运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

目的运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株。方法构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株。通过RT-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclinB1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线。结果在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclinD1表达亦明显下降(P<0.05)。结论pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长。     

应用腹直肌前鞘-腹外斜肌腱膜瓣修复先天性膀胱外翻

目的总结先天性膀胱外翻的修复,探讨腹直肌前鞘—腹外斜肌腱膜瓣及肌蒂阔筋膜张肌肌皮瓣在修复膀胱外翻中的应用。方法应用腹直肌前鞘—腹外斜肌腱膜形成的前鞘—腱膜瓣加局部皮瓣或同侧肌蒂阔筋膜张肌肌皮瓣修复先天性膀胱外翻及腹壁缺损,局部皮瓣修复尿道上裂,肌皮瓣的应用面积最大为10cm×8cm。结果临床应用12例,膀胱外翻及腹壁的修复均达到了良好效果,膀胱括约肌功能基本恢复,二次尿道紧缩后12例均能控制排尿。肌蒂阔筋膜张肌肌皮瓣部分坏死2例,游离植皮后痊愈。结论选择性地应用腹直肌前鞘及腹外斜肌腱膜形成前鞘—腱膜瓣加强腹壁,局部皮瓣转移或应用同侧肌蒂阔筋膜张肌肌皮瓣转移修复腹壁缺损能有效地修复先天性膀胱外翻,恢复膀胱颈部括约肌的连续性及尿道紧缩,能达到自主控制排尿的目的。     

包裹外毒素Ⅲ的VEGF-脂质体靶向杀伤肿瘤血管内皮细胞的实验研究

目的 利用包裹绿脓杆菌外毒素单元Ⅲ的VEGF(血管内皮生长因子)-脂质体于体外靶向杀伤肿瘤血管内皮细胞。方法 通过结合实验。验证VEGF连接脂质体对肿瘤血管内皮细胞具有特异结合能力。利用体外细胞毒实验(MTT)方法，检测外毒素单元Ⅲ及靶向脂质体包裹的单元Ⅲ对肿瘤血管内皮细胞的杀伤作用。结果 连有VEGF的脂质体可与表达血管内皮生长因子受体(VEGFR)的肿瘤血管内皮细胞特异性结合。结合率可达非特异性脂质体的2倍。在去除外毒素单元Ⅰ和Ⅱ后，单元Ⅲ的细胞毒作用消失。但包裹单元Ⅲ的VEGF-脂质体可特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞。结论 VEGF-脂质体可特异性地识别肿瘤血管内皮细胞。并作为良好载体将绿脓杆菌外毒素单元Ⅲ带入细胞，实现其杀伤作用，可望成为一种有效的抗肿瘤物质。     

电视纵隔镜和CT对非小细胞肺癌术前分期的诊断性试验的评价

目的 评价电视纵隔镜和CT对非小细胞肺癌术前分期的价值。方法 2002年9月至2003年8月28例肺癌患者术前均行CT检查，颈部纵隔镜检查术23例，胸骨旁纵隔镜检查术5例。肺癌同侧纵隔淋巴结转移N2行新辅助化疗后再手术；对测纵隔淋巴结转移N3行放化疗；阴性者剖胸探查。结果 术前怀疑或已确诊的肺癌共28例中，纵隔镜诊断纵隔淋巴结转移(阳性)20例(鳞癌11例，腺癌9例)，未见纵隔淋巴结转移8例；阳性中同侧纵隔淋巴结转移N2(16例)行新辅助化疗，后再手术；对侧纵隔淋巴结转移M(4例)行放化疗；阴性者剖胸探查，术后病理证实肺腺癌3例、肺鳞癌1例(纵隔淋巴结未见转移与纵隔镜检查结果相符)，肺炎性假瘤2例，肺结核瘤2例。28例肺癌纵隔淋巴结经CT和纵隔镜检查，分别与纵隔淋巴结清扫术后病理对照，CT(诊断标准按淋巴结≥1．0cm为阳性)诊断纵隔淋巴结转移12例，其中7例证实为转移癌，5例为淋巴结炎性反应，CT诊断纵隔淋巴结阴性16例，其中病理证实4例均为转移癌，12例为淋巴结炎性反应；纵隔镜诊断纵隔淋巴结转移20例，术后病理证实20例均为转移癌；诊断8例为淋巴结炎性反应，术后病理证实其中1例纵隔淋巴结转移。CT灵敏度63．6％，特异度70．6％，阳性预测值58．3％，阴性预测值75％；电视纵隔镜灵敏度95．2％．特异度100％，阳性预测值100％，阴性预测值87．5％。结论 电视纵隔镜对非小细胞肺癌术前分期的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值都大大高于CT，对非小细胞肺癌的综合治疗方案的制定非常重要。     

应用RNA干扰技术抑制神经元E3B1基因表达及对轴突生长的影响

目的:探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制神经元E3B1基因表达及其对轴突生长的影响.方法:选择针对E381(NCBI:NM-024397)RNAi的3个靶位点Abil1、Abil2、Abil3和1个不针对任何mRNA的RNAi靶位点(阴性对照)以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH,阳性对照),用带有neoR选择标志和GFP绿色荧光标志的真核表达载体pGenesil-1构建E381 RNAi质粒,分别转染培养的神经元,在荧光显微镜下观测转染率,经G418筛选得到单一的转染细胞,并用Western blot法检测各转染组神经元E3B1蛋白的表达情况,选出具有最佳抑制效应的siRNA转染神经元,加人轴突生长抑制物,观测轴突生长情况.结果:成功构建了RNAi质粒,各组细胞的转染率相近,均为34%左右.与阴性对照组相比,Abil1、Abil2和Abil3转染组细胞内E3B1 mRNA的表达都受到了不同程度的抑制,其中Abil3转染组细胞的E381 mRNA和蛋白的表达抑制最为显著,加入轴突抑制剂后Abil3转染组神经元轴突仍能继续生长.结论:应用RNA干扰技术能高效特异地抑制神经元E3B1基因的表达,E3B1基因的表达下调可促进神经元轴突的生长.     

精液白细胞与不育症之间关系探讨

目的以瑞-姬染色方法,油镜精细观察,区分精液中生精细胞与白细胞,探讨精液白细胞的检出率与不育症之间关系,以提供临床参考。方法293例精液采用瑞-姬染色,油镜进行白细胞及其他细胞形态分类,并进行统计处理。结果293例不育症精液中检出白细胞阳性136例占46.4%;阴性157例占53.6%。年度精液白细胞阳性率1990年为13.8%;1993年为21.5%;1997年为34.1%;2006年为46.4%,说明有逐渐增加趋势。对2006年136例精液白细胞数量分布统计,以≤5个者最多占70.6%;6~20个占8.9%;21~40个占3.4%;>40个占1.3%。1~4个组与5~9个组、>20个组比较,有显著差异(P<0.001)。56例精液与前列腺液进行白细胞对照观察,两者均有白细胞者为48.2%(27/56)。精液中非生精细胞检出率,以前列腺上皮细胞最高为27.3%;其次是吞噬细胞为23.5%;再次是淋巴细胞为10.8%;支持细胞和间质细胞均为8.1%。结论精液白细胞有逐年增加趋势,影响精液质量造成不育症,实验室应认真检测,以油镜观察≤5个者,可考虑来源于精液;>5个者应检查前列腺,临床应注意其来源,对症治疗。     

地震伤中小腿开放性骨折的特点及治疗经验

四川汶川发生里氏8.0级地震后,第二军医大学第七医疗队于5月15日凌晨抵达重灾区江油市,至7月7日离开54d中,共处理开放性胫腓骨骨折43例.山于地震伤在不同时期、不同震级、不同地理环境及建筑物条件下都有其不同的特点,加上胫腓骨开放性骨折的高致残率(截肢、感染、肢体短缩)在地震伤中的高发生率[1],故将这43例的病例特点及我们的救治体会总结如下.     

联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞增殖和形态的影响

目的:观察体外联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞形态和增殖的影响,为研究成纤维细胞和平滑肌细胞生物学特性和相互关系以及体外构建含此两种细胞的组织工程皮肤提供理论和实践基础。方法:在体外分别分离培养成纤维细胞和平滑肌细胞并常规传代培养。模拟组织工程皮肤的结构及成纤维细胞和平滑肌细胞间的相互影响途径,按照不同比例(平滑肌细胞:成纤维细胞=1:1,1:2,1:3)建立以胶原凝胶为基质的成纤维细胞与平滑肌细胞联合培养模型。应用荧光标记、组织学观察和MTT法对平滑肌细胞的形态和代谢进行研究。结果:联合培养模型法可以有效地建立起成纤维细胞和平滑肌细胞的相互影响模式。1:1组的成纤维细胞对联合培养的平滑肌细胞增殖有促进作用,1:3组的促增殖作用则不明显。结论:1:1联合培养的成纤维细胞对平滑肌细胞增殖有促进作用,对它们体外培养和扩增以及相互关系的研究对阐明这两种细胞组合作为真皮替代物种子细胞具有重要的意义。     

肢体创伤性动脉病变的介入诊断与治疗

目的 评价介入放射方法诊断治疗肢体创伤性动脉病变的效果。方法 8例肢体动脉创伤伴有远端肢体缺血改变，其中2例伴大出血，伤者接受了选择性患肢动脉造影检查；7例随后进行了动脉病变的血管腔内介入治疗。治疗方法包括动脉分支或主干栓塞、动脉内溶栓和血管内支架置放。结果 血管造影精确显示了动脉破裂、假性动脉瘤、血栓形成或动脉内膜损伤等病变性质。3例假性动脉瘤、3例动脉血栓病变综合应用介入治疗方法取代外科手术获得满意疗效。1例溶栓后证实动脉破裂和1例造影证实动静脉瘘后转手术治疗。结论 介入放射与外科方法相结合能明显提高肢体动脉创伤的诊断治疗水平，有效挽救伤者肢体和生命。     

胃癌术后膳食纤维和早期肠内营养与消化道并发症的关系

目的探讨胃癌术后膳食纤维和早期肠内营养(EN)与消化道相关并发症的关系。方法采用随机对照的方法,把56例胃癌术后患者随机分成能全素组和能全素加膳食纤维组,经鼻肠管进行早期肠内营养(EN),观察两组EN常见消化道并发症的发生情况。结果两组患者在临床资料方面具有可比性(P>0.05)。两组患者的术后腹胀、腹泻的发生率相似,均P>0.05,差异无统计学意义。1例能全素加膳食纤维组患者因吻合口水肿、输入袢不完全性梗阻而发生恶心、呕吐,其余患者均未发生恶心和呕吐。结论胃癌术后的早期膳食纤维EN并不增加EN消化道并发症的发生率。