C基因截短型HBV载体的复制、包装与表达

目的 探索C基因截短型重组HBV载体的复制、包装和表达。方法 采用分子克隆、定点突变技术构建C基因截短型HBV载体；瞬时转染HepG2细胞，在荧光显微镜下观察外源目的基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达；提取转染细胞胞内、胞外DNA分别进行半巢式聚合酶链反应(PCR)、非变性凝胶电泳杂交技术、sourhern blot杂交定量分析及常规PCR等分析，检测重组HBV载体的复制、包装及子代病毒的生成。结果 经酶切鉴定，C基因截短型HBV载体构建成功；转染HepG2细胞，外源目的基因能够高效表达；在辅助载体的辅助下，C基因截短型HBV载体能够在肝细胞进行复制，包装，通过定量分析，C基因截短型HBV载体的包装效率比C基因非截短型HBV，载体提高4～8倍；另外，C基因截短型HBV载体可以在辅助载体的辅助下包装成携带外源目的基因的子代病毒颗粒分泌到胞外。结论 C基因部分截短不影响HBV载体外源基因的表达和病毒的复制，而且可以提高载体的包装效率。     

不同人群血清抗GBV-B的检测及其意义

用ＧＢ病毒Ｂ型（ＧＢＶ－Ｂ）ＮＳ５区合成肽建立的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测各型病毒性肝炎及其高危人群的血清抗ＧＢＶ－Ｂ。共检测血清标本１２８６份，其中３７９名健康献血员，５８例慢性肾病血液透析患者，１８６例静脉吸毒者及６６３例病毒性肝炎患者...     

体外肝细胞培养技术新进展

肝细胞体外培养技术为肝病及相关学科的研究提供了重要的实验基础 ,促进了肝脏疾病的研究进展。近年 ,肝炎病毒的感染机制、生物人工肝支持系统等临床基础和应用研究已初见成效 ,这一可喜成果与肝细胞体外培养技术的研究进展密切相关 ,本文就近年相关文献综述如下。1　肝细胞的体外分离Ｓｅｇｌｅｎ二步分离法目前最为经典 ,此法分离出的肝细胞形态完整、活性好、功能佳 ,不足之处在于操作复杂、所需胶原酶量大、成本高 ,且需有一定的设备 ,故限制了在国内实验室的推广。我国学者根据自己的情况建立了许多操作简便、成本低廉、不需复杂设备…     

IL-2和IL-12联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究

目的探讨瘤内注射共表达mIL-12和hIL-2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用.方法构建pDC511hIL2-mIL12、pDC511mIL-12、pDC511hIL-2真核表达质粒载体;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达;小鼠肝癌H22皮下移植瘤瘤内注射各组质粒DNA后,检测不同时间血清中细胞因子浓度;观察各组小鼠存活时间,肿瘤大小变化;并检测各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)活性.对各治疗组在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织学观察.结果酶切鉴定各组质粒载体,均示构建成功,并能在真核细胞内高效表达相应细胞因子.瘤内注射各组质粒载体后,pDChIL2-mIL12组在不同时间表达的hIL2和mIL12分别与pDC511hIL2 组(F=71.11,P<0.01)、pDC511mIL12组 (F=30.70,P<0.05)比较有显著性差异.mIL-12基因和hIL-2基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于各单独治疗组和对照组(P<0.05),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强.双基因联合治疗组,病灶内肿瘤细胞坏死明显,炎性细胞广泛浸润.结论 IL-12、IL-2基因治疗可抑制小鼠肝癌H22皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答,两者联合运用可产生协同效应.为进一步运用高效基因导入技术进行肝癌基因治疗研究提供初步的实验依据.     

靶向HBVX基因的shRNA表达质粒对HBV复制的抑制作用

目的 观察靶向HBVX基因的RNA干扰(RNAi)对HBV复制的抑制作用.方法 选择HBV基因组X区的Nt1681-1708作为靶序列,合成相应的正、反义寡核苷酸,退火后形成双链,克隆入shRNA表达质粒,将得到的质粒与HBV质粒共转染HepG2细胞,观察HepG2细胞中HBsAg、HBeAg、HBV DNA和pgRNA的受抑制情况.结果 HBsAg、HBeAg的表达、HBV DNA和pgRNA的拷贝数均明显受到抑制.结论 所选靶区通过RNAi可有效抑制HBV复制.     

HBV肝细胞内靶向转录调控研究进展

本文就近年有关反式调控HBV肝细胞内靶向转录的物质基础及其作用机制进行综述.     

复方中药体外保护肝细胞的机制

目的探讨复方中药制剂体外保护肝细胞的机制.方法用MTT法、荧光染色、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术等方法观察不同浓度中药复方制剂(包括黄芩、黄柏、板蓝根、山豆根等)抑制TNF-α+Act-D诱导正常大鼠肝细胞凋亡的作用,并检测各组清蛋白的分泌结果自组中药复方制剂能明显改善肝细胞的凋亡状况,出现了典型的形态学和生化学改变,但存在药物浓度上的差异.中药组(0.2,2 mg.L-1)的凋亡率(10.4%±1.2%,13.9±0.4%)低于凋亡模型组(vs17.4%±1.9%,n=3,P＜0.05),中药组(20mg.L-1)的凋亡率(18.30%±1.15%)与凋亡模型组相比没有显著性差异(P＞0.05).除此之外,自组中药复方制剂还促进肝细胞清蛋白的分泌,但存在作用时间和药物浓度的交互作用.结论复方中药制剂能够抑制正常肝细胞凋亡并促进其清蛋白分泌.     

HBV核心蛋白作为免疫载体的研究进展

外源基因插入HBV核心蛋白特定部位基因后 ,核心蛋白无论在真核细胞或原核细胞都能够正确地折叠和自身装配 ,因而其作为颗粒样载体具有显著的优越性。对HBc单体及其形成的核壳结构的不断深入了解 ,在免疫及基因治疗方面正在发挥重要的作用。本文对HBV核心蛋白的结构与功能及其作为免疫载体的应用进行了综述。