NOD样受体蛋白3对小鼠巨噬细胞吞噬创伤弧菌能力的影响

目的探讨NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)对巨噬细胞吞噬创伤弧菌能力的影响和调控机制。方法转录组测序分析创伤弧菌感染J774A.1细胞吞噬相关基因的表达谱;CRISPR-Cas9基因编辑技术构建NLRP3敲除(NLRP3 KO)的J774A.1细胞;流式细胞术分析未敲除J774A.1和NLRP3 KO J774A.1细胞对创伤弧菌和pHrodo RED标记的大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)修饰微球的吞噬能力;荧光定量PCR检测吞噬相关基因Fgr2b的表达情况。结果J774A.1细胞感染创伤弧菌后,吞噬功能相关基因表达谱中约有18个基因表达上调(P<0.05);NLRP3 KO J774A.1细胞在NLRP3的第2个外显子中有5个碱基的缺失,发生移码突变,导致NLRP3表达缺陷;创伤弧菌或E.coli修饰微球体外作用后,NLRP3 KO J774A.1细胞较未敲除组吞噬能力均显著增强,差异有统计学意义;与未敲除组比较,创伤弧菌感染的NLRP3 KO J774A.1细胞中Fgr2b基因的表达显著升高,差异有统计学意义。结论NLRP3能负调控巨噬细胞对创伤弧菌的吞噬功能,其作用机制可能与调控吞噬相关基因Fgr2b的表达有关。     

脆弱拟杆菌肠毒素致病机制研究进展

脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis ）作为一种革兰氏染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染,有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌,分产肠毒素型和非产肠毒素型。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分,主要存于结肠中。此外,呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。脆弱拟杆菌作为一种条件致病菌,当宿主粘膜受损时,可侵犯粘膜下层,引起感染,也可经血液流动,引起身体其它器官如肠道、腹腔、肝、肺、脑组织化脓性感染并伴发脓肿和引起急慢性腹泻等。此外,其对结肠、直肠癌的发生也有促进作用。     

创伤弧菌溶细胞素基因重组蛋白复性条件的优化及溶血活性鉴定

目的:对由大肠杆菌表达系统表达的创伤弧菌溶细胞素蛋白包涵体的复性条件进行优化并对其溶血活性进行评价.方法:表达、提取并纯化重组蛋白,并对其包涵体利用PBS透析复性、16种不同复性液透析复性和柱上复性方法进行复性比较,复性蛋白用溶血试验验证其活性.结果:利用三种蛋白复性方法,重组蛋白均不同程度得到复性,其中复性液中盐酸胍、助溶剂及盐离子作用显著.柱上复性效果明显,其复性率高达98%.利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2 μg/HU.结论:成功对重组蛋白包涵体复性条件进行优化,并对复性后蛋白质的溶血活性进行鉴定,为今后的免疫学活性和变性蛋白质复性研究奠定了基础.     

抗重组蛋白rVVC多克隆抗体的制备及其保护作用的鉴定

目的：纯化rVVC免疫家免，制备并纯化多克隆抗体。观察复性rVVC、纯化多克隆抗体、rVVC和纯化多克隆抗体混合作用肝癌细胞SMMC7721后，肝癌细胞SMMC7721形态学和活性变化，评估抗重组rVVC蛋白多克隆抗体对肝癌细胞SMMC772的保护作用。方法：纯化重组蛋白rVVC免疫日本大耳免获得多克隆抗体，多克隆抗体经过硫酸铵盐析、Sephadex G25除盐和DEAE-SephadexG100层析纯化并进行Westerm Blot鉴定和抗体效价分析。复性rVVC、纯化多克隆抗体、rVVC和纯化多克隆抗体混合物作用肝癌细胞SMMC7721后，显微镜观察并以MTT法确定抗重组rVVC蛋白多克隆抗体对肝癌细胞SMMC7721的保护作用。结果：兔抗重组rVVC多克隆抗体经盐析法、分子筛和阴离子交换层析法纯化后，得到较纯的IgG分子。免疫印迹结果显示，抗重组rVVC蛋白多克隆抗体与纯化抗原呈现特异性反应条带。显微镜观察和MTT结果表明，纯化多克隆抗体能够阻断重组rVVC活性蛋白对肝癌细胞SMMC772的损伤。结论：成功制备了具有保护和阻断作用的免抗重组rVVC多克隆抗体，为以后rVVC促炎症、促应激作用机制和信号传导机制研究提供一个重要的阻断剂。     

专业学生乙肝感染状况及乙肝疫苗接种免疫效果观察

目的 :了解医学检验专业学生乙型肝炎病毒 (HBV)感染状况及接种酵母重组基因工程乙肝疫苗 (乙肝疫苗 )的免疫效果。方法 :对 115名医学检验专业学生进行乙肝血清标志物 (HBVM)检测 ,对 2 7名易感者接种乙肝疫苗并追踪免疫效果。结果 :对 HBV有免疫力的有 6 3人 (5 4.78% ) ,感染 19人 (16 .5 2 % ) ;易感者 33人 (2 8.70 % )。对 2 7名易感者全程接种乙肝疫苗后 ,发现乙肝表面抗体 (抗 - HBs)阳转率为 88.89% (2 4/ 2 7) ,2年后抗 - HBs阳性维持率 91.6 7%(2 2 / 2 7)。结论 :医学检验专业学生有乙肝病毒易感者 ,接种乙肝疫苗具有较好的免疫学效果。     

激光扫描共聚焦显微镜技术在医学院校创新型实验教学中的应用

针对大型仪器技术支撑实验教学的要求，开展创新型实践教学，通过优化激光扫描共聚焦显微镜技术的实验教学内容和方法，改变实验教学模式，推动大型仪器设备的共享应用。此技术在医学院校人才培养方式中的应用提高了实验教学改革的整体水平，加强了学生的科技创新能力培养。     

转化检验医学教育的思考与实践

人类基因组计划将生命科学的研究推到组学时代,各种组学技术使现代临床医学朝转化医学方向发展,这些新技术和新理念被引入检验医学领域,为转化检验医学的发展提供了广大的空间,以此为契机,文章重点围绕转化检验医学教育的课程改革和设置等各方面进行了的思考与实践.     

鼻疽诺卡菌Nfa34810蛋白的抗原表位筛选与鉴定

目的制备鼻疽诺卡菌IFM10152的Nfa34810蛋白的单克隆抗体并进行B细胞抗原表位的筛选与鉴定。方法首先将Nfa34810蛋白截成相互重叠20个氨基酸的P1和P2,使用重组Nfa34810蛋白兔多抗血清与鼻疽诺卡菌IFM10152的鼠多抗血清,通过Western Blot方法检测P1和P2,初步定位抗原表位,对初步确定表位所在片段的P2进行纯化,并使用纯化的P2和Nfa34810蛋白分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。 采用Western Blot方法鉴定获得的单克隆抗体,应用肽扫描法进一步用单克隆抗体对逐步截短表达的短肽进行筛选,从而确定Nfa34810蛋白的B细胞抗原表位。结果成功制备了5株针对Nfa34810完整蛋白和4株针对P2的单克隆抗体,抗体能与P2和重组Nfa34810蛋白发生特异性抗原抗体反应。 通过肽扫描法成功筛选到1个抗原表位和2个抗原表位区域。结论本研究成功制备了Nfa34810蛋白的单克隆抗体,并对抗原表位进行定位,为开展鼻疽诺卡菌病原学检测、流行病学研究等奠定基础。     

趋化因子RANTES在RSV感染中的表达及作用

呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿急性下呼吸道感染最常见的病原体，可引起毛细支气管炎、肺炎等严重疾病。RSV引起的严重下呼吸道感染时气道有大量的炎性细胞募集，其机制可能与CC趋化因子RANTES的释放有关。RSV感染可募集和激活多种细胞，包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞，同时也激活气道上皮细胞、平滑肌细胞及肺泡巨噬细胞，通过核因子-κB的活化引起RANTES mRNA和蛋白水平升高。RANTES水平升高进一步引起炎性细胞趋化、募集到气道黏膜而加重炎症，可能是导致RSV感染后气道高反应性和哮喘发生的重要因素。     

高脂饮食对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肠肝免疫及肠道菌群的影响

目的研究高脂饮食对遗传易感小鼠肠肝免疫及肠道菌群的影响。方法高脂或正常饮食喂饲野生型(WT)小鼠和肝脏特异性PTEN基因缺失（PtenCKO）小鼠10周,构建非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型。获取不同小鼠肝脏组织进行组织病理染色,采用荧光定量PCR法检测紧密连接蛋白基因Claudin-1、ZO-1的表达量,采用ELISA法检测血浆D-乳酸（D-LA）的浓度,采用流式细胞术检测调节性T细胞（Tregs）并分析其比例,采用16SrDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群组成及结构。结果高脂饮食下,PtenCKO小鼠肝脏呈典型的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）病理表现,肝细胞脂肪变性、小叶内炎症及肝细胞气球样变;回肠绒毛损伤并伴有炎症细胞浸润,紧密连接蛋白Claudin-1下调,ZO-1异常上调,肠黏膜屏障功能指标D-LA上调。肝脏、肠系膜淋巴结Tregs比例均上调;肠道菌群丰富度及多样性降低,肠道致病菌和条件致病菌丰度增加,肠道有益菌丰度减少,总体表现为肠道菌群失调;相同饮食组的小鼠肠道菌群构成较为相似。结论高脂饮食加重PtenCKO小鼠的肝脏损伤,引起肠道屏障受损、肠道菌群失调和免疫细胞Tregs比例失衡,加剧遗传易感小鼠肝脏炎症反应,加快NASH病程进展。