维C银翘片中对乙酰氨基酚含量的测定

目的：用高效液相色谱法测定维C银翘片中对乙酰氨基酚的含量。方法：采用C18柱（4.6±250mm,5μm）,甲醇-水（40：60）为流动相,检测波长为249nm,流速为1.0ml/min。结果：测得对乙酰氨基酚含量为91.51%。结论：该方法简便、快速、准确,适用于维C银翘片的质量控制。     

PFNA治疗老年不稳定股骨粗隆骨折疗效分析

目的：评价股骨近端抗旋髓内钉(PFNA)治疗老年不稳定股骨粗隆骨折的疗效。方法回顾性分析本院2012年1月至2013年3月采用PFNA内固定治疗＞60岁的老年股骨粗隆骨折患者33例,骨折分型按照改良Evans分型,其中Ⅲ型11例、Ⅳ型12例,Ⅴ型8例,反粗隆间骨折2例。术后随访9～18月,平均12.2月,评价患者手术时间、术中出血量、术后骨折愈合时间、髋关节功能及术后并发症。结果所有病例均骨性愈合,术后髋关节功能按Harris评分：优：12例,良：17例,可4例,优良率：87.88%。患者术后骨折愈合时间：（14±3）周,手术时间：（70±15）分钟,术中出血量：（101±30）ml;并发症：术后1例患者浅表创面感染而延期愈合,1例患者轻度髋内翻,其余病例无股骨头切割、无髓内钉断裂或弯曲,无术后再骨折。结论股骨近端抗旋髓内钉(PFNA)是治疗老年不稳定股骨粗隆骨折的有效方法,具有术中创伤小、出血少、术后骨折愈合时间短及早期负重的优点。     

靶向白血病干细胞CD123的毒性融合蛋白的制备

 目的　构建靶向白血病干细胞CD123的融合蛋白,检测其表达效果及其识别白血病干细胞的活性。方法　采用PCR法扩增白细胞介素-3（IL-3）和毒素蛋白（LP）的编码DNA序列,经酶切、连接,克隆至表达载体pAYZ,转化大肠杆菌E.coli 16C9,鉴定阳性克隆菌落,经低磷培养基AP5诱导表达融合蛋白IL-3-G4S-LP,用CM-FF阳离子柱和抗-Etag亲和层析柱纯化,纯化产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,流式细胞术测定其与红白血病细胞TF1的结合活性。结果　构建的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶性蛋白表达,纯化后纯度达95 %以上,表达量约为1 mg／L,并有与白血病干细胞表面IL-3受体α亚基（CD123）特异性结合的活性。结论　构建的融合蛋白IL-3-G4S-LP具有与白血病干细胞结合的特性,可望成为复发和耐药白血病的治疗药物。     

干细胞因子逆转录病毒表达载体的构建及体外性质研究

目的 通过逆转录病毒介导两种类型人干细胞因子在NIH3T3细胞中稳定表达,并研究它们对白血病细胞的作用.方法 用DNA重组技术构建并鉴定可溶型及膜结合型干细胞因子的重组逆转录病毒表达载体MSCV-PGK-GFP-sSCF、MSCV-PGK-GFP-mSCF,与空载体对照MSCV-PGK-GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒,并感染NIH3T3细胞,流式分选术获得3种阳性细胞,CCK8法分别检测与其共培养的K562细胞的增殖情况.结果 成功构建了sSCF、mSCF逆转录病毒表达载体;经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染NIH3T3细胞,获得了稳定表达细胞株NIH3T3-S、NIH3T3-M和对照细胞株NIH3T3-V.共培养中NIH3T3-S、NIH3T3-M均可促进K562细胞的增殖,且在低血清条件下,NIH3T3-M的作用高于NIH3T3-S.结论 可溶性及膜结合SCF分别通过旁分泌和并置性作用促进白血病细胞的增殖.     

三步法制备级纯化抗CD20（Fab′）2

目的在小规模蛋白纯化系统AKTA prime上建立制备级纯化抗CD20(Fab′)2的方法。方法将通过高渗溶液提取的周质腔蛋白抗CD20(Fab′)2依次经过离子柱、疏水柱和亲和柱纯化,采用蛋白电泳和高效液相色谱法分析检测其分离效果及纯度,同时测定其与Raji细胞的结合活性。结果在该纯化条件下一次可获得8mg纯度为96.678%的抗CD20(Fab′)2,其与CD20 Raji细胞的结合活性与采用亲和柱联合分子筛柱得到的抗体活性基本一致。结论三步法制备级纯化抗CD20(Fab′)2操作简单,能获得制备级高纯度抗CD20(Fab′)2。     

阿糖胞苷增强K562细胞共刺激分子B7表达以及对T细胞的免疫应答

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-c)对白血病细胞(K562)B7分子表达以及对T细胞免疫应答的影响.方法 用流式细胞术检测K562细胞经Ara-c处理后町分子的表达以及对T细胞表面标记的影响.MTT法检测不同效靶比的情况下,诱导后的K562细胞对外周血单个核细胞(PBMNC)的刺激作用,以及用RT-PCR法检测B7分子刺激PBMNC分泌细胞因子γ干扰素(IFN-γ)的测定.结果 Ara-c能刺激K562细胞B7分子的表达,呈时间依赖性.诱导后的K562细胞显著刺激PBMNC增殖并产生IFN-γ,并能检测到T细胞表面标记.结论 Ara-c通过刺激K562细胞B7分子表达,显著提高了白血病细胞的免疫原性.     

去除Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体原核表达载体的构建及表达

目的:构建和表达不带Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody[CD3×Pgp]),并测定其生物学活性。方法:利用PCR方法构建不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]原核表达载体,进行原核表达,制备抗抗CD3scFv亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定。通过间接免疫荧光法和竞争性免疫荧光结合流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:无Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体经测序证实其序列正确。SDS-PAGE电泳显示2条带,相对分子质量(Mr)分别为25000和26000,与预期Mr相符。去除Etag的Dia-body[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合阳性率分别为89.87%和83.95%。竞争结合实验中,与K562/A02和Jurkat细胞竞争后结合率分别为50.25%和43.78%。结论:成功构建了不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体、进行原核表达及纯化。不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]能特异性结合CD3和Pgp靶抗原,Etag标记去除后其生物学活性没有降低。     

农村合作医疗保险制度实施4年回顾性分析

在农村实施合作医疗保险制度是保证广大农民平等享受基本医疗保障需求的重要举措,也是预防农民因病返贫,脱贫致富的有效手段之一。为落实“三个代表”重要思想和实施农村富民工程,在地方政府和卫生行政部门的支持下,泰州市田河镇全镇农民参加了农村合作医疗保险制度,     

HPLC法拆分氟比洛芬对映体

建立氟比洛芬手性药物的高效液相色谱拆分方法。方法:手性流动相添加剂HPLC法:利用C18柱,以羟丙基-β-环糊精作为手性流动相添加剂,调节有机修饰剂甲醇的比例和添加不同量的三乙胺对氟比洛芬进行拆分;手性固定相HPLC法:利用Chiral-pakAD手性柱,以正己烷-乙腈为流动相基本成分,调整两者不同比例和添加不同量的三乙胺,对氟比洛芬进行拆分。结果:手性流动相添加剂法:使用C18柱对氟比洛芬对映异构体进行拆分,调节流动相中有机修饰剂甲醇浓度、手性流动相添加剂羟丙基环糊精浓度、峰型修饰剂三乙胺的浓度等都不能使氟比洛芬对映体达到基线分离,只能部分分离。手性固定相法:氟比洛芬对映体在Chiral-pakAD手性柱上能达到较好的分离。在正己烷-乙腈流动相系统中,正己烷体积含量为90%,三乙胺体积含量为0.05%的条件下,氟比洛芬对映体得到了较好的分离,分离度为10.0。结论:建立的手性固定相法能有效拆分氟比洛芬对映体而手性流动相添加剂法不能拆分氟比洛芬对映体。