黄芪及其复方中药治疗小儿β地中海贫血的前瞻性临床研究

目的：评价黄芪及其复方中药颗粒治疗小儿β地中海贫血的疗效及安全性。方法：采用随机对照双盲的临床试验法,57例入选患儿先按中间型及重型分层,再随机分入黄芪组、复方组(黄芪+党参+龟板)、安慰剂对照组,疗程12周,观察各组血液学指标及安全性指标。结果：经12周的治疗,中间型患儿复方组血红蛋白提升值为1.21±1.12 g/dL,黄芪组为1.05±0.80 g/dL,而对照组则下降了0.28±0.51 g/dL,3组比较差异有统计学意义（P<0.01）。疗程结束后复方组及黄芪组的Hb水平均显著高于对照组（P<0.05）。黄芪及其复方治疗均显著提升了胎儿血红蛋白水平,一定程度上提升了红细胞总数、平均血红蛋白含量及网织红细胞。中间型患儿复方组总有效率为64%,黄芪组为62%,均显著高于对照组（9%;P<0.01）。在重型患儿中也有类似以上效果,但逊于中间型患儿。服用药物对患儿白细胞总数、中性粒细胞总数、血小板总数及肝肾功能均无显著性影响。结论：黄芪及其复方治疗小儿β地中海贫血具有一定疗效且较安全。     

新生儿长期胃肠外营养相关性胆汁淤积的发生率及其影响因素

目的观察新生儿胃肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的发生率及其影响因素。方法对2007年1月-2008年12月本院新生儿科胃肠外营养(PN)≥14d的98例新生儿进行临床分析。按PNAC的有无分组并进行临床资料(一般情况、PN相关指标)比较,计量资料用t检验,计数资料用χ2检验,危险因素以单因素及多因素Logistic回归模型进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果PN≥14d的98例新生儿中,发生PNAC8例,发生率为8.16%。PN持续时间、氨基酸累积用量、脂肪累积用量、达到全胃肠道营养的时间与PNAC密切相关,胎龄<30周、感染在2组间差异均有统计学意义(Pa<0.05);氨基酸累积用量是PNAC发生的独立危险因素(OR=1.037,95%CI:1.004～1.071,P=0.004)。结论PN、氨基酸累积用量、脂肪累积用量、达到全胃肠道营养的时间可能是影响新生儿PNAC发生的因素,其中氨基酸累积用量可能是PNAC发生的独立危险因素。     

短干涉RNA特异性抑制白血病细胞中肺耐药相关蛋白基因表达

背景和目的双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA，导致转录后水平的基因沉默。肺耐药相关蛋白的过度表达与白血病细胞多药耐药密切相关。本研究旨在探讨自行设计的LRP特异性siRNA能否发挥特异性降解LRPmR-NA、抑制蛋白质表达的作用。方法构建LRP真核表达载体pcDNA3．0／LRP。以pcDNA3．0／LRP、pEGFP-C1、二者的特异性siRNA分别组和，转染K562细胞。以RT-PCR方法和流式细胞术检测LRP mRNA和蛋白质水平的变化，以荧光显微镜检测GFP的表达的变化。结果K562细胞转染pcDNA3．0／LRP后，LRP mRNA水平明显升高，蛋白质表达由阴性转为阳性，阳性率30％；LRP特异性siRNA与pcDNA3．0／LRP共同转染K562细胞，LRP mRNA和蛋白质表达均明显降低，由阳性转为阴性；LRP特异性siRNA与pEGFP-C1共同转染K562细胞，GFP的表达与pEGFP-C1单独转染无差异；GFP特异性siRNA与pcDNA3.0共同转染K562细胞，LRP mRNA水平和蛋白质表达与pcDNA3．0／LRP单独转染无差异。结论LRP特异性siRNA在K562细胞中能够特异性地降解LRP mRNA、抑制其蛋白质表达。该研究将为利用siRNA逆转LRP引起的白血病细胞MDR奠定理论基础。     

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因 真核表达载体的构建及其 对靶 mRNA的切割

肿瘤的生长和转移需要血管形成，现已发现有多种生物因子参与其形成过程。而血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）被认为是最重要的血管生成因子之一，在肿瘤的生长与转移中起重要作用 [1]。我们曾在卵巢癌中发现有 VEGF的高表达 [2]，因此，我们自行设计和构建了针对 VEGF mRNA的发夹状核酶基因的真核表达载体，试图采用核酶（ ribozyme）技术抑制 VEGF的表达，以探讨卵巢癌基因治疗的新途径。 1 材料和方法 1． 1 菌种、质粒和试剂 大肠杆菌 DH5α、真核表达载体 pcDNA3由第四军医大学生化教研室提供。限制性内切酶及 T4 DNA连接酶等购自原平公司。 1． 2 抗人 VEGF核酶基因的合成 针对人 VEGF mRNA第三外显子，设计并合成抗人 VEGF发夹状核酶基因的两条互补单链。为便于克隆和鉴定，该基因的 5′端及 3′端分别设有 BamH I和 EcoR I酶切位点和两个保护碱基，共 66个碱基对。核酶基因两条链的序列为： V1， 5′ -CGG GAT CCC TGA TAA GAA TCC AAC CAG AGA AAC ACA CGT TGT GGT ATA TTA CCT GGT AGA ATC CCG-3′； V2， 5′ -CGG AAT TCT ACC AGG TAA TAT ACC ACA ACG TGT GTT TCT CTG GTT GGA TGT CTA TCA GGG ATC CCG-3′     

人类珠蛋白基因表达调控机制研究进展

人类 β珠蛋白基因簇的顺次切换表达机制包括 :在转录水平多个转录调控元件如 L CR、EKL F、CCAAT等的作用 ,在转录后各 m RNA的翻译及加工也受到影响。而 α珠蛋白基因簇的切换机制则为 ζ基因的关闭。另外 ,α及 β- m RNA3′U TR结构对其自身稳定性具有决定性作用 ,并进而影响其蛋白质水平。     

黄芪的含药血清诱导K562细胞表达^Gγ-mRNA和合成HbF

目的研究黄芪对K562细胞的^Gγ-珠蛋白基因表达的作用。方法以K562细胞为体外模型，用联苯胺染色方法来确定黄芪的含药血清诱导K562细胞向红系分化的作用；用RT—PCR方法研究黄芪的含药血清诱导K562细胞^Gγ-珠蛋白mRNA的表达；用Western Blot方法研究黄芪的含药血清诱导K562细胞HbF的合成。结果黄芪的含药血清作用于K562细胞5d后联苯胺染色阳性率达19．8％；同时伴有^Gγ-珠蛋白mRNA的表达的增加（最高可达3．6倍）和HbF的合成的增加，与丁酸钠组比较，黄芪组诱导K562细胞^Gγ-珠蛋白基因mRNA的表达可以持续3～5d，而丁酸钠组只有1d。结论黄芪有望成为一种有效的γ蛋白基因诱导剂。     

"龙血胶囊"抗移植性肿瘤的实验研究

目的：研究龙血胶囊（DXS）对小鼠移植性肝癌Heps、艾氏实体癌EC的抑制作用及与放、化疗联合的增效减毒作用。方法：小鼠抗移植性肿瘤实验。结果：LXS 250mg／kg灌胃对Heps的最大实验抑瘤率达58．57％（P〈0．01）．LXS、5-FU单独给药．对Heps的抑瘤率分别为41．86％和52．56％，联合给药抑瘤率达62.33％（P〈0．001）。LXS、CTX和5-FU单独给药对EC的抑瘤率分别为32．02％、37．64％和39．89％（P〈0．05），分别与CTX、5-FU联合给药，抑瘤率达43．26％、45．51％（P〈0．01）。LXS口服、钴-60放疗对Heps的抑瘤率分别为58．57％、54．58％；二者联合．抑瘤率达64．54％（P〈0．001）。结论：龙血胶囊对Heps、EC有较好的抑瘤作用龙血胶囊与放．化疗联合，有显著的增效减毒和增敏作用。     

黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的诱导作用研究

目的探讨黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的影响。方法用超声醇提水提法从黄芪根中获取富含黄芪总苷(AST)的醇溶部分和富含黄芪多糖(APS)的水溶部分并分别作用于K562细胞,联苯胺染色法观察K562细胞向红系分化的情况,MTT法测定细胞活性。以丁酸钠(BA)处理的K562细胞作为阳性对照。结果以不同浓度(1、2、4、8mg/ml)APS作用于K562细胞后显示其有诱导后者向红系分化的作用,以4mg/ml为最适浓度,而AST诱导作用不明显。4mg/ml APS、AST及0.5mmol/L BA作用后K562细胞的联苯胺染色阳性率(BZ%)峰值分别为13.2%、2.9%及17.5%。以4mg/ml APS作用于K562细胞24、48、72h后,其BZ%显著低于同时点BA组(P<0.01),但72、96h的联苯胺染色阳性细胞总数明显高于BA组(P<0.01)。MTT测定结果显示,APS、AST对K562细胞的生长无明显抑制作用,而BA对细胞生长有明显抑制作用(P<0.01)。结论黄芪可诱导K562细胞向红系分化,其有效成分在富含多糖的水溶部分(APS),以4mg/ml浓度的诱导作用最强。黄芪提取物对K562细胞的生长无明显抑制作用。     

脐血HLA抗原分型研究

脐血ＨＬＡ抗原分型研究本研究旨在初步确立脐血ＨＬＡ分型方法，为异基因的脐血造血细胞（ＣＢＨＣ）移植选择适当供者和建立标定ＨＬＡ分型的脐血细胞库创造条件。１．正常顺产的新生儿脐带血ＡＣＤ抗凝。所有孕妇均无内科和产科合并症，肝功正常，ＨＢｓＡｇ阴性，外周...     

孕妇外周血中SRY基因检测在产前诊断中的应用

目的：本文旨在探索使用套式PCR的方法，对通过密度梯度离心所得母体外周血中的胎儿细胞SRY基因片断进行检测，用以评估基因检测在早期判定胎儿性别方面的准确性，从而为利用孕妇血中胎儿细胞进行无创性产前基因诊断奠定基础。方法：采取正常妊娠10－20周孕妇外周血，经密度梯度离心后收集各层细胞，并分别提取其中的DNA，然后使用套式PCR的方法对SRY基因进行检测，并将结果与胎儿性别进行比较，用以评估套式PCR检测SRY基因在早期判定胎儿性别中的准确性和可行性。结果：共检测10例孕妇，有7例套式PCR扩增出SRY,其中有6例证实是男胎，男性性别预测符合率为85.7%(6/7)；未扩增出SRY基因的3例均证实为女性，女性预测符合率为100％（3／3）。在套式PCR扩增第一轮中，除阳性对照外所有细胞均未扩增出SRY基因，而第二轮PCR后，部分细胞扩增出SRY基因。结论：（1）孕妇外周血中存在有胎儿细胞，密度梯度离心法可对其中的胎儿细胞起一定的分离富集作用，富集到的胎儿细胞主要集中在中层，但含量较少，要用于临床检测，还需进行进一步的富集和纯化。（2）应用套式PCR能够检测到从母体外周血中所富集到胎儿细胞中的SRY基因，且对预测胎儿性别有较高的准确度，尤其是女性胎儿的判定，而在对男性胎儿的判定方面应注意外源性男性DNA的污染。