HDV/HBV感染树鼩肝组织中Bcl2/Bax表达及其在肝细胞凋亡中的作用

目前已有许多实验研究表明Ｂａｘ可促进细胞凋亡 ,Ｂｃｌ2可抑制细胞凋亡[1] 。本研究以ＨＤＶ/ＨＢＶ感染树为研究对象 ,采用免疫组化技术检测树肝组织中ＨＤＡｇ、Ｂｃｌ2 和Ｂａｘ表达 ;采用ＴＵＮＥＬ法原位检测肝细胞凋亡 ,并应用连续切片和双重染色分析丁型肝炎病毒抗原和Ｂｃｌ2 /Ｂａｘ表达以及其与肝细胞凋亡的关系。一、材料与方法1 标本来源 :所有标本取自我科采用ＨＤＶ/ＨＢＶ同时和重叠感染的 8只经血清和肝组织检测ＨＤＶ标志物阳性、伴ＡＬＴ升高的树 ,选取感染后 4～ 10周肝组织标本 (每周取肝组织 1次 )共 45份 ,每…     

肝硬化治疗中的常见问题

<正>肝炎后肝硬化和肝炎肝硬化两种提法含义有一定差异。顾名思义,肝炎后肝硬化是指继肝炎发生后出现的肝硬化状态,而肝炎肝硬化是指肝炎与肝硬化并存的状     

物理型人工肝治疗肝衰竭的研究近况

近年来,生物型人工肝逐渐成为体外人工肝支持系统(extracorporeal liver support sys tem,ELSS)的研究重点,但以解毒功能为主的物理型人工肝并未因此而退出历史舞台.相 反,随着材料与技术的不断进步,其血液净化效果不断提高,成为体外人工肝支持的重要方 法,可单独或与生物型人工肝联合组成混合型生物人工肝用于肝衰竭的临床治疗.现将近几年国外在物理型人工肝研究方面的主要进展作一综述.     

应用单链构象多态性和异源双链分析研究拉米夫定耐药变异

目的 应用单链构象多态性/异源双链分析技术研究慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后乙肝病毒准种组成的改变。方法 聚合酶链反应扩增6例患者治疗前后共12份血清标本中目的片段并逐一分析。结果 拉米夫定治疗前患者体内乙肝病毒聚合酶基因序列准种组成较复杂,准种数在7-14(平均9.8),均高于治疗后准种数4-8(平均5.7),t=3.98,P<0.05。6例患者治疗前的准种分布中有一种或两种优势准种,但比例较低(33.3％-81.80％);治疗后显著升高(78.80％-90.9％),t=3.24,P<0.05。选择优势克隆测序,6例患者经拉米夫定治疗后2例在酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)序列出现M550V/L528M,3例为M5501变异,1例无变异。结论 采用单链构象多态性/异源双链分析技术对人体内病毒作整体性的研究,可避免其他研究方法的片面性,为发现新的变异点提供机会,进一步解释拉米夫定的耐药机制。     

逆向斑点杂交检测乙型肝炎病毒基因型及YMDD变异

目的 应用逆向斑点杂交技术检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型及YMDD变异。方法 合成有生物素标记的引物，PCR扩增两种DNA片段，与尼龙膜上的探针同时杂交，BCIP／NBT显色。结果 检测21例拉米夫啶治疗中的慢性乙型肝炎患者，11例HBV为基因型B，10例为基因型C；YMDD基序有47．6％（10／21）为YMDD，28．6％（6／21）为YVDD，23．8％（5／21）为YIDD。结论 在同一张尼龙膜上检测HBV基因型及YMDD变异，经济实惠、准确快捷，且易于开展。     

微载体培养人肝细胞及肝非实质细胞

目的研究用微载体培养人肝细胞及肝非实质细胞的方法．方法采用体外简易两步灌流和差速离心法获取胎肝细胞和肝非实质细胞，在综合限定条件下进行微载体ｃｙｔｏｄｅｘ３粘附培养，并对培养肝细胞的形态及合成葡萄糖和白蛋白的功能进行动态测定．结果分离肝细胞及肝非实质细胞在接种时即呈明显的聚集倾向，将其与微载体混合振荡孵育２０ｍｉｎ后，二者极易相粘附．在被覆聚羟乙基异丁烯酸的培养瓶内，使用激素限定条件培养液培养约４８ｈ，典型的多细胞聚集球形体得以形成．该形态特征以及白蛋白、葡萄糖合成能力可保持１月结论使用微载体培养人肝细胞和肝非实质细胞具有多种优点，有广泛的应用价值．     

蛋白转导结构域介导乙型肝炎病毒聚合酶末端蛋白重链可变区抗体体外抑制病毒的复制

Objective To study a functional variable fragment of heavy chain(VH)antibody against the terminal protein(TP)region of hepatitis B virus(HBV)polymerase introduced by human immunodeficiency virus Tat protein transduction domain(TAT)and the inhibitive activity of TAT-VH on the replication of HBV in vitro.Methods The gene encoding TAT-VH was cloned into prokaryotic expression vector pET28a(+).Recombinant plasmid was transduced into E coli BL21(DE3)LysS,then the protein was expressed and purified.The purified TAT-VH fusion protein was added into HepG2.2.15 cell culture.The transduction efficiency was evaluated by indirect fluorescence assay(IFA).The cytotoxicity of TAT-VH was detected by Methabenzthiazuron(MTT)assay.HBV DNA level in HepG2.2.15 cell culture was measured using quantitative polymerase chain reaction(PCR).The data were analyzed by one-factor analysis of variance and t test.Results TAT-VH fusion protein was successfully expressed and purified.It was confirmed by IFA and MTT assay that TAT-VH was introduced into HepG2.2.15 cells and the cell growth was not affected.The level of HBV DNA in supernatant of HeDG2.2.15 cell culture with 5 000 nmol/L TAT-VH was(1.211±0.132)lg copy/mL,which was significantly lower than control group[(5.325±0.041)lg copy/mL,t=72.91,P＜0.05].Meanwhile,the level of intracellular HBV DNA was(3.521±0.411)lg copy/mL,which was significantly lower than control group[(8.532±0.132)lg copy/mL.t=28.41,P＜0.05].Conclusion The HBV replication is inhibited by anti-TP TAT-VH antibodies in vitro,which provides valuable experimemal basis for developing therapy of HBV infection with intracellular antibody.     

肝衰竭诊疗指南解读

2006年10月出台的《肝衰竭诊疗指南》（以下简称《指南》）是我国第一部有关肝衰竭的指南。国际上迄今为止仅见美国肝病联合会（AASLD）于2005年5月出台的有关《急性肝衰竭处理》的意见书,且范围局限。因此,可以说我国的《指南》最为全面和广泛地反映了肝衰竭的临床诊疗现状。该《指南》由中华医学会感染病学分会和中华医学会肝病学分会的肝衰竭与人工肝学组组织撰写,     

重庆地区急性肝衰竭病因和结局分析

目的了解重庆地区急性肝衰竭（acute liver failure,ALF）的病因和结局,评价英国皇家学院（King’s College Hospital,KCH）标准和终末期肝病模型（modelforend-stage liver disease,MELD）评分对其结局的判断价值。方法回顾性分析第三军医大学西南医院1999年12月-2008年4月国际标准化比值≥1．5,且伴有肝性脑病的ALF住院患者的病因与结局,用KCH标准和MELD评分预测患者的结局。结果共323例符合标准,纳入研究。270例（83．6％）病因为HBV感染,22例（6．8％）病因不明,16例（5．0％）为药物引起,15例（4．6％）由其他原因引起。24例（7．4％）失访。获随访的299例中,240例（80．3％）死亡,59例（19．7％）自然康复。KCH标准预测ALF患者死亡或存活的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和正确率分别为74．2％、64．4％、89．4％、38．0％和72．2％;MELD评分预测AIJF患者死亡或存活的上述指标分别为82．1％、61．0％、89．5％、45．6％和77．9％。结论重庆地区AIF的主要病因为HBV感染,KCH标准和MELD评分预测患者结局的阳性预测值较高,MELD评分的预测正确率高于KCH标准。