钉螺线粒体基因组DNA提取方法的优化及比较

目的优化提取钉螺线粒体基因组DNA(mt DNA)的方法。方法应用高温裂解、蛋白酶K变温消化和醋酸钾纯化对传统的高盐沉淀法进行优化,并将优化的高盐沉淀法与蔗糖密度梯度离心法、传统的高盐沉淀法进行比较。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和线粒体COX1基因PCR扩增产物鉴定提取的mt DNA,并用核ITS基因PCR扩增产物检测有无核DNA污染。结果优化的高盐沉淀法获得的mt DNA浓度和产量较高,差异有统计学意义(F=3 032.65、10185.00,P均0.01)。用凝胶电泳检测后未发现核DNA与蛋白质污染,质量可满足于PCR、测序等分子生物学研究。结论优化的高盐沉淀法简易高效,成本低,获得的mt DNA能满足相关分析要求。     

芜湖市某高校学生宿舍床席螨类和昆虫孳生状况调查

目的了解芜湖市某高校大学生宿舍储存状态下的床席螨类和昆虫孳生情况,为加强对学生宿舍螨类及相关疾病的控制和宣传教育提供理论依据。方法 2015年3-5月,采用随机抽样的调查方法,收集学生宿舍内不同储存位置、储存方式的床席屑灰样本,镜下分离、制成玻片标本,并进行螨种鉴定和计数。采用温水浸泡、暴晒床席和清扫室内积尘等干预措施,比较干预前后宿舍床席螨类和昆虫检出情况。结果共收集样本428份,螨类和昆虫检出率为71.03%。共分离鉴定螨和昆虫11种,其中粉尘螨检出率最高,为60.05%;其次为嗜卷书虱,检出率为40.89%;致痒螨类主要有马六甲肉食螨、蠊螨和蒲螨等,其检出率分别为9.81%、3.74%和1.64%。存放于室内角落、衣柜内、床铺最底层、阳台角落4种储存位置的床席螨类和昆虫检出率分别为74.75%、71.26%、61.17%、77.78%,差异无统计学意义(χ~2=7.030,P0.05)。无包裹、布袋包裹和塑料袋包裹3种储存方式的床席螨类和昆虫检出率依次为85.58%、78.13%、14.29%,差异有统计学意义(χ~2=164.303,P0.05)。采取干预措施后,螨类和昆虫检出率及螨类平均孳生密度均显著下降,差异均有统计学意义(χ~2=45.615,t=3.203,P均0.05)。结论该高校学生宿舍床席螨类和昆虫检出率高,以粉尘螨最为普遍;采用塑料袋封闭保存、温水浸泡、暴晒床席、清扫房屋积尘等干预措施可抑制床席螨类和昆虫的孳生。     

伯氏嗜木螨休眠体光镜下形态观察

目的了解伯氏嗜木螨休眠体(第二若螨)的结构特征。方法从地鳖虫培养料中采集伯氏嗜木螨的休眠体,将其制作成常规玻片标本,光镜下观察其外部形态特征。结果光镜下可见伯氏嗜木螨休眠体的生殖板、足及胫节毛和膝节毛等结构特征,足的前跗节发达,足爪明显,生殖板明显骨化。结论研究伯氏嗜木螨休眠体形态的细微特征,对进一步研究该螨的分类和生活史具有重要价值。     

猪囊尾蚴跨膜蛋白T24基因的克隆及序列分析

目的 寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子.方法 设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴跨膜蛋白T24基因编码序列,将其与线性克隆载体PMD-18T连接,分别进行酶切和PCR鉴定及DNA测序证实.结果 PCR法扩增出一条长度约678 bp的特异性片段,将重组质粒PMD-18T-T24作BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片段,对插入片段的测序结果表明,T24具有一个长度为678 bp的完整开放阅读框,编码225个氨基酸,理论分子量为23.91 kDa,与GenBank收录的猪囊尾蚴T24基因(编号为AY211879)具有高度的同源性(99.85%).结论 猪囊尾蚴跨膜蛋白T24编码基因克隆成功,为进一步的表达、鉴定及免疫诊断研究奠定了基础.     

1990～2004年国内血吸虫文献资料统计分析

日本血吸虫病是严重危害人民身体健康和生命安全、影响经济社会发展的重大传染病。多年来，在党中央、国务院的正确领导下，经过疫区各级人民政府、各有关部门艰苦努力，我国血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的成就。但近年来，因为多方面因素的影响，血吸虫病疫情回升，病人数居高不下，急性感染人数呈上升趋势，血防工作形势依然严峻。因此，对血吸虫病研究文献进行统计学分析．从一个侧面了解我国血吸虫病研究的状况，是十分必要的。     

粉尘螨脂质体制备和对致敏小鼠免疫功能的影响

目的:制备粉尘螨脂质体,并探讨其对粉尘螨(抗原)致敏小鼠免疫功能的影响,以了解粉尘螨脂质体脱敏效果及机制。方法:用粉尘螨(抗原)致敏BALB c小鼠,皮下注射不同剂量粉尘螨脂质体,ELISA法分别检测小鼠血清总IgG、总IgE、螨特异性IgG (sIgG)、螨特异性IgE (sIgE)滴度及IL 4、IFN γ水平。结果:致敏组小鼠血清总IgE、sIgE、总IgG、sIgG滴度及IL 4水平较正常组升高(P <0 .0 1) ,IFN γ水平显著下降(P <0 .0 1)。皮下注射粉尘螨脂质体后,小(1μg·g-1体重)、中(3μg·g-1体重)、大(9μg·g-1体重)剂量组小鼠血清IL 4水平较致敏组下降,IFN γ水平显著升高,与正常组相近(P>.0 5 )。总IgE、sIgE均显著下降,并以小剂量组下降最明显,与正常组相近,但中、大剂量组仍未下降至正常水平;小、中剂量组IgG及sIgG滴度与致敏组相比显著升高,尤以小剂量组升高最明显,而大剂量组与致敏组相比无明显差异,但仍较正常组显著升高。结论:所制备的粉尘螨脂质体可以对粉尘螨致敏小鼠产生脱敏作用,其中以小剂量组脱敏效果最好。     

外源性一氧化氮对日本血吸虫尾蚴的体外杀灭作用

目的 目的 探讨外源性一氧化氮 （NO） 对日本血吸虫尾蚴的体外杀灭效果及 NO抑制剂对这种杀灭作用的阻断效 果。方法 方法 收集日本血吸虫感染性钉螺体内尾蚴, 用RPMI 1640培养液配制成浓度为1 000条/ml的尾蚴悬液。向尾蚴悬 液中加入不同浓度的 NO发生剂亚硝基铁氰化钠 （SNP）, 同时设不加SNP的对照组, 观察外源性 NO对尾蚴的杀灭作用及 量效关系。向尾蚴悬液中加入2.00 mmol/L SNP, 并加入4种NO抑制剂血红蛋白 （Hb）、 L?半胱氨酸 （L?cyst）、 左旋精氨酸 （L? arg） 和硫酸亚铁 （FeSO4） 及其不同组合, 同时设2.00 mmol/L SNP阳性对照组, 观察抑制剂及其不同组合对NO杀灭尾蚴作 用的阻断效应。结果 结果 经 0.06、 0.10 mmol/L和0.20 mmol/L SNP作用后, 日本血吸虫尾蚴死亡率分别为 （8.3±1.1） %、（6.26± 2.3） %和 （9.3±1.0） %, 与对照组尾蚴死亡率差异无统计学意义 （P > 0.05）; 经0.50、 1.00 mmol/L 和2.00 mmol/L SNP作用后, 尾蚴死亡率分别为 （23.5±3.9） %、（46.0±1.1） %和 （59.4±0.5） %, 均显著高于对照组的尾蚴死亡率 （P < 0.05）。在加入2.00 mmol/L SNP的同时分别加入Hb、 FeSO4、 L?cyst、 L?arg、 FeSO4+L?cyst、 FeSO4+L?arg、 L?arg+L?cyst, 日本血吸虫尾蚴死亡率分别 为 （30.1±1.2） %、（45.1±1.4） %、（31.1±1.3） %、（34.2±3.1） %、（47.8±2.0） %、（49.1±0.6） %、（44.2±0.1） %, 与2.00 mmol/L SNP 阳 性对照组比较, 尾蚴死亡率均显著下降 （P < 0.05）。结论 结论 外源性 NO对日本血吸虫尾蚴具有体外杀灭作用, NO抑制剂 Hb、 FeSO4、 L?cyst、 L?arg及其不同组合对这种杀灭作用均具有不同程度的抑制效应。     

染色法判别日本血吸虫尾蚴生命状态的实验研究

目的采用染色法判别日本血吸虫尾蚴的生命状态。方法以0.4%台盼蓝、0.5%M.E.B、0.5%伊红、0.5%甲基蓝、0.05%中性红等5种染色液分别对死活日本血吸虫尾蚴染色5 min,显微镜下观察着色情况。结果台盼蓝、M.E.B、伊红、中性红4种染色液可使死尾蚴着色,而甲基蓝染液对其不着色;5种染液均不能使活尾蚴着色。结论0.4%台盼蓝、0.5%M.E.B、0.5%伊红、0.05%中性红染液染色可判别日本血吸虫尾蚴的生命状态。     

染色法快速鉴别湖北钉螺死活的实验研究

目的 目的 寻找一种快速准确、 简便易行的鉴别湖北钉螺死活的方法。方法 方法 分别用0.05%中性红水溶性染液、 0.5% 甲基蓝染液、 红墨水、 伊红亚甲基蓝 （MEB） 染液、 0.4%台盼蓝对活、 死钉螺进行染色， 染色30 min后压碎螺壳， 体视显微镜 下观察软体组织着色情况。结果 结果 0.05%中性红可将活钉螺均染成红色， 死钉螺均未着色； 0.5%甲基蓝染色后， 活、 死钉螺 均不着色； 红墨水可将活、 死钉螺均染成红色； MEB染液可使部分活、 死钉螺着色； 0.4%台盼蓝可将活钉螺和部分死钉螺均 染成蓝色。结论 结论 使用0.05%中性红水溶性染色液对钉螺进行染色处理， 可快速、 准确、 客观地鉴别钉螺死活。     

日本血吸虫重组谷胱甘肽转移酶可生物降解微球的制备

目的制备日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(rSjGST)可生物降解微球。方法将含有表达质粒pET28a( )-SjGST的E.coliBL21在LB培养基中进行培养、诱导表达、过柱纯化,测其纯化后蛋白浓度;将纯化后的蛋白质以聚乳酸乙醇酸(PLGA75/25)为包裹材料,用双乳化溶剂蒸发法制备rSjGST可生物降解微球,光镜下测定粒径、跨距、分布及微球载蛋白量,冷冻干燥保存。结果测得纯化后蛋白浓度为8.323mg/ml,微球的直径为(7.3±1.2)μm,跨距为0.52,符合正态分布,载药量为7.62%。结论rSjGST可生物降解微球制备成功,为进行小鼠保护性免疫研究奠定了基础。