生长素诱导的蛋白敲减系统在刚地弓形虫Chinese 1虫株中的应用及验证

目的应用生长素诱导的蛋白敲减(AID)系统调控刚地弓形虫Chinese 1虫株中荧光蛋白的表达。方法人工合成3′端融合有标签FLAG的植物生长素受体--运输抑制剂响应蛋白1(TIR1)的核苷酸序列TIR1-FLAG,将其连接至pTub-e GFP-CAT载体中,构建pTub-TIR1-FLAG-CAT表达质粒;表达质粒经电穿孔转染至弓形虫Chinese 1虫株TgCtwh3,经氯霉素筛选和极限稀释后筛选单克隆虫株。PCR扩增及蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测单克隆虫株中TIR1基因的插入和相应蛋白的表达,将验证正确的阳性克隆命名为TIR1虫株。构建表达荧光蛋白mCherry-Ty-AID报告基因的表达质粒pTub-mCherry-Ty-AID-DHFR,并通过电穿孔转染将其整合至TIR1虫株基因组中,乙胺嘧啶筛选后极限稀释筛选获得稳定表达mCherry-AID的虫株,命名为TIR1:m Cherry-AID虫株。将TIR1:mCherry-AID虫株的虫体分为吲哚乙酸(IAA)调控组和对照组,IAA调控组加IAA至终浓度500μmol/L,对照组加等量乙醇,培养3 h后,分别以抗TgGAP45和抗Ty-1抗体为一抗,间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting分析IAA调控下mCherry荧光蛋白的表达情况。结果PCR扩增结果显示,在1816 bp处有一条特异性扩增条带。Western blotting分析结果显示,抗FLAG-Tag抗体可识别TIR1虫株中相对分子质量(Mr)约70000的蛋白;Ty-1抗体可在TIR1:mCherry-AID虫株的对照组中检测到约Mr58000的特异性条带,与理论上C端融合了AID的mCherry-Ty蛋白大小相同;在IAA调控组中未检测到特异性条带。IFA结果显示,TIR1:mCherry-AID虫株对照组可见红色荧光蛋白,IAA调控组未检测到mCherry蛋白。结论应用AID系统可成功调控弓形虫Chinses 1虫株中mCherry荧光蛋白的表达。     

刚地弓形虫TgPRF的原核表达、多克隆抗体制备与应用

目的 原核表达弓形虫TgPRF蛋白,制备多克隆抗体并评价其作为内参抗体的可行性。方法 以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgPRF编码基因,克隆至pGEX-4T-1载体,转化至大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BL21。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况。利用GST标签亲和层析法纯化重组蛋白。以纯化后蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗TgPRF多克隆抗体。收集弓形虫RH株速殖子,以制备的多克隆抗体为一抗,Western blotting检测抗体特异性及效价。收集ATc调控下不同时间点的弓形虫iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子进行Western blotting,以抗Ty和抗TgPRF抗体为一抗,检测TgAPH和TgPRF表达量的变化。结果 SDS-PAGE显示：TgPRF在诱导4 h后表达量趋于饱和,相对分子量为52 ku,且呈可溶性表达。弓形虫RH株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示：抗TgPRF多克隆抗体可识别内源性的TgPRF,且该多克隆抗体稀释至1∶10 000时仍可见明显条带;iKO-Ty-TgAPH虫株速殖子总蛋白进行的Western blotting显示：TgAPH的表达量随ATc作用时间的增加呈递减趋势,而TgPRF表达量基本维持恒定。结论 本实验制备的抗TgPRF多克隆抗体特异性和效价良好,可作为衡量弓形虫特定蛋白表达量的内参抗体,也可直接检测内源性TgPRF的表达。     

从大鼠肺灌洗液中分离纯化培养卡氏肺孢子虫

目的 建立卡氏肺孢子虫（Pneumocystis carinii, P.c）纯培养株。 方法　 从肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠模型离体肺脏的灌洗液中分离P.c，用改良IMDM培养基进行体外培养；以四胺银染色计数法观察虫体增殖情况；用PCR扩增培养物中P.c线粒体大亚基rRNA基因，进行基因鉴定；用透射电镜观察培养虫体的超微结构。 结果 用添加ｓ-腺苷甲硫氨酸（SAM）等辅助剂的IMDM培养基从8只PCP大鼠的肺灌洗液中分离出5个P.c纯培养株（P.c Rat1~5）。分离培养的P.c可进行冷冻保存和复苏培养。培养72 h的P.c包囊可增殖19~22倍。形态、超微结构及基因序列分析证实从大鼠肺灌洗液中分离出的培养物是大鼠源性肺孢子虫。 结论 从大鼠肺灌洗液中分离培养出5株大鼠源卡氏肺孢子虫。     

大蒜素治疗大鼠肺孢子虫肺炎的实验研究

目的观察大蒜素对大鼠肺孢子虫肺炎(PCP)的治疗效果。方法采用皮下注射醋酸泼泥松龙的方法建立PCP大鼠模型。将受试大鼠随机分为正常对照组(A)、未治疗对照组(B)、TMP-SMZ治疗对照组(C)、大蒜素治疗组(D)和青蒿素治疗组(E)。各组从第7周开始灌服相应药物5d,停药后观察1周,用肺重/体重比和肺虫荷量考核疗效。结果PCP大鼠6周内的病死率为16.7%,满6周时抽样进行病原、病理检查,证实均已成功诱导PCP。5组受试大鼠的平均肺重/体重比分别为0.75±0.090、1.05±0.174、0.77±0.091、0.79±0.114和0.85±0.188。B~E组受试大鼠肺虫荷量分别为1490、74、296和219个包囊/mg肺。统计学分析显示,经大蒜素治疗的大鼠平均肺重/体重比、肺虫荷量均显著低于未治疗对照组(P<0.05),与TMP-SMZ治疗对照组和青蒿素治疗组比较差异无显著性(P>0.05)。结论大蒜素对大鼠PCP有显著疗效,效果与TMP-SMZ和青蒿素接近。     

Modulation of in vivo granuloma formation related to regulation of in vitro IFN γ and IL 4 expressions in experimental Schistosomiasis japonica

ＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｓｅｒｉｏｕｓｐａｒａｓｉｔｉｃｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｔｈｅｗｏｒｌｄＩｎｖｉｅｗｏｆｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｃｅｏｆｅｇｇｇｒａｎｕｌｏｍａｓｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ,ｃｌｅａｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｇｒａｎｕｌｏｍａｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｉｓｔｈｅｒｅｆｏｒｅｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅＩｎｔ…     

用多糖间接血凝试验检测肠出血性大肠杆菌O157抗体的初步研究

目的：探讨多糖间接血凝（IHA）检测感染肠出血性大肠杆菌（EHEL）O157：H7患血清中抗O157抗体的价值。方法：用酚－水法提取O157：H7脂多糖和醋酸水解法制备多糖抗原，致敏绵羊红细胞后以IHA检测各种肠道致病菌抗血清及健康人和非腹泻患血清的抗体反应。结果：制备的多糖抗原糖含量为33％，不含核酸，蛋白质＜0．3％，具有鲎试剂凝集活性。以O157多糖IHA检测O157单克隆抗体呈高效价凝集（1：1280），H7多克隆抗体呈低效价凝集（1：8），其它各种肠道致病菌抗血清的凝集效价均小于1：2，从30名健康人和30名非腹泻患儿的血清中未查出O157抗体；204名非腹泻成人患中，有1人的凝集效价为1：8，其余的均小于1：2，吸收抑制试验表明凝集反应为特异性。结论：以多糖IHA检测抗O157抗体可试用于人群O157：H7感染的抗O157抗体流行率调查及肾溶血性尿毒综合征的免疫诊断。     

7例中枢神经系统布鲁氏菌病临床特点分析

目的　探讨中枢神经系统布鲁氏菌病临床特征、实验室检查和影像学特点,为临床医师提供参考资料。方法　收集首都医科大学附属北京友谊医院2015年10月—2019 年1月收治的 7 例中枢神经系统布鲁氏菌病患者的病例资料,分析实验室检查和影像学数据。 结果　7例患者均有明确流行病学史,主要临床特征是脑膜炎症性改变、听神经损害及肢体无力;实验室检查中,7例患者布鲁氏菌虎红平板凝集试验均阳性,脑脊液蛋白质含量均升高,6例患者脑脊液糖水平降低,6例患者脑脊液IgG水平升高,5例患者颅内压增高,5例患者脑脊液白细胞水平显著升高;MRI结果显示,5例患者表现为脑白质脱髓鞘样变,2例患者为占位性炎性病变,1例患者为急性脑卒中样变。结论　综合系统分析中枢神经系统布鲁氏菌病流行病学史、临床表现及脑脊液检查、颅内影像学、血清学和/或病原学结果,有助于明确诊断。     

回顾十多年的中医护理管理

在十多年的中医护理管理中,我们根据医院护理工作特点及其规律,结合医院科学管理的基本要求和社会需求为病人提供最优的技术服务和生活服务,积极实现护理质量的最优化。护理管理可概括为:计划、组织、学习、质量、激励五个方面。     

12例脑并殖吸虫病临床特点分析

目的探讨脑并殖吸虫病的临床特征、实验室检查和影像学特点,为临床医师提供更加丰富的医学资料。方法收集并分析首都医科大学附属北京友谊医院在2011年1月—2017年10月收治确诊的12例脑并殖吸虫病患者的病例资料。结果脑并殖吸虫病的主要临床表现是头痛、癫痫发作和颅内出血,12例患者均有明确的流行病学史。9例患者并殖吸虫抗体Ig G呈现阳性;8例患者外周血嗜酸粒细胞升高;7例患者颅内压增高;7例患者脑脊液蛋白升高;8例患者脑脊液中WBC及嗜酸性粒细胞数升高;7例患者脑脊液总Ig G升高;头颅MR见所有患者表现为多发病灶,9例患者病灶位于枕叶,具有多发环状特征,10例T1加权成像,11例T2加权成像表现为高信号,病灶周围伴有水肿带,3例患者有颅内出血征象。12例患者使用吡喹酮治疗均达到临床治愈标准。结论本文通过系统总结12例脑并殖吸虫病患者的流行病学史、临床表现和实验室检查结果,为临床医师对该病的诊治提供依据。     

8例输入性卵形疟不同亚型的鉴定

目的鉴定并分析境外输入性卵形疟的2种亚型及其感染的临床特点。方法对在北京友谊医院2015年1月—2017年3月确诊的8例输入性卵形疟患者进行虫种亚型的鉴定,并分析比较不同亚型感染引起的实验室指标的差异。结果通过对8例患者进行巢氏PCR鉴定及序列分析,结果显示卵形疟curtisi及卵形疟wallikeri亚型各4例;与curtisi亚型感染相比,wallikeri亚型感染后引起血小板下降程度更低,乳酸脱氢酶及TBIL的上升程度更高。结论输入性卵形疟的亚型鉴定须通过巢氏PCR鉴定完成,wallikeri亚型感染导致的器官损害更为严重。