精原干细胞在支持细胞饲养层上的长期增殖特征

目的:建立体外研究精原干细胞与支持细胞共培养的细胞模型,探讨体外精原干细胞在支持细胞层上的增殖特点。方法:应用两步酶消化法,分别从12-15d及6d龄昆明小鼠睾丸中分离支持细胞及精原干细胞,并用免疫细胞化学方法鉴定。将精原干细胞接种在支持细胞层上,观察不同时间点精原干细胞形成的细胞集落形态及数目。结果:精原干细胞与支持细胞层共培养24h,开始增殖分裂,呈双细胞形态。随着培养时间延长,双细胞集落数逐渐减少,而链状细胞集落逐渐增加。培养120h后,链状细胞局部融汇堆积,且细胞集落维持在相对稳定数量。在每4-5d更换培养液的条件下,细胞集落维持稳定状态的平均时间为51.2±5.8d。结论:精原干细胞在体外支持细胞层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,这为体外研究药物或毒物干扰精原干细胞功能提供了细胞模型。     

环磷酰胺对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤的动物实验研究

目的探讨抗肿瘤药物所致牛精细胞损害与年龄的关系，为性腺保护剂的运用寻找理论依据。方法将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEL法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl-2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害。结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡（P〈0．01），bcl-2蛋白表达显著下降（P〈0．01），生精细胞S期所占的比例显著下降（P〈0．01）。用药后9周，除1周龄组外，各实验组曲细精管面积、直径、生精上皮细胞计数、Johnsen’s评分均显著低于相应对照组（P〈0．01），并随年龄增大损害有增加趋势。结论环磷酰胺可诱导生精细胞增殖启动阶段以后的生精细胞显著凋亡，且伴有bcl-2明显下调。并可湿著抑制精原细胞和细线前期精母细胞增殖。远期组织学改变年龄越小所受的损害越小，提示为使睾丸免受抗肿瘤药物的伤害而采用性激素使生精细胞增殖分化处于不分化状态是有效的防护方法之一。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响

目的:通过体内体外实验探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响.方法:DEHP50、100、200mg/L分别作用于原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DEHP对LeydigINSL3 mRNA表达的影响;DEHP分别以低、中、高三组剂量(100、200和500mg/kg·d)灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT-PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度.结果:DEHP改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构;各实验组包括原代Leydig细胞及不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达水平、表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.01,或P＜0.01).结论:DEHP下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达,可能是影响引带发育导致隐睾的机制之一.     

小儿原发性遗尿症治疗方法选择及疗效评价

目的　通过针对病理生理改变治疗方案与常规联合药物治疗方案治疗原发性遗尿症(PNE)的对比研究 ,探讨PNE的合理治疗方法。方法　实验组患儿 92例 ,男 53例 ,女 39例 ,年龄 5～ 1 3 .5岁 ,中位年龄 7.8岁。每周总遗尿次数 5～ 1 8次。根据夜间自然充盈状态的尿动力学、动态脑电图、排尿日记结果 ,将其病理生理变化分成 5型 ,针对各自病理生理特点选择治疗方案 ;对照组 63例 ,男 38例 ,女 2 5例 ,年龄 5～ 1 4岁 ,中位年龄 8.0岁。每周总遗尿次数 5～ 1 8次 ,直接以DDAVP +奥宁进行联合药物治疗。两组患儿治疗时间 3个月 ,随访 1 2个月 ,年龄、性别构成、尿床次数、遗尿量、遗尿发生的时间无差异。结果　疗程结束后第 3个月随访 ,实验组治愈率为 78.3 % ,对照组为68.3 % ,疗效无差异 (P <0 .0 5) ;第 6个月随访 ,实验组治愈率 67.3 % ,对照组 50 .1 % ,疗效有显著差异 (P <0 .0 5) ;第 1 2个月随访 ,实验组治愈率 65 .2 % ,对照组 39.7% ,疗效显著差异 (P <0 .0 5)。结论　针对病理生理改变而制定的治疗方案是治疗PNE合理治疗方案     

不同年龄睾丸受损后的代偿反应研究

为观察不同年龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠一侧睾丸切除后，另侧案丸的代偿性反应（ＣＴＡ），通过光镜、电镀和显微图像分析其代偿睾丸的组织学变化特征，采用放免法测定血清性激素浓度，以期揭示不同年龄睾丸受损后代偿反应的变化规律。结果：仅１０、２０天龄大鼠的另侧睾丸重量、体积较对照有明显增大（Ｐ＜０．０１），生精细胞和非生精细胞均出现肥大、增生，且细胞超微结构有退化变性改变。血清ＦＳＨ高低与ＣＴＡ明显相关。本研究表明：实验鼠在一侧睾丸受损后，另侧睾丸将发生ＣＴＡ，且年龄越小越显著，而性成熟鼠的睾丸将不出现ＣＴＡ。年龄是影响ＣＴＡ的重要因素之一。     

胎盘早剥48例临床分析

为了提高对胎盘早剥的诊断处理水平,提高产科质量,以期降低围产儿及孕产妇死亡率,本文对48例胎盘早剥病例进行回顾性分析.     

精原干细胞在支持细胞饲养层上的长期培养

目的建立体外研究精原干细胞与支持细胞共培养的细胞模型,研究体外精原干细胞在支持细胞层上的增殖特点。方法应用两步酶消化法,分别从14～15d及6d龄雄性昆明小鼠睾丸中分离支持细胞及精原干细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定。将精原干细胞接种在支持细胞层上,观察不同时间点精原干细胞集落形态及数目。结果在支持细胞层上培养24h后,精原干细胞开始增殖分裂,呈双细胞形态;随着培养时间延长,双细胞集落数逐渐减少,而链状细胞集落逐渐增加;培养120h后,链状细胞局部融汇堆积,且细胞集落维持在相对稳定数量。在每4～5d更换培养液的条件下,细胞集落维持稳定状态的平均时间为(51,2±5.8)d。结论精原干细胞在体外支持细胞层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,可用于体外研究生精细胞增殖分化特征、药物或毒物干扰精原干细胞功能实验。     

叶下珠植物提取物保护盐酸氮芥对小鼠睾丸组织的氧化应激损伤

目的:研究盐酸氮芥(HN2)对青春前期小鼠睾丸组织的氧化应激损伤及叶下珠植物(PU)提取物对损伤的保护作用。方法:将64只小鼠随机分为A组(生理盐水对照组)、B组(1.25mg/kgHN2)、C组(2.5mg/kgHN2)、D组(5mg/kgHN2)、E组(5mg/kgHN2+125mg/kgPU)、F组(5mg/kgHN2+250mg/kgPU)、G组(5mg/kgHN2+500mg/kgPU)、H组(500mg/kgPU),每组8只,按各组PU剂量灌胃,qd×5d,d5一次性腹腔给予相应的HN2。24h后制备各组小鼠睾丸组织匀浆,检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽S转移酶(GST)及谷胱甘肽还原酶(GR)酶活性。结果:HN2处理后,睾丸内GSH含量、GST及GR酶活性均随着HN2剂量增加而降低。5mg/kgHN2处理的同时,随着PU剂量增加,睾丸内GSH含量、GST及GR酶活性增加。与PU未干预的高剂量HN2组比较,不同剂量PU干预5mg/kgHN2后,睾丸内GST含量、GST及GR酶活性均显著增加(P<0.01)。与A组比较,F及G组的GSH含量、GST及GR酶活性无显著性差异(P>0.05),H组睾丸内GSH含量、GST及GR酶活性均无显著变化(P>0.05)。结论:HN2通过氧化应激损伤睾丸组织,PU可有效缓解该毒性作用。     

环磷酰胺对睾丸组织中SCF表达的影响及意义

目的：通过环磷酰胺对大鼠睾丸组织中干细胞因子的表达及增殖指数影响的研究,以探讨环磷酰胺所致生精功能损害的原因.方法：选取9天龄雄性Wistar大鼠,腹腔注射大、中、小剂量的环磷酰胺后24h、4w、8w分别采集睾丸标本,应用RT-PCR技术检测睾丸组织中SCF的表达,同时光镜下计数4w时睾丸组织的增殖指数.结果：（1）对照组随年龄的增加,睾丸组织中分泌型干细胞因子表达无显著差异（P＞0.05）,膜型干细胞因子均有显著增加（P＜0.05）.（2）同一时期各实验组和对照组比较,分泌型干细胞因子表达无显著差异（P＞0.05）,但膜型干细胞因子表达均有显著降低（P＜0.05）;同一时期各实验组间比较,随环磷酰胺剂量增加,膜型干细胞因子表达有显著降低（P＜0.05）.（3）同一剂量三个时期比较,各实验组分泌型干细胞因子无显著差异（P＞0.05）;膜型干细胞因子比较,大剂量组中无显著差异（P＞0.05）,中、小剂量组中24h较4w、8w均有显著降低（P＜0.05）,4w与8w比较无显著差异（P＞0.05）.（4）增殖指数检测,4w时各实验组与对照组比较,均有显著降低（P＜0.01）,并与剂量负相关.结论：本研究结果提示由于环磷酰胺的毒性作用,导致了睾丸组织中膜型干细胞因子表达下调,进而影响增殖指数降低,这可能即是临床上环磷酰胺使用后产生不同程度生精功能障碍的原因之一.