多种金属离子与单宁酸反应媒染微血管的对比研究

目的　镜下观察单宁酸与金属盐溶液中Ca2 + 、Au+ 、Ag+ 、Pb2 + 、Cu2 + 、Al3 + 、U6+ 、K+ 联用显示大脑微血管的效果。方法　用单宁酸媒染固定液灌流大鼠 ,取脑切片 ,入氯化钙、氯化金、硝酸银、硝酸铅、硫酸铜、硫酸铝钾、醋酸双氧铀、高锰酸钾和重铬酸钾等溶液中呈色。结果　单宁酸与Ca2 + 、Cu2 + 、Ag+ 、Al3 + 结合显示血管清晰 ,与Au+ 、U6+ 、Pb2 + 、K+ 联用媒染血管效果欠佳。结论　含Ca2 + 、Cu2 + 、Ag+ 、Al3 + 的金属盐类可替代氯化铁媒染微血管 ,氯化金、醋酸双氧铀、硝酸铅、重铬酸钾和高锰酸钾不宜与单宁酸联用来显示血管     

人α2（I）型胶原基因启动子活性研究

目的 探索器官纤维化形成中调控I型胶原基因高水平转录的启动片段及TGF-β、PDGF－BB、IGF－1等细胞因子对其活性的影响。方法 从人α2（I）胶原基因转录起始点上游－2.4kb至＋58bp的片段中，取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因的质粒组成5个重组体，转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞，测定细胞CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性，同时加入细胞因子，以测定其对I型胶原启动序列的影响。结果 除－129～＋58bp序列外，其余4个重组体CAT表达水平均较高，其中－2292～＋58bp、－1476～ 58bp序列具较强启动CAT表达活性，－339～ 58bp、－616～ 58bp片段次之。TGF－β、IGF－1均能在一定程度上调人α2（I）胶原基因启动活性。结论 人α2（I）胶原基因片段－2292～ 58bp、－1476～ 58bp、－339～ 58bp有高启动活性，是进一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。TGF－β、IGF－1促进胶原表达，与其上调胶原基因启动活性有关。     

以报告基因荧光素酶研究HPRE功能元件与IFN-α应答的关系

目的:以荧光素酶(luciferase,LUC)基因为报告基因,探讨HBV转录后调节序列(HPRE)的功能元件(α、β1和β2)对IFNα作用的影响。方法:用PCR法从载体pGEMluc中扩增LUC基因,并克隆入真核表达载体pcDNA3.0中。以含乙肝病毒(HBV)基因组的质粒A01为模板,扩增HPRE(完整的HPRE)、HPREαβ1及HPREβ1β2片段,并分别插入LUC基因的下游。利用脂质体介导的转染法,将重组质粒分别导入人肝癌细胞株HepG2中,用LUC检测系统检测IFNα作用前后LUC表达活性的变化。结果:经测序证实,重组质粒pcDNA3.0luc、pcDNA3.0lucHPRE、pcDNA3.0lucHPREαβ1及pcDNA3.0lucHPREβ1β2构建成功。检测结果显示,IFNα作用前,HPRE、HPREαβ1和HPREβ1β2均能提高LUC的活性,IFNα作用后,HPRE和HPREβ1β2能明显降低LUC的活性,而HPREαβ1对其表达则没有显著影响。结论:HPRE的功能元件β2与IFNα作用的关系最为密切,而功能元件α和β1在IFNα应答中作用甚小,提示IFNα诱导产生的HPRE抑制性结合蛋白很可能是与β2结合的,为进一步研究IFNα在治疗HBV感染和慢性肝炎中的作用机制,以及HPRE抑制性结合蛋白的作用提供了一定的实验依据。     

NOD小鼠胸腺细胞TCR介导的信号通路缺陷

目的 进一步研究NOD小鼠T细胞应答改变机理。方法 用抗TCR抗体、ConA激活NOD小鼠胸腺细胞，分析TCR介导的信号通路的水平。结果 与Balb／c小鼠胸腺细胞相比，抗TCR抗体诱导的增殖应答较弱，与年龄及NOD胸腺CD4^ CD8^-和CD4^-CD8^ SP细胞有关；rIL-2能部分恢复对TCR抗体应答的缺乏。NOD小鼠对PMA IONO和PMA anti—TCR-mAb应答正常，但对anti-TCRmAb IONO应答缺乏。结论 与年龄有关的NOD小鼠胸腺细胞对TCR抗体应答的缺乏与T细胞激活时上游PKC信号通路的缺乏有关。     

Galectin-3基因在人孕早期绒毛和蜕膜中的表达及与妊娠的关系

目的 研究人早孕绒毛和子宫蜕膜中galectin-3基因mRNA和蛋白的表达，探讨其与滋养细胞浸润的关系。方法 采用半定量RT—PCR和Western-blot分别对70例（分为7个孕周组，每组10例）正常早孕绒毛和蜕膜中gal-3mRNA和蛋白表达水平进行检测 结果 在整个孕早期绒毛和子宫蜕膜中均有gal-3基因表达，且在绒毛和蜕膜中随着孕周的增加其表达总体呈上升趋势，两者表达趋势一致。结论 gal-3基因在滋养细胞和蜕膜表达中随孕龄增长而呈上调趋势，提示该基因在调控早孕滋养细胞的浸润行为中起重要的作用。     

DNA改组(DNA Shuffling)在生物药学中的应用

目的综述DNA改组技术的发展及其在生物药学领域的应用,为生物药学及其相关领域的研究和进一步应用提供参考。方法总结、分析近几年来相关方面的文献资料。结果及结论DNA改组是一种有效的在体外利用重组技术加速基因进化的定向分子进化过程,它可以使单一基因和多基因靶序列进行多次重组和筛选而使其快速进化。DNA改组技术发展迅速并广泛应用于酶的改良、药物蛋白优化、疫苗改进等领域,具有广阔应用发展前景。     

LDL-ACM复合物对裸鼠皮下移植瘤靶向抑制作用的初步研究

目的: 通过观察比较LDL-ACM复合物和游离ACM对胃癌SGC-7901,NKM-45细胞株裸鼠皮下移植的抑制效应,从而了解LDL作为抗癌药物靶向载体的应用价值。方法: 首先采用温育交换法制备LDL-ACM复合物,然后建立人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,以瘤重、肿瘤体积、白细胞计数、抑瘤率、生命延长率等指标观察LDL-ACM对移植瘤的抑制作用。结果: LDL-ACM组的移植瘤生长速度明显慢于生理盐水组及游离ACM组,抑瘤率和生命延长率明显高于生理盐水组及游离ACM组,外周白细胞计数无明显变化,尤其对SGC-7901瘤更为明显。结论: LDL-ACM复合物与游离ACM相比有更强的抑癌效应。LDL-ACM复合物有可能是通过LDL受体介导起作用。     

钴60放射法制备免疫功能抑制大鼠模型

目的通过系统的钴60放射计划,对大鼠免疫功能抑制的合适剂量进行评估,为干细胞移植研究提供合适的的动物模型。方法SD大鼠随机分为12.5Gy、10Gy、7.5Gy、5Gy4个剂量组,10只/组。计算放射后2个月的死亡率。检测白细胞数量,评价各剂量组动物的白细胞参考值范围。结合死亡率和白细胞参考值范围,确定合适的放射剂量。通过对外周血中性粒细胞(PMN)吞噬实验和外周血白细胞移行抑制实验(MIT),对细胞免疫功能进行检测。结果行12.5Gy照射的大鼠,3d内全部死亡;10Gy放射后的大鼠在1个月内全部死亡;7.5Gy照射的大鼠2个月内死亡1只;5Gy照射的大鼠没有死亡情况发生。设定95%作为可信区间,计算白细胞数量参考值范围(109个/L),未放疗组:16.978+1.96×6.46;5Gy放疗组:4.93+1.96×0.72;7.5Gy放疗组:2.313+1.96×0.782;10Gy放疗组:1.03+1.96×0.507。t检验表明,随着放疗剂量的增加,各实验组的白细胞数量显著减少。对于细胞免疫功能的检测,外周血中性粒细胞(PMN)吞噬实验结果表明,机体全身免疫功能降低;外周血白细胞移行抑制实验(MIT)表明,机体T细胞免疫功能降低。结论7.5Gy可以一定程度上抑制大鼠的免疫功能,为合适的放疗剂量。     

低能量激光血管内照射治疗脑梗死的临床观察

目的:探讨采用低能量半导体激光血管内照射疗法(intravascular laser irradiation on blood,ILIB)治疗脑梗死的效果及机制.方法:随机选取80例脑梗死患者分为治疗组与对照组,两组各40例,两组患者接受同样的药物治疗,治疗组在上述治疗的基础上,于发病1 d～3 d内,加用半导体激光血管内照射治疗.采用国产半导体激光治疗仪,波长650nm,功率1.5mW～2.0mW.患者平卧,消毒后用静脉留置针穿刺上肢正中静脉或贵要静脉,成功后留置外套管,通过管脑导入激光剂,开启半导体激光治疗仪进行照射治疗.结果:治疗组有效率92.5%,与对照组差异有显著性意义(p＜0.01),治疗组患者临床症状和体征治疗后明显改善.结论:该疗法有调节脂质代谢,改善血液流变学性质,恢复神经传导功能等功效,进而提高脑梗死的治疗效果.     

AAV2-BPI700-Fcγ1700重组病毒的制备及其转染小鼠后的抗感染作用

目的 通过观测BPI700-Fcγ1 7001嵌合基因导入小鼠对最小致死量E．coli感染攻击的抵抗作用，探讨基因治疗在细菌感染性疾病中应用的可能性。方法采用RT-PCR检测嵌合基因在转录水平的表达；采用免疫组化和酶联免疫吸附实验检测嵌合基因在蛋白水平的表达。结果（1）基因导入小鼠中目的嵌合基因得到表达，在注射部位肌肉组织和血清中可检测到目的嵌合蛋白；（2）在最小致死量E．coli感染攻击后，基因导入小鼠的存活率为31．43％，明显高于对照组小鼠的存活率4．62％；与小剂量头孢呋辛钠联合应用其存活率高达65％。结论BPI700-Fcγ1 700嵌合基因导入小鼠对致死量E．coli感染具有较好抵抗作用，提示抗感染基因治疗在细菌感染性疾病，特别是在感染高危人群中具有广阔的临床应用前景。