"酚氯仿裂解法"提取质粒DNA

1 材料和方法 1.1 材料 含有人柯萨奇腺病毒受体(human Coxsackie and adenovirus receptor,hCAR)基因的真核表达质粒载体pIRES2-EGFP-hCAR由本研究所构建;转化菌E.coli DH5a由本研究所保存;内切酶PstI购自TaKaRa公司.LB培养基(蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,氯化钠10 g).Tris-饱和酚、氯仿按1:1体积比配制成混合液;无水乙醇;RTE溶液:10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0),1 mmol/L EDTA 20 mg/mL Rnase A(无Dnase).直径35 mm可反复使用针式小滤器及0.22 μm滤膜购自华美生物生物公司.     

己烯雌酚摄入对大鼠生精细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究青春期己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)摄入对SD(Sprague-Dawley)大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法30只35d龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/kg·d~(-1)4个实验组和1个对照组(编码为BDa、BDb、BDc、BDd和BC组,每组n=6)。于青春期[出生后第36天(postnatal day 36,PND 36)至49d(PND 49)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax在生精细胞中的表达。结果与对照组相比,BDa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,BDb、BDc和BDd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有增加趋势。BC、BDa组生精细胞Bax相对弱表达而Bcl-2强表达,伴随DES摄入剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bcl-2表达逐渐减弱,BDd组Bax强表达而Bcl-2弱表达。结论青春期较大剂量DES摄入可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与青春期DES摄入所致的生精细胞凋亡过程。     

不同冲击波源及次数致家兔肾损伤的比较研究

目的探讨不同冲击波源及冲击次数对肾损伤的差异。方法40只健康雄性家兔,按波源分为电磁组和液电组,分别冲击1000次、1500次分为A、B亚组。冲击前、后不同时间测定血清黄嘌呤氧化酶（XOD）、谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX）、抗超氧阴离子自由基,并观察肾脏组织学变化。结果各组血清XOD冲击后即刻升高,72h达峰值（P〈0.01）,14d降至正常水平。GSH-PX、抗超氧阴离子自由基于冲击后24h明显下降,72h降至最低值（P〈0.01）,2周后恢复冲击前水平。A亚组各指标在冲击后24h至7d与B亚组有显著性差异（P〈0.01）;液电及电磁冲击波源之间各指标未见显著性差异。组织学改变在冲击后24h至72h表现损伤最为显著,14d后基本恢复正常。结论冲击波导致的肾损伤程度与冲击次数呈正相关,在保证碎石效果的前提下控制冲击次数可有效减轻肾损伤。液电和电磁两种冲击波源导致肾损伤程度无明显差异。     

在中国人先天性厚甲症Ⅰ型患者中检测出两种KRT6A基因突变

目的 分别研究一个先天性厚甲症Ⅰ型家系和一个散发患者基因突变,探讨基因型与表型的相关性.方法 研究对象包括6例先天性厚甲症Ⅰ型患者,其中包括家系中5例患者和1例散发病例,同时取家系中1名正常人及与该家系无关的100名正常人作为正常对照排除多态性,采用长链PCR特异扩增了外周血基因组DNA的KRT16和KRT6A两个候选致病基因全长,PCR产物直接测序检测突变.结果 家系和散发病例的KRT16基因均未发现基因突变.而两者的KRT6A基因分别出现了突变:家系中5例患者的第465位密码子由TAC突变为CAC,导致酪氨酸由组氨酸替代(Y465H);散发患者KRT6A基因第171位密码子由AAC突变为GAC,导致天门冬酰胺由天门冬氨酸替代(N171D),而该家系中的1名正常人及与该家系无关的100名正常人的DNA测序结果未发现此突变.Y465H和N171D分别位于2B的终末端和1A的起始部这两个突变热点.结论 该家系和散发病例分别存在KRT6A基因突变Y465H和N171D,其中前者为一新的错义突变,N171D近期已有文献报道.该突变可能为先天性厚甲症Ⅰ型的遗传病因.     

2342例孕妇Rh血型及免疫抗体测定与新生儿溶血病

作者对２３４２例孕妇进行了Ｒｈ血型检查，其中３７５例疑有血型抗原免疫者进行了血清免疫抗体测定。结果，检出Ｒｈ阴性孕妇１３例，其中２例血清中存在ＩｇＧ抗Ｄ抗体。对孕妇进行Ｒｈ血型及免疫抗体测定，可为Ｒｈ新生儿溶血病的产前诊断和治疗提供诊断依据，并对孕妇围产期及以后的输血有指导意义。     

孕妇Rh血型及免疫抗体检测的意义

目的:了解孕妇Rh血型及免疫抗体检测对Rh新生儿溶血病的产前诊断价值。方法:用抗D(IgM)血型定型试剂检测Rh血型,用标准红细胞检测孕妇血清中免疫抗体及其效价。结果:836例孕妇中,Rh4例阴性,阴性率为0.48%,1例孕妇血清中检测出抗C、抗D复合性免疫抗体。结论:孕妇应常规检测Rh血型,特别是对有流产史、死胎及输血史的孕妇检查Rh血型及免疫抗体对预防新生儿溶血病及妇幼保健有着重要的意义。     

抗磷脂抗体综合征相关血栓病理机制的研究进展

抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid syndrome,APS)是一种以持续存在抗磷脂抗体(antiphospholipid antibody,APA)为特征、以动静脉血栓形成和病理妊娠为主要临床表现的自身免疫性疾病[1]。血栓是APS最重要的病理特征,但APA诱导血栓形成的机制众多,尚无明确的病理机制。目前认为,这是一种血栓炎症性疾病,特点是磷脂结合蛋白和附着在细胞膜受体、线粒体、氧化脂蛋白和补体成分上的抗原与相关抗体结合,细胞被激活导致凝血和补体级联反应被触发,最终发生血栓或病理妊娠。据统计,APS的年发病率为(2~5)/10万,患病率为(40~50)/10万,患者10年死亡率约为10%[2]。因此,加强对APS相关血栓的认识至关重要,本文对其病理机制进行综述如下。     

早期康复护理干预对脑卒中肢体运动功能的影响

目的：探讨早期康复护理干预对脑卒中肢体运动功能的影响。方法：86例脑卒中患分研究组及对照组．除常规治疗外,研究组患从急性期开始即由康复护师制订并实施早期康复计划,结果：两组治疗前、治疗后一个月、治疗后三个月经Brunnstrom分级、Fugl-Meyer运动项目积分及ADL评分比较,研究组均优于对照组(P<0.05．P<0.01)。结论：早期康复护理介入对降低脑卒中病死率、致残率、减少并发症等均有重要意义。     

益肾排石中药对体外冲击波碎石致肾损伤保护作用的临床研究

目的 探讨益肾排石中药对肾结石患者体外冲击波碎石（extracorporeal shock wave lithotripsy,ESWL）后肾损伤的保护作用及可能机制。方法 选择60例经X线或CT检查结合腹部B超确诊为肾结石而无明显症状患者,随机分两组,中药组于碎石前至碎石后3天口服益肾排石中药,对照组给予日常饮食,观察两组患者ESWL后血一氧化氮（nitric oxide,NO）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor- alpha, TNF-α）、内皮素-1（endothelin-1, ET-1）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、丙二醛（malondialdehyde, MDA）及尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-Dglucosaminidase, NAG)、γ-谷氨酰胺转肽酶（γ-glutamyltransferase, γ-GT)及尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin, β2-MG)的变化。结果 ESWL后对照组血NO、MDA、TNF-α值和ET-1水平显著升高,均高于中药组(P<0.05)。ESWL后对照组血SOD值逐渐下降,ESWL后72 h达低谷值(P<0.05),中药组ESWL前后差异无统计学意义 (P>0.05),与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。ESWL后对照组尿NAG、γ-GT及尿β2-MG值显著升高,与中药组比较,差异有统计学意义 (P<0.05)。结论 ESWL可引起肾结石患者肾损伤,益肾排石中药可通过抗氧化、调节肾脏血流动力学紊乱及炎性介质释放,减轻肾小管上皮细胞损伤。     

Genistein对恶性黑素瘤LiBr细胞Livin基因表达的影响

目的探索Genistein对恶性黑素瘤LiBr细胞Livin基因表达的影响。方法分别在基因和蛋白水平上应用RT-PCR和Western blot检测、确认恶性黑素瘤LiBr细胞Livin的表达;应用RT-PCR检测Genistein作用LiBr细胞后Livin的表达变化,并初步探讨其剂量及时间效应。结果经RT-PCR和Western blot检测,恶性黑素瘤LiBr细胞高表达Livin基因;Genistein作用LiBr细胞后能显著下调Livin基因表达,并且下调过程呈剂量和时间依赖关系,40μmol/L可达到最大沉默效应,其下调Livin mRNA的最大效应出现在作用后96h。结论Genistein能显著下调恶性黑素瘤细胞Livin基因表达。