阿尔茨海默病患者β淀粉样肽40人单链抗体在大肠杆菌的表达和纯化

目的：重组表达并纯化抗β淀粉样肽40的人单链抗体，为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法：实验于2004-08／2005-03在核医学实验室完成。自制人单链抗体基因。将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗p淀粉样肽40人单链抗体基因，克隆到pET22b（&;#177;）质粒，转化BL21-gold大肠杆菌，经0．5mmol／L异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达抗β淀粉样肽40的人单链抗体。采用Ni^2&;#177;-NTA-树脂柱亲和纯化尿素变性的包涵体内表达产物，经柱上复性，含咪唑缓冲液洗脱获得人单链抗体。应用Western blot和酶联免疫吸附实验鉴定纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体。用Branford法测定纯化抗体的浓度。结果：①抗β淀粉样肽40人单链抗体基因长度约为750bp，重组表达产物相对分子质量33000.②经过一次亲和柱纯化，从细菌包涵体中纯化出高纯度的抗β淀粉样肽40人单链抗体。③酶联免疫吸附实验分析表明纯化单链抗体和β淀粉样肽40结合的A595nm。高于对照，差异显著（0．59&;#177;0．06，0．12&;#177;0．02，P〈0．05），表明从包涵体中纯化出来β淀粉样肽40人单链抗体保持了结合抗原的免疫活性。纯化β淀粉样肽40人单链抗体浓度为96mg／L。结论：抗β淀粉样肽40的人单链抗体在大肠杆菌系统得以重组表达，利用亲和层析成功获得高纯度的重组单链抗体。     

24例急性心肌梗塞的急救护理体会

急性心肌梗塞（AMI）是心血管疾病的急危重病症，是威胁人们健康和生命的常见病、多发病。如何降低病死率，关键问题除了早期及时诊断和早期合理治疗外，严密仔细观察病情及认真做好护理工作也是非常重要的一环。及时到位的病情观察，为抢救治疗提供了有效依据。     

4-18F-氟代丁酸及其甲酯作为PET显像剂可行性的初步研究

目的：利用PET-MF-2V-IT-I氟多功能合成模块自动化合成4-18F-氟代丁酸及其甲酯,并初步探讨其作为PET显像剂的可行性。方法前体4-溴代丁酸甲酯与18F－发生氟代反应,中间体4-18F-氟代丁酸甲酯用高压液相色谱法分离,收集保留时间在6．8～7．8 min的组分,将此组分与NaOH溶液于115℃下加热水解10 min,加入HCl调至中性,得到4-18F-氟代丁酸;稀释后过C18柱,再用20 ml注射用水清洗C18柱,0．5 ml乙醇洗脱后用生理盐水稀释,得到4-18F-氟代丁酸甲酯。分别目测两种产品的澄清度,精密试纸测定pH值、测定放射化学纯度和稳定性。正常小鼠尾静脉注射4-18F-氟代丁酸30 min后行micro PET显像。结果4-18F-氟代丁酸和4-18F-氟代丁酸甲酯的自动合成时间分别为40 min和20 min,放化收率分别为35%和50%（均未经时间校正）, pH值分别为6．5和7．1,产品放射化学纯度均>95%。二者均澄清无颗粒,室温放置30 min后均出现脱氟现象。正常小鼠micro PET显像结果显示,脊柱有明显的放射性浓聚,表明4-18F-氟代丁酸在体内脱氟,肠道亦有较高的放射性摄取。结论4-18F-氟代丁酸及其甲酯的合成方法操作简便,合成时间短,且放化收率也较高,但因其不稳定,不适合用作PET显像剂进行进一步研究。但小鼠micro PET显像结果提示,18F-氟代丁酸类似物在肠道疾病诊断中有潜在研究价值。     

人膜联蛋白V的重组表达与细胞凋亡显像

移植肿瘤模型的研究表明,化疗和放疗对肿瘤的杀伤效应是通过对细胞凋亡过程的迅速诱导来实现的[1]。膜联蛋白V(Annexin-V)结合细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl-serine,PS)。PS是组成型的阴离子细胞膜磷脂,在正常情况下,它位于细胞膜脂质双层结构的内侧,而启动程序性细胞死亡的     

Aβ单链抗体基因腺相关病毒的包装和纯化

目的 包装和纯化携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒，为阿尔茨海默病的基因治疗创造条件。 方法 用Lipofectamine 2000将pSNAV2.0-Abeta-scFv质粒转染BHK-21细胞并用G418筛选稳定细胞系。培养稳定细胞系用辅助病毒HSV1-rc/ UL2感染包装携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒。用氯仿-PEG/NaCl-氯仿法和离子交换层析法纯化重组腺相关病毒，SDS-PAGE和PCR方法检测纯化的病毒。用地高辛标记探针测定重组腺相关病毒的物理滴度。利用水迷宫测试重组病毒对转基因阿尔茨海默病小鼠模型的治疗效果。结果 带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒的纯度为98%，物理滴度为1×1012vg/ml。经过治疗的小鼠模型潜伏期明显缩短。 结论 利用HSV1系统成功包装和纯化了携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒，动物实验表明对阿尔茨海默病具有治疗作用。     

朊毒体与牛海绵状脑病研究进展

朊毒体是人与动物的非常规致病因子，引起的疾病主要表现为神经系统的慢性进行性破坏，终归死亡^[1]，目前尚未弄清它的本质，牛海绵状脑病（疯牛病）即由朊毒体引起，近期在西方已酿成重大政治事件和经济悲剧。人的新型克-雅氏病与疯牛病密切相关^[2]，是医学和兽医学研究的热点，受到公众和媒体的密切关注^[3]，本文拟简要介绍朊毒体和朊毒体病的病原学，流行病学，临床学及其检测技术和预防措施。     

成都市疾控系统微生物实验室能力验证评价标准探讨及结果分析

[目的]建立评价标准,分析2004-2009年成都市疾控系统微生物实验室能力验证结果。[方法]采用Z分值评价实验室微生物定量指标检测能力,∣Z∣≤2为结果满意,2﹤∣Z∣﹤3为结果可疑,∣Z∣≥3为结果不可接受;采用关键控制点分项评分的百分制评价实验室微生物定性指标检测能力。[结果]2004～2009年成都市疾控系统微生物实验室能力验证结果表明,参试实验室的微生物定量指标检测质量较好,同时在微生物定性指标检测能力考核获满意评价的参试实验室逐步增加。[结论]建立的实验室能力验证评价标准客观实用,促进了参试实验室检测质量的持续改进。     

PCR技术在转人肾素基因小鼠繁殖保存及育种中的应用

应用聚合酶链反应(PCR,Polymerase Chain ReacLion)方法检测转基因小鼠繁殖及育种过程中外源基因的整合,筛选携带目的基因的阳性仔鼠。     

131I-zaptuzumab对体外培养肿瘤细胞存活的影响

目的 为提高单克隆抗体治疗肿瘤效果,研究测试放射性核素¹³¹I标记的单克隆抗体zaptuzumab 对体外培养肿瘤细胞的杀伤作用。 方法 实验采用3种肿瘤细胞,分别是人A549肺腺癌、人H460大细胞肺癌和人MGC-803胃腺癌细胞。每组细胞采用4种不同的处理:分别是生理盐水、zaptuzumab、¹³¹I-zaptuzumab和¹³¹I。处理12h后用MTS法测定细胞活性,用ANOVA分析各组之间的统计学差异,了解¹³¹I-zaptuzumab对肿瘤细胞存活的影响。 结果 ¹³¹I-zaptuzumab的处理使人A549肺腺癌细胞的存活率降低37.9%,而zaptuzumab和¹³¹I处理分别使人A549肺腺癌细胞的存活率降低8.7%和1.9%;¹³¹I-zaptuzumab的处理使人H460大细胞肺癌的存活率降低53.4%,而zaptuzumab和¹³¹I处理使人H460大细胞肺癌细胞的存活率降低15.1%和18.1%;¹³¹I-zaptuzumab使人MGC-803胃腺癌存活率降低13.4%,而zaptuzumab和¹³¹I处理使存活率降低10.2%和8.4%。 结论 ¹³¹I-zaptuzumab与zaptuzumab相比,能够更有效地杀伤人A549肺腺癌和H460大细胞肺癌细胞,提示靶向死亡受体5的放射免疫治疗的可行性。