丙型肝炎病毒外膜E_2／NS_1区基因在大肠杆菌中的表达

将丙型肝炎病毒外膜Ｅ_２／ＮＳ_１基因亚克隆至融合型表达载体，在大肠杆菌中进行表达，表达的重组蛋白经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ鉴定具有丙型肝炎病毒外膜蛋白的抗原性，能与丙型肝炎病毒感染血清发生特异性结合反应，为研究外膜蛋白抗体的意义创造了条件。     

乙型肝炎病毒核心抗原高表达质粒的构建

我们利用了外切酶剪切,人工接头平端连接等DNA重组技术将乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因片段插入于乳糖启动子下游的β-半乳糖苷酶结构基因中,获得了能高效表达HBcAg的重组质粒。ELISA方法检测表明,转化的大肠杆菌每毫升培养物含一万酶联免疫反应单位。     

抗人白细胞间素Ⅱ高效价多克隆及单克隆抗体的制备

采用不同免疫方案免疫家兔及小鼠制备抗人IL-2多克隆及单克隆抗体。其中以沙门氏菌体吸附方法效果最佳,其免疫效价比福氏佐剂方法高数倍、而抗原用量却仅为前者的1/4。选用强化加强免疫及细胞富集措施,并采用大鼠胸腺混合培养上清替代滋养细胞,一次融合获得106个阳性株。经过自然淘汰试检,筛选出18株稳定分泌抗人IL-2单克隆抗体的杂交瘤,其中未亚克隆化的原始孔细胞在体外连续传代2个月以上,仅三株出现抗体转阴现象。     

丙型肝炎病毒再感染与初次感染对比研究

用套式ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，对比研究了ＨＣＶ再感染与初次感染。１０例初次感染ＨＣＶ者，９例为临床型肝炎，１例亚临床型，首次ＡＩ／Ｔ升高距输血的时间为１５～６０天（平均３７．９±１３．９）；抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１年以上分别为１０／１０和７／１０。５例再感染者，４例为临床型肝炎，１例亚临床型，ＡＬＴ首次升高距输血时间为３０～４６天（平均３４．８±６．ｈ），抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性１年以上分别为５／５和３／５。结果表明，ＨＣＶ再感染与初次感染在临床表现、ＡＬＴ异常。抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性持续时间等均无明显差异，提示ＨＣＶ感染后诱发的免疫力较差，再感染仍可发病。     

EPCA:早期前列腺癌检测的新指标

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤.一种新近发现的前列腺癌生物标志物EPCA(Early Prostate Cancer Antigen)显示出良好的特异性和灵敏度.现对该分子标志物的研究现状作一综述.     

重组白细胞介素－1β对小鼠胚胎着床的影响

本文报道了重组白细胞介素－１β（ｒＩＬ－１β）对小鼠胚胎着床的影响，并对其作用机理进行初步的探讨。研究证实，ｒＩＬ－１β能够有效地阻断妊娠第３、４天小鼠胚胎着床的发生，此外，ｒＩＬ－１β能致小鼠早期胚胎发育异常，运行滞缓，并改变小鼠胚泡植入阶段受卵巢激素调控的子宫内膜有丝分裂模式，还诱发着床前子宫腔白细胞浸润现象。上述结果表明，ｒＩＬ－１β对抗着床效应是多因素的协同作用。     

分泌抗HBe单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

乙型肝炎e抗原(HBeAg)是乙型肝炎病毒核心颗粒主要构成蛋白,其合成受乙肝病毒遗传密码所控制。HBeAg检测对肝病临床诊断、传染性判定以及预后等方面均具有重要价值。目前常用的检测方法均是以乙肝患者血清中的e抗体(抗-HBe)作为检测试剂。由于试剂来源困难,且每批效价不一,很难制备统一,标准HBcAg检测试剂,不利于质量控制。近年来改用杂交瘤技术制备抗HBe单克隆抗体(McAb),先后已有一些成功的报道;这些抗HBe McAb对乙型肝炎研究、HBeAg的兔疫化学结构、HBeAg与乙型肝炎c抗原(HBcAg)之关系的研究起了很好的推动作用。但是这些抗HBe McAe效价尚不很理想,     

与ColE1相容的高效表达载体的构建及用于HIV-1蛋白酶在大肠杆菌的表达

描述了两套与ＣｏｌＥ１相容的Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体的构建过程。表达载体的复制起点来源于ｐＡＣＹＣ１７７，用此表达的蛋白可以方便地与通常使用的ＣｏｌＥ１来源的表达载体表达的蛋白共表达。这些载体带有Ｋｍ筛选标记，利用Ｔ７噬菌体的ｇ１０的先导序列增强翻译起始。已用于有活性的重组ＨＩＶ－１蛋白酶在Ｅ．ｃｏｌｉ胞质中的高效表达。重组蛋白酶与天然蛋白酶序列一致，且具有离体与在体的切割活性。从中可以纯化出大量的ＨＩＶ－１蛋白酶，满足生化分析以及抑制剂筛选的需求     

碱变性、羟基磷灰石柱层析提取质粒DNA

前言提取质粒DNA的方法很多,目前常用的方法有酸酚法、两相法、碱变性法等。但这些方法都不易将质粒DNA中的RNA去除干净,这样不但会影响质粒DNA中的准确定量,酶切DNA片段的分离,而且会影响DNA片段的5′末端以r[~(32)P]-ATP和多核苷酸激酶的标记。氯化铯梯度离心虽然能将质粒DNA中的RNA去除干净,但此法需要贵重的仪器超速离心机和氯化铯。羟基磷灰石柱层析也可去除质粒DNA中的RNA,但在柱层析之前一般是采用溶菌酶和TritonX-100将菌体裂解,然后25000rpm     

以人胚肾培养细胞总Poly(A)~ mRNA为模板反转录合成ds-cDNA的研究

反转录酶合成cDNA常产生不完全的转录产物。为获得全长基因组的cDNA拷贝并提高它在总cDNA中的比例,文献中已提出了一些措施,效果如何尚有争论。我们以人胚肾培养细胞总Poly(A)~ mRNA为模板,参照Maniatis的方法,建立了一个比较简单易行的反转录程序,合成了较长的cDNA拷贝。材料和方法试剂和酶 dATP、dCTP、dGTP、dTTP均为Sigma产品。[~3H]-dTTP(27.2Ci/mmol,0.5mci/ml)上海原子能研究所产品。Oligo(dT)_(12-18),反转录酶(AMVRTase,20BRL单位/μl)为BRL产品。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(500单位/0.11ml)为Boehringer产品。SI酶为Sigma产品。其余试剂