慢病毒载体介导的IL-10诱导耐受性树突状细胞的形成

探讨通过IL-10重组慢病毒载体转染小鼠未成熟树突状细胞(iDC),构建高分泌IL-10的耐受性树突状细胞的可行性.粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)联合诱导并经CD11c免疫磁珠分选获得小鼠骨髓iDC,倒置显微镜下观察,流式细胞术分析细胞表面分子:IL-10重组慢病毒载体转染小鼠iD...     

构建及鉴定TACO特异性10-23DRz表达载体重组耻垢分枝杆菌

目的 构建一种可表达特异性10-23脱氧核酶(deoxyribozyme,DZ)的巨噬细胞靶向性细菌载体疫苗,并鉴定其在巨噬细胞表达10-23DZ的能力以及抑制靶基因表达的效果.方法 采用亚克隆方法将分枝杆菌复制子oriM克隆入10-23DRz真核表达载体pSDE01中,获取可在分枝杆菌和真核细胞中穿梭的重组质粒pSDE02.在前期研究基础上选择一有效的针对巨噬细胞taco基因的10-23DZ--DZ1,根据DZ1序列设计并制备DZ1的双链表达序列,插入pSDE02中获取重组质粒pDZM01.将pDZM01经电穿孔方法转化入耻垢分枝杆菌Ms1-2c株构建重组耻垢分枝杆菌rMS-DZ1.分别采用Ziehl-Heelson染色法和直接荧光观测法鉴定重组耻垢分枝杆菌的巨噬细胞靶向性.用rMS-DZ1感染巨噬细胞株RAW264.7,分别于感染后的24 h和48 h采用斑点杂交方法检测rMS-DZ1在巨噬细胞中表达DZ1的情况,再分别采取RT-PCR和免疫印迹方法检测巨噬细胞TACO表达的差异.结果 限制性内切酶酶切、菌落PCR及测序结果显示pSDE02、pDZM01和rMS-DZ1构建成功.rMS-DZ1感染RAW264.7细胞后24 h和48 h,经点杂交方法均检测到了DZ1的表达.半定量RT-PCR和免疫印迹检测结果显示,与未感染组比较,rMS-DZ1感染后24 h和48 h时巨噬细胞TACOmRNA分别下降了67.90%和57.14%,TACO蛋白水平分别下降了53.85%和68.92%.同时,表达对照寡脱氧核糖核苷酸DZ1U的重组耻垢分枝杆菌rMS-DZ1U感染RAW264.7细胞后,其TACOmRNA和TACO蛋白水平与未感染组比较均无明显差异.结论 本研究成功构建了一种可表达特异性10-23DZ的巨噬细胞靶向性重组耻垢分枝杆菌的载体,可在巨噬细胞内表达并抑制相应靶基因的表达,可作为研制治疗用疫苗的基础,这也是国内外首次报道可表达10-23DZ的细菌性载体.

Abstract：

Objective To construct a recombinant bacterial vaccine which can express specific 10-23 deoxyribozyme(DZ) in macrophage, identify the intracellular production of specific 10-23DZ and detect the activity of this recombinant bacterial vaccine on inhibiting the expression of TACO gene in macrophage.Methods The pSDE02 was obtained by inserting the replicon of Mycobacterium into pSDE01, a plasmid which can express 10-23DZ in eukaryotic cells. The expression sequence of DZ1, a 10-23DZ targeting the TACO mRNA of macrophage designed in our previous study was synthesized and inserted into pSDE02. The resulted plasmid was named pDZM01. pDZM01 was then transferred into Mycobacterium smegmatis by electroperation. The recombinant M. smegmatis, named rMs-DZ1 was screened on low-salt LB medium containing Zeocin and identified by Colony PCR. The targeted delivery property of recombinant M. smegmatis was observed by Ziehl-Heelson stain and GFP expression observation via fluorescence microscope. rMs-DZ1 was used to infect RAW264.7 cells and the expression of DZ1 in macrophage was identified by dot-blot assay. At 24 h and 48 h after infection, total RNA and proteins were extracted and the TACO mRNA and protein expression level was assayed by RT-PCR and western-blot respectively. Results Restrictive analysis and sequencing data showed that the Mycobacterium-eukaryotic cell shuttle plasmid pSDE02 and pDZM01 was successfully constructed. rMs-DZ1 was confirmed by colony PCR. When engulfed by macrophage, rMs-DZ1 would express DZ1 in RAW264.7 cells and inhibit the expression of taco gene. When compared to uninfected macrophage, rMs-DZ1 significantly reduced the taco mRNA by 67.90% and 57.14% and down-regulated the expression of TACO protein by 53.85% and 68.92% at 24 h and 48 h respectively. Conclusion A recombinant M. smegmatis vaccine was successfully constructed which could generate specific 10-23DZ in macrophage and inhibit the expression of target gene of interest. To our knowledge, this is the first bacterial vector which can express intracellularly 10-23DRz in targeted manner. This study may further prompt the feasibility of using 10-23 DNAzyme to achieve effective and targeted gene silence.     

腺苷脱氨酶对结核性脑膜炎诊断价值的Meta分析

目的 探讨脑脊液腺苷脱氨酶(ADA)检测在结核性脑膜炎(TBM)中的诊断价值.方法 检索1990年1月-2010年10月Cochrane图书馆、PubMed和万方数据库等数据库,按照Cochrane协作网推荐的诊断试验纳入标准筛选文献,采用QUADAS工具评价纳入文献质量,应用Meta-Disc 1.4软件对纳入研究进行综合定量评价并绘制综合受试者工作曲线(SROC).结果 共检索到相关文献149篇,排除134篇,符合纳入标准的15篇进入Meta分析,涉及研究对象1 642例.异质性检验提示存在异质性,按随机效应模型进行Meta分析,ADA诊断TBM的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断优势比的汇总值分别为0.73[95%CI(0.70,0.76)]、0.90[95%CI(0.88,0.91)]、7.79[95%CI(4.80,12.63)]、0.25[95%CI(0.17,0.35)]和36.01[95%CI(16.08,80.66)]SROC下面积AUC为0.8856(Se=0.0412),Q值为0.8162.结论 脑脊液ADA对TBM的临床诊断价值有较低的敏感度和较高的特异度,测定脑脊液ADA可作为诊断TBM的辅助诊断指标.     

原发性低颅压综合征25例报告

原发性低颅压综合征又称自发性低颅压综合征,是一组病因不同,以侧卧位腰穿压力低于0.69 kPa为特征,并且已除外脑脊液外漏、中毒、内分泌障碍,低张性脱水、低血压及腰穿等情况,具有特征性头痛的一组临床综合征.其预后良好.系由Schaltenbranol于1938年首先报道,临床中少见,极易误诊为血管性头痛、神经官能症及脑供血不足等疾病[1].本文作者总结及探讨了自1983～1997年期间收治的25例原发性低颅压综合征病人的诊治体会.     

脑血栓患者胱硫醚—β合成酶的基因多态性研究

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy)代谢过程的关键酶之一胱硫醚－β合成酶（CBS）基因多态性与脑血栓的关系及其家族遗传性。方法：采用限制性内切酶片段长度多态性方法检测患者CBS基因T27796C位碱基突变。结果：病例组与对照组CBS基因分布频率和等位基因频数分布差异无显著性（P＞0．05）；一级亲属和对照组CBS基因分布频率差异有显著性（P＜0．05），C纯合型与对照组差异无显著性（P＞0．05），杂合型差异有显著性（P＜0．05），杂合型比纯合型患脑血管病的危险度高3．2倍。结论：不能排除CBS基因T27796C点突变是脑血管疾病发病的遗传因素。     

浙江省非医学科技工作者癌症预防知识信念行为调查

目的了解浙江省非医学科技工作者癌症预防相关知识、态度和行为(knowledge、attitude and practices,KAP)状况,分析可能影响癌症预防KAP的因素,为制定科学有效的癌症预防策略提供依据。方法采用多阶段分层抽样的方法,问卷调查800位浙江省非医学科技工作者,进行关于癌症预防知-信-行的调查。结果本调查回收有效问卷748份,调查发现浙江省非医学科技工作者对癌症预防相关知识的总知晓率为73.41%,态度的总认同率为82.22%,行为的总形成率为62.43%;电视(或广播)和网络是癌症预防知识的主要获取途径;多因素分析结果表明,高学历和男性分别是促进和妨碍癌症预防KAP水平中知识知晓的重要因素,其OR值分别为2.75(95%CI:1.91~3.96)和0.53(95%CI:0.37~0.77)。已婚则是促进癌症预防KAP水平中行为形成的重要因素,其OR值为1.51(95%CI:1.06~2.16)。结论浙江省非医学科技工作者癌症预防行为总的形成率水平相对较低,有关癌症预防知识的宣传途径也较为单一,并且癌症预防KAP水平受到多种因素的影响。     

脂蛋白脂酶基因多态性与高血压合并肥胖人群血脂的相关性研究

目的 探讨脂蛋白脂酶（LPL）基因 Hind Ⅲ酶切多态性对高血压合并肥胖及其血脂的影响。方法 选取326例高血压合并肥胖者和326名健康对照者为研究对象,开展问卷调查、医学体检和血液生化项目检测,应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR -RFLP）技术进行 LPL 基因 Hind Ⅲ酶切位点多态性检测,回归分析脂蛋白脂酶基因多态性与高血压合并肥胖的关系。结果 LPL 基因 Hind Ⅲ位点在两组中均以 H ＋等位基因为主。单因素分析显示：两组间基因型和等位基因频率差异无统计学意义（P ＜0.05）;在高血压合并肥胖组中,H ＋H＋基因型的甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）值比 H ＋H -/H -H -基因型的高（P ＞0.05）,但高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）与 H ＋H -/H -H -基因型相比差异无统计学意义（P ＞0.05）。多因素条件 Logistic 回归分析显示,高空腹血糖（调整 OR ＝21.56,95％CI：7.49～62.11）、高甘油三酯（调整 OR ＝7.51,95％ CI：4.20～13.43）、低高密度脂蛋白胆固醇（调整 OR ＝2.67,95％ CI：1.53～4.66）、高尿酸（调整 OR ＝3.36,95％ CI：1.55～7.29）以及有高血压家族史（调整 OR ＝2.07,95％ CI：1.21～3.55）与高血压合并肥胖存在关联。结论 LPL 基因 Hind Ⅲ酶切基因型多态性仅与高血压合并肥胖者的血脂代谢存在关联,但不能确定它是高血压合并肥胖发生的独立危险因素。     

中国四城市初中生受欺负者自杀风险影响因素调查

目的探讨初中生受欺负者的特征及自杀风险影响因素,为其自杀干预提供依据。方法采用多阶段分层整群抽样方法在4个城市各随机抽取25所初中,对抽中班级的所有学生采用《全球学校学生健康调查问卷》进行调查。结果受欺负者的自杀意念和自杀计划年发生率分别为25.1%和13.0%,高于未受欺负者(P<0.05)。因身体、长相等因素而受欺负产生自杀意念的风险是其他受欺负类型的1.29倍。高频度(10～30d/月)受欺负、焦虑和抑郁均是自杀意念和自杀计划的危险因素,而家庭关怀则是其保护因素。社会交往对自杀计划的发生与否有保护作用。结论对受欺负者的自杀干预应根据其受欺负类型、强度同时综合考虑其他危险和保护因素予以有针对性的干预。     

中国3省部分农村地区15～34岁青年自杀死亡特征群病例对照研究

目的 探讨农村15 ～ 34岁青年自杀死亡分类及其特征群.方法 采用心理解剖方法和分类树对山东、辽宁和湖南省16个县的392例自杀死亡者和416例对照进行研究,自杀组和对照组均采用2名信息人进行资料收集.结果 农村青年自杀死亡分类的主要参考因素为:对未来的感觉、对未来的期望、精神疾病、寻求指引和支持;其标准化重要性分别为100、97、91、76;其中,绝望情绪(包括对未来的感觉、对未来的期望)比精神疾病重要性高出6～8分.农村青年自杀死亡可分成5类,其中最主要的两类为绝望情绪严重者、绝望情绪并不严重的精神病患者,分别占64.8％、11.8％.该自杀分类树的判别效果良好,其灵敏度为84.34％,特异度为92.08％.结论 对于自杀风险的筛查及自杀预防工作,进行绝望感的评估比精神疾病的筛查更具有指导意义.     

成人烟雾病2例

<正>烟雾病(MMD)又称脑底异常血管网症,是一种原因不明的慢性进行性颅底动脉血管闭塞性疾病。儿童期发病多以颅内缺血改变为主,成年期发病则多以出血性改变为主。本文就我院同期收治的成年MMD患者分别表现为出血、缺血性发病经过的2个病例进行报道拟探讨其发生不同脑血管事件的转归机制,以加深对MMD的认识。1病例例1.患者,女,57岁,因左侧肢体无力伴头晕20 d入院,