环氧合酶-2抑制剂对人肝癌细胞株的体外研究

目的:观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂Celecoxib对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响以及COX-2、Survivin和MDR1/P-gp表达水平的变化,探讨COX-2抑制剂治疗肝癌的作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖状态;免疫组化法测定细胞中PCNA和COX-2表达;透射电镜及流式细胞仪观察Celecoxib诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响以及P-gp表达的变化;进一步用RT-PCR检测Survivin和COX-2mRNA在药物处理前后表达的变化。结果:人肝癌细胞系Hep-G2和BEL-7402中COX-2均有显著表达,Celecoxib呈时间和剂量依赖性抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞周期分布改变,G0/G1期细胞比例增加;肝癌细胞凋亡过程中,COX-2和Survivin基因的表达显著下调,P-gp表达减弱。结论:COX-2抑制剂Celecoxib可能通过下调COX-2、Survivin和P-gp表达,改变细胞周期分布,抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

均匀设计优化盐藻(D.peircei)多糖提取工艺

目的：盐藻D．peircei多糖提取方法的摸索及最佳条件的确定。方法：以均匀设计实验优化提取工艺。结果：提取的优化条件为：20倍水，pH为9，80℃水浴，提取10h，同法提取2次，每次平行做2份，多糖得率为18．11％。结论：均匀设计的结果与实际效果相吻合，为一可行性的研究方法，为以后D．peircei多糖的开发利用提供依据。     

现代生物工程课程教学实践及其建设

一、现代生物工程课程建设的重要性 现代生物工程(生物技术)是21世纪最令人瞩目的高新技术之一,它正以日新月异的速度飞速向前发展,并以强大的冲击力影响着现代医药科技的研究和产品开发。现代生物工程技术是一门基于生物化学、分子生物学、细胞生物学、免疫学、微生物学、生物反应工程学、基因组学、生物信息学等一大批基础学科之上的一门综合学科。它具有研究手段先进、综合性强、技术涉及面广、内容丰富、与医药工业结合紧密等特点。     

环氧化酶Ⅱ抑制剂体外筛选模型的研究

 目的建立环氧化酶Ⅱ活性的检测模型，提供环氧化酶Ⅱ抑制剂的筛选模型及非甾体类抗炎药(nonsteoroidal anti inflammatory drug,NSAID)筛选的方法。方法利用NIH 3T3细胞在血清存在情况下能诱导生成环氧化酶Ⅱ的特性，通过加入底物花生四烯酸，检测终产物前列腺素E-2(PGE-2)含量的变化，判断化合物对环氧化酶Ⅱ的作用。以rofecoxib(罗非昔布)为阳性药来判断该模型能否用于环氧化酶Ⅱ活性的检测。结果Rofecoxib能明显的抑制环氧化酶Ⅱ的活性。结论该方法可以用于环氧化酶Ⅱ抑制剂的筛选。     

超声对提高胆管疾病诊断率的研究——注射Ceosunin及纵、横旋转扫查法的意义

对肝外胆管扩张(7—15mm)42例施行了Ceosunin注射后(利胆法)超声观察。被证实胆管有梗阻性病变18例中,72％(13例)胆管增宽,16％(3例)无明显变化,12％(2例)缩小;胆管径均值从9.8mm增宽达11.7mm。非梗阻组24例中92％(22例)胆管径缩小,8％(2例)无明显变化,无1例增宽;胆管径均值从9.6mm缩小至6.3mm。梗阻组中9例壶腹周围癌(其中6例肿瘤径≤2cm)经利胆法后胆管径均增宽,采用胆管纵旋转扫查法及横旋转扫查法,使8例肿瘤得以显示。利胆法及旋转扫查法的应用使胆管下段病变显示率从41％提高到88％。对胆管扩张病例施行利胆法,以管径没有缩小为疑诊胆管梗阻的标准,其Sensitivity为89％,Specificity为92％;Accuracy为90％。本方法对判断胆管轻度扩张的病理意义有较高临床价值。为壶腹周围肿瘤的早期诊断提供了无创伤的手段。     

3,5-双三氟甲基苯乙醇的手性毛细管电泳拆分

目的建立用毛细管电泳对3,5-双三氟甲基苯乙醇对映体的手性拆分方法。方法采用环糊精及其衍生物作为手性选择剂,用毛细管电泳技术对3,5-双三氟甲基苯乙醇对映体进行分离,考察了环糊精种类、环糊精浓度、缓冲溶液pH值、缓冲溶液浓度、分离电压、温度等因素对分离的影响,并对分离条件进行了优化和重复性考察。结果在pH=8.0的磷酸缓冲溶液(0.05 mol·L^-1)中,以0.01 mol·L^-1的磺丁基-β-环糊精为手性选择剂,15 kV为分离电压,在15℃下可使3,5-双三氟甲基苯乙醇对映体达到基线分离,分离度为1.54。分离度RSD小于2%,迁移时间RSD小于5%。结论该方法简单快速,灵敏度高,重复性好。     

杜氏藻多糖生物活性研究

研究杜氏藻(Dunaliella.Salina)多糖的生物活性,杜氏藻总多糖PDS及酸性多糖组分PDS1、PDS2对Hela细胞、Lovo细胞以及SGC7901细胞株的毒性实验表明PDS1在10～500 μg/ml浓度下均有类似于5-氟脲嘧啶的作用,但大剂量长时间后有促进细胞增殖的作用;抗流感病毒实验表明PDS对细胞有明显的保护作用,其病毒抑制作用随多糖浓度增强而增强;淋巴细胞转化实验中PDS、PDS1和PDS2均对淋巴细胞增殖有刺激作用,在200μg/ml浓度以上时效果显著(P＜0.01)     

一种简单快速的cDNA文库构建方法

目的:建立一种以LD-PCR(long-distance-PCR)为基础的cDNA文库的快速构建方法.方法:以鲨鱼再生肝组织为材料获得总RNA,用偶联有Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含BamH Ⅰ酶切位点的Oligo(dT)16引物在逆转录酶M-MLV的作用下合成cDNA第一链,进而利用末端转移酶在合成的cDNA第一链的3′末端引入poly-dC尾;以含BamH Ⅰ酶切位点的Oligo(dT)16和含Hind Ⅲ酶切位点的Oligo(dG)10为引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,通过T4 DNA连接酶连接到经相同双酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库,对文库的容量、重组率以及多样性进行分析.结果:通过本方法构建的cDNA文库容量约为5.84×105个/μg ds-cDNA,重组率为96.7%;对随机提取的30个克隆质粒的插入序列进行分析,共获得25个不同的cDNA序列,且未见重复序列.结论:本法构建的cDNA质粒文库具有快速、简单的特点,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析.     

新型降钙素的分子设计

以人和鲑鱼降钙素为先导物 ,根据多肽类药物设计原理 ,借助多肽蛋白质计算机分析软件辅助设计了一种新的人降钙素类似物 ,简称新型降钙素 .计算机分析结果表明 :该新型降钙素等电点提高 (pI 8.7) ,C 末端亲水性增加 ,抗原表位分析图谱与人降钙素的相同 .利用基因工程法制备新型降钙素 ,并经Westernblotting分析表明它与人降钙素分子的抗原性相似