第二代基因工程乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的质量鉴定和应用

<正> 1984年我们曾报道采用基因工程技术,将克隆到大肠杆菌质粒上的HBV(乙型肝炎病毒)基因组,经过体外切割重组,使其中的HBcAg基因能在大肠杆菌中表达,并以这种细菌产物为抗原,即第一代国产基因工程HBcAg(简称E_1HBcAg),建立了检测血清中抗HBc和抗HBc-IgM的ELISA方法。经1年多的实践考核,效果良好,说明基因工程产HBcAg完全可以替代HBV     

小鼠肉瘤180细胞在体内外分泌粒细胞集落刺激因子

本文首次证实小鼠肉瘤180(S_(180))细胞可在体内外自发分泌高滴度的粒细胞集落刺激因子(GCSF)。分泌活性持续稳定。LPS、PHA可刺激S_(180)产生高分泌活性。咐波豆冠酸乙酯(TPA)具有协同作用;钙离子通透剂A23181在TPA协同下有很强的诱导作用。ConA无刺激S180分泌GCSF作用,并可抑制TPA的诱导活性.S180的腹水中亦含有高滴度的GCSF活性。腹水瘤细胞转入体外培养后仍保持GCSF分泌活性,为大量制备、纯化S180GCSF提供了有利的条件。     

大肠杆菌合成HBcAg的制备及其在乙型肝炎诊断上的应用

以HBcAg的基因重组到能表达的大肠杆菌MM206株,制备了大肠菌HBcAg的粗提物。用酶联免疫吸附检测时只与抗-HBc发生特异的免疫学反应,与人肝HBcAg进行对比性平行检测78份血清标本,结果完全一致,与Abbott药盒检测抗-HBc的结果相比较,总符合率为97.3％。用于筛选献血员,阳性检出率较只测HBsAg高8.9％,对临床肝炎病人的阳性检出率也较只测HBsAg高16.5％。粗制HBcAg经亲和层析可一步纯化到电泳一条主带上。对该抗原应用情况和纯化问题进行了讨论。     

我国部分地区献血员HCV感染的血清流行病学研究

对甸部分地区献血２２７３人ＨＣＶ感染的血清流行病学进行了研究。义务献血员抗－ＨＣＶ检出率为０－１．１０％，辽宁和安微职业献血员抗－ＨＣＶ检分别为１．４９％和３．１４％，但河北和内蒙职业献血－ＨＣＶ检出率高达３０．１３％和３１．８６％。既往有肝炎病史、ＡＬＴ异常史以及ＡＬＴ异常者抗－ＨＣＶ检明显高于无肝炎病史和ＡＬＴ异常者抗－ＨＣＶ检出率明显高于无肝炎病史和ＡＬＴ正常者；献血浆是感染ＨＣＶ的主要原因     

菌落原位酶联免疫检测

本文介绍了一种用于筛选外源基因重组子的方法。将生长在培养皿上的菌落用氯仿原位裂解,释放出抗原。采用双抗体夹心法用抗体包被聚乙烯薄膜,覆盖在培养皿上,通过抗原抗体反应使抗原结合到聚乙烯薄膜上,再与酶标抗体结合,覆盖在含有底物(四甲基联苯胺)的明胶板上显色,在阳性菌落的部位出现蓝斑。采用此法由235个含有乙型肝炎核心抗原基因的重组子中,筛选到6株能产生此抗原的菌株,方法简单,不用同位素。     

质粒DNA简易制备法

在DNA重组试验中,所需质粒DNA的制备往往耗费很多人的精力和时间。而且一般都需要高速冷冻离心机。因此,建立一种质粒DNA简易制备法是很有必要的。为此我们将Birnboim等人的碱变性快速提取法(以下简称碱变性法)和Ohlsson等人的两相快速分离法(以下简称两相法)等两种微量方法相结合,用于大量制备质粒DNA,获得了较满意的结果。该方法简便易行、得     

抗人白细胞间素-2 McAb亲和力排列及亲和指数的测定

利用蛋白浓度校正的ELISA稀释曲线快速确定了抗人白细胞间素-2(IL-2)单克隆抗体(McAb)的亲和力排列。该排列与用竞争ELISA测定的亲和常数(K_D值)相一致。为了更实际地确定McAb的用途,又用十二烷基磺酸钠(SDS)等解离因素,建立了反映 McAb在实际应用时亲和力变化强度的吸附-解离ELISA,测定McAb的亲和指数(ID)。根据亲和力排列和亲和指数可更准确地取舍McAb,供检测或亲和色谱使用。     

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIv-1)gag前体蛋白片段在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）核心抗体的检测对于ＨＩＶ－１感染者的筛选及确证分析，感染病人的预后分析都具有重要的意义。为此需要获得大量重组核心蛋白。本文利用新型原核表达载体ｐＤＯＧ，在大肠杆菌中高效表达了人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）ｇａｇ基因片段。表达载体利用ＬＰＲ启动子以及Ｔ７噬菌体基因１０（ｇ１０）的核糖体结合位点（ＲＢＳ）来有效起始表达基因的翻译。表达片段ＰＧ１包括ｐ１７Ｃ－端１３ａａ、整个ｐ２４以及ｐ１５Ｎ－端７４ａａ。与ＰＧ１相比ＰＧ２片段不含有ｐ１７序列，并缺失了ｐ２４Ｎ－…     

McAb夹心ELISA测定人IL-2及其影响因素的探讨

用抗人白细胞间素-2(IL-2)单克隆抗体(McAb)及多克隆抗体建立了敏感的测定IL-2的夹心ELISA。测定范围为1.5u～1000u/ml,与生物学方法有较好的可比性。十二烷基磺酸钠、盐酸胍、尿素及二巯基乙醇等重组IL-2纯化制备中常用的变性剂对本法有不同程度的干扰,而血清则无。用戌二醛预处理包被板可明显减弱这些试剂的干扰作用,并可将测定的敏感性提高2倍。本法也可用以快速确定亲和层析纯化IL-2的条件及抗IL-2McAb的构相表位相关性。     

绿脓杆菌外毒素A的Ⅰ Ⅱ区基因的克隆与表达

绿脓杆菌外表素Ａ是由６１３个氨基酸残基组成的单链杀细胞毒素；利用ＰＣＲ技术直接从绿脓杆菌染色体ＤＮＡ中扩增了外毒素Ａ的Ⅰ＋Ⅱ区的结构基因，通过酶切鉴定、ＤＮＡ序列分析，证实了克隆的基因片段为外毒素Ａ的结构基因；重组表达质粒经诱导表达后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了表达的产物为外毒素Ａ分子。对外毒素Ａ的Ⅰ＋Ⅱ区结构基因的克隆表达为疫苗研制、毒素类似物的制备以及导向药物的构建打下了基础。