抑素(ES)基因融合成重组腺病毒rAdCDES,并观察其在体内外对乳腺癌细胞生长抑制作用,以期为乳腺癌的基因治疗提供新的研究方向.     

重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用

目的: 探讨含腺病毒基因E1A、融合自杀基因CDglyTK及报告基因GFP的重组腺病毒rAdE1ACDglyTK与酶前体药物5FC和(或)GCV联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用。方法: 将重组腺病毒质粒prAdE1ACDglyTK经脂质体介导转染293细胞，进行病毒的扩增、纯化与PCR鉴定，以紫外分光光度法与TCID50法测定纯化病毒的颗粒浓度与感染性滴度，计算病毒比活性；在SKOV3细胞中观察重组病毒的复制能力及感染效率，确定感染率达90%以上的最小MOI。用MTT法观察感染重组病毒的SKOV3细胞对5FC或GCV的敏感性，并计算IC50；观察一定MOI的rAdE1ACDglyTK或重组复制缺陷型腺病毒rAdCDglyTK与IC50的5FC和(或)GCV联合应用对SKOV3细胞生长的抑制作用。结果: 经PCR和琼脂糖凝胶电泳证实，纯化重组腺病毒中存在E1A和CDglyTK两个基因片段，其病毒颗粒浓度和感染性滴度分别为9.47×1011VP/ml和3.16×1010IU/ml，病毒比活性为3.34%。重组病毒可在SKOV3细胞中复制，对SKOV3细胞的感染效率随MOI的增加而增加，可致细胞感染率达90%以上的最小MOI为50 IU/cell。5FC或GCV明显抑制感染细胞的生长，且存在明显的剂量依赖效应。两种重组腺病毒/前药系统的抑瘤作用比较显示，rAdE1ACDglyTK组细胞生长抑制率\[(16.57±1.59)%\]显著高于rAdCDglyTK组\[(10.44±1.80)%，P<0.01\]；与IC50的5FC和GCV双药联合应用，其抑制率达(71.68±2.63)%，显著高于rAdCDglyTK/5FC+GCV组的(63.64±2.91)%（P<0.01）。结论: 重组腺病毒rAdE1ACDglyTK与酶前体药物联合应用对卵巢癌SKOV3细胞具有显著的抑制作用，其效果优于重组复制缺陷型腺病毒rAdCDglyTK。     

重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用

目的：探讨含腺病毒基因EIA、融合自杀基因CDglyTK及报告基因GFP的重组腺病毒rAd-E1A—CDglyTK与酶前体药物5-FC和（或）GCV联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用。方法：将重组腺病毒质粒prAd—E1A—CDglyTK经脂质体介导转染293细胞，进行病毒的扩增、纯化与PCR鉴定，以紫外分光光度法与TCID50法测定纯化病毒的颗粒浓度与感染性滴度，计算病毒比活性；在SKOV3细胞中观察重组病毒的复制能力及感染效率，确定感染率达90％以上的最小MOI。用MTT法观察感染重组病毒的SKOV3细胞对5-FC或GCV的敏感性，并计算IC50；观察一定MOI的rAd—E1A—CDglyTK或重组复制缺陷型腺病毒rAd—CDglyTK与IC50的5-FC和（或）GCV联合应用对SKOV3细胞生长的抑制作用。结果：经PCR和琼脂糖凝胶电泳证实，纯化重组腺病毒中存在肼4和CDglyTK两个基因片段，其病毒颗粒浓度和感染性滴度分别为9．47&#215;10^11VP／ml和3．16&#215;10^10IU／ml，病毒比活性为3．34％。重组病毒可在SKOV3细胞中复制，对SKOV3细胞的感染效率随MOI的增加而增加，可致细胞感染率达90％以上的最小MOI为50IU／cell。5-FC或GCV明显抑制感染细胞的生长，且存在明显的剂量依赖效应。两种重组腺病毒／前药系统的抑瘤作用比较显示，rAd—E1A—CDglyTK组细胞生长抑制率[（16．57&#177;1．59）％]显著高于rAd—CDglyTK组[（10．44&#177;1．80）％，P〈0．01]；与IC50的5-FC和GCV双药联合应用，其抑制率达（71．68&#177;2．63）％，显著高于rAd-CDglyTK／5-FC＋GCV组的（63．64&#177;2．91）％（P〈0．01）。结论：重组腺病毒rAd—E1A—COglyTK与酶前体药物联合应用对卵巢癌SKOV3细胞具有显著的抑制作用，其效果优于重组复制缺陷型腺病毒rAd—CDglyTK。     

仙台病毒HN基因核酸疫苗的构建及初步鉴定

目的：构建用于防治仙台病毒感染的核酸疫苗并初步鉴定。方法：使用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)，从新分离的仙台病毒天津株基因组中扩增出HN全部编码序列，将其插入pcDNA3的Pcmv下游，构建仙台病毒HN基因核酸疫苗。PCR、酶切和测序进行鉴定。结果：鉴定证实了核酸疫苗的构建。结论：构建好的核酸疫苗为下一步的体外表达和动物免疫实验奠定基础。