马抗人IgE—HRP的制备、纯化和用双扩ELISA,电泳转移酶免疫法鉴定

马抗人IgE血清通过QAE—Sephadex A-50离子交换层析提取马IgG,再用兔抗人全血清、人脐血浆交联的Sepharose 4B亲和层析吸附交叉反应抗原而纯化。其纯度用免疫双扩和圆盘电泳鉴定。马抗人ISE用辣根过氧化物酶(HRP)标记后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析马抗人IgE-HRP的活性,显示出过敏性患者血清中特异性抗螨IgE光密度值是正常人4～5倍。含高水平IgE血清经4～15％梯度浆丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后转移到滤膜上,经过电泳转移酶免疫分析显示出马抗人IgE-HRP和滤膜有三条阳性反应的区带。     

粉尘螨的培养实验

目的:评价应用配合饲料培养粉尘螨的效果。方法:在粉尘螨培养环境相同的条件下(温度25℃±1℃,相对湿度80%±1%),应用配合饲料(A组)和纯面粉(B组)分别培养粉尘螨,经过一定时间的饲养,对子代进行计数。结果:通过对两组子代数量进行分析,A组明显多于B组,差异极显著(P<0.01)。结论:在粉尘螨的培养中,选用配合饲料作为培养料,可以在一定的时间内培养出大量的粉尘螨,为研究螨性疫苗制剂提供原材料。     

粉尘螨I类变应原成熟肽段基因的克隆和生物信息学分析

目的 了解不同地区粉尘螨Ⅰ类变应原(Der f I)成熟肽段基因序列的变异性及其编码蛋白的化学及免疫学特征.方法 从皖南地区分离鉴定的活粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR扩增Der fⅠ成熟肽段基因.克隆到T载体测序确认.应用生物信息学软件对该基因进行初步分析.结果 获得皖南地区两种不同基因型的Der fⅠ成熟肽段基因,与GenBank公布的其他地区Der fⅠ基因序列比较同源性在98.73%-99.84%之间;相应编码氨基酸序列的同源性在99.04%-100%之间,存在6个氨基酸残基变异位点,并影响其抗原表位的改变.结论 不同地区Der fⅠ成熟肽段基因序列及其编码氨基酸序列存在差异,并对其免疫原性产生影响.克隆并分析研究我国各地的尘螨变应原基因序列及氨基酸序列变化,对于临床变应性疾病的诊治有重要的意义.     

印渍法对动物血清抗螨抗体的检测

尘螨浸液经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,转移到醋酸硝酸纤维滤膜上使之固相化。然后,滤膜与各种动物血清的生物制品孵育,並用酶免疫分析法鉴定抗螨免疫球蛋白。本文研究表明:尘螨特异性抗体不仅存在于患者人群中,而且较普遍地存在于马、羊等动物血清的生物制品中。     

病案分析法在人体寄生虫学教学中的应用

目的探讨病案分析法在人体寄生虫学教学中的应用效果。方法分析学生对传统教学法与病案分析法的认识、反映与评价。结果病案分析法深受学生喜爱,该方法不仅有助于学生学习专业知识,还有助于学生培养能力和树立良好的医德医风。结论病案分析法在人体寄生虫学教学中的应用切实可行,效果良好。     

粉尘螨Ⅰ类变应原成熟肽段基因的克隆和生物信息学Ⅰ分析

目的了解不同地区粉尘螨Ⅰ类变应原（DerfⅠ）成熟肽段基因序列的变异性及其编码蛋白的化学及免疫学特征。方法从皖南地区分离鉴定的活粉尘螨，提取总RNA，采用RT—PCR扩增DerfⅠ成熟肽段基因，克隆到T载体测序确认。应用生物信息学软件对该基因进行初步分析。结果获得皖南地区两种不同基因型的DerfⅠ成熟肽段基因，与GenBank公布的其他地区DerfⅠ基因序列比较同源性在98．73％～99．84％之间；相应编码氨基酸序列的同源性在99．04％～100％之间，存在6个氨基酸残基变异位点，并影响其抗原表位的改变。结论不同地区DerfⅠ成熟肽段基因序列及其编码氨基酸序列存在差异，并对其免疫原性产生影响。克隆并分析研究我国各地的尘螨变应原基因序列及氨基酸序列变化．对于临床变应性疾病的诊治有重要的意义。     

粉尘螨(抗原)PLGA微球对致敏小鼠肺部变应性炎症的影响

目的 探讨灌服粉尘螨(抗原)PLGA微球减敏治疗对粉尘螨(抗原)致敏小鼠肺部变应性炎症的影响。方法 粉尘螨(抗原)致敏C57-BL/6小鼠,灌服粉尘螨(抗原)PLGA微球减敏后,检测小鼠BALF中弹性蛋白酶、粉尘螨特异性IgG、粉尘螨特异性IgE的变化,并对支气管肺组织进行病理学检查。结果 粉尘螨(抗原)致敏小鼠BALF中弹性蛋白酶活性、粉尘螨特异性IgE水平升高,与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.01);致敏小鼠气道中产生大量炎性渗出液。灌服粉尘螨(抗原)PLGA微球减敏后,BALF中粉尘螨特异性IgE水平降低,与粉尘螨(抗原)致敏模型组相比具有显著性差异(P<0.05);BALF中弹性蛋白酶活性亦有降低,气道中渗出液明显减少,粉尘螨特异性IgG水平无明显差异。结论 粉尘螨(抗原)PLGA微球可以调节肺局部免疫应答,减轻粉尘螨(抗原)致敏所致肺部变应性炎症。     

粉尘螨(浸液)抗原PLGA微球的制备及其性质的研究

目的 制备粉尘螨微球并对其性质进行研究。方法 制得粉尘螨抗原浸液,以聚乳酸-乙醇酸(PLGA75/25)为包裹材料,用双乳化溶剂蒸发法制备粉尘螨微球,光镜下测定直径、分布及跨距。用抽提法检测粉尘螨微球体外缓释速率,通过灌服过荧光微球(在粉尘螨抗原浸液中加入罗丹明B)不同时间的小鼠派氏集合淋巴结(Pey-er’s potches,PP)组织切片来测定其在小鼠体内的缓释作用。结果 粉尘螨微球的直径为(7.6±1.4)μm,跨距为0.54,符合正态分布,载药量为7.4％。体外释药呈双相特征,0～2天呈快速释放,4～32天为慢速释放相。小鼠灌服微球后,第1、15天都能在小鼠PP内找到微球。结论 此方法制备的粉尘螨微球达到缓释制剂的要求,可以用于对致敏小鼠的脱敏研究。     

四格表的X^2检验法的探讨

通过对确切概率法、ｘ＾２方法、连续性校正法三种方法的计算机程序计算结果的比较，初步表明大样本，且理论频数大于５或７．５的某些四格表的显著性检验，采用ｘ＾２方法或连续性校正法增加显著性检验的第一类错误或第二类错误的机率。因此大样本或理论频数大的某些四格表，仍需用四格表的确切概率法（Ｆｉｓｈｅｒ法）计算其概率。     

钉螺酚氧化酶活性的初步研究

目的初步探讨日本血吸虫惟一中间宿主钉螺体内酚氧化酶的生化活性。方法解剖健康成年钉螺,剔除外壳,将其分为雄性组、雌性组及雌雄混合组(雌雄重量相等),匀浆离心取上清为待检酶液。以邻苯二酚为底物通过比色法检测钉螺酚化酶在pH6.8、28℃条件下三组酶活力并予比较;用同法分别测定三组在不同pH(恒温28℃)及不同温度(pH6.8)下的酚氧化酶活力,绘制变化曲线,确定该酶活性最适pH和最适温度。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法和Arrhenius公式求得各组酶活化能并以比较。结果在pH6.8、28℃条件下,雄性组、雌性组及混合组的酶活力分别为188.2±5.7、183.8±5.5及185.2±6.7(U/g),经方差分析,三组酶活力无显著差异。三组酚氧化酶的活性在不同pH及温度下的变化趋势无显著差异;pH为6.0、温度为40℃时,三组的酚氧化酶活性均最高。三组活化能分别为32.6±5.1、31.7±2.9及32.1±3.3(kJ/mol),经方差分析亦无显著差异。结论钉螺酚氧化酶活性及活化能均无性别差异,其催化邻苯二酚的最适pH及最适温度分别为6.0和40℃。