ELP-SOD融合蛋白的纯化及其脂质体制备

目的:通过重组E.coli细胞表达类弹性蛋白多肽-超氧化物歧化酶(elastin-like polypeptides-superoxide dismutase, ELP-SOD)融合蛋白,利用ELP蛋白有温度敏感的相变特性,经过三轮可逆相变循环(ITC)获得高活性的纯化ELP-SOD酶。结合脂质体包裹技术制备具有较长半衰期和酶活性的ELP-SOD脂质体,为重组人源SOD在医疗、保健、化妆品等领域的应用奠定基础。方法:利用SDS-PAGE及Tanon3500凝胶成像系统、Image studio软件对ELP-SOD进行纯度检测;采用改良的邻苯三酚自氧化法(325 nm法)测定SOD融合蛋白的酶活性;调节不同的pH值及温度梯度测定融合蛋白的pH稳定性及热稳定性;添加Cu²⁺/Zn²⁺提高ELP-SOD酶活性;以大鼠血浆进行模拟体内半衰期实验;用不同浓度ELP-SOD的培养基分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和小鼠成纤维细胞(L929细胞)孵育来验证细胞毒性;薄膜水化法制备ELP-SOD脂质体并测定其包封率;制备小鼠离体皮肤,采用TP-6透皮扩散...     

结合珠蛋白在鳞癌诊断中的应用初探

目的 分析鳞癌患者、非鳞癌患者和健康人血清中结合珠蛋白( Haptoglobin,Hp)含量的差异,探讨结合珠蛋白在鳞癌诊断中的应用价值,为筛选鳞癌血清分子学标志物提供依据.方法 收集52例鳞癌患者、48例非鳞癌患者和30例健康人血清为样本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白免疫印迹检测血清中结合珠蛋白含量.通过SPSS V10.1软件分析血清结合珠蛋白含量的差异.结果 鳞癌患者血清Hp平均含量为300.58 ng/ml,明显高于非鳞癌患者血清Hp含量233.40 ng/ml(t=6.25,P＜0.01)和健康人血清Hp含量182.41 ng/ml(t=18.9,P＜0.01).鳞癌患者血清Hp含量随疾病的发展呈现增高趋势,直线相关分析显示Hp与癌症分期呈正相关(r=0.49,P＜0.01).但四种类型的鳞癌(肺鳞癌、鼻咽鳞癌、宫颈鳞癌、食管鳞癌)之间相比,血清Hp含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血清结合珠蛋白检测对鳞癌的诊断及鉴别诊断具有一定的临床意义.     

黄连素抑制肾腺癌细胞增殖及其分子机制

目的:观察黄连素对人肾癌细胞ACHN增殖的影响,并探讨其分子机制。方法:用MTT法检测黄连素处理后肾腺癌细胞增殖的变化,RIPA蛋白裂解液裂解肾腺癌细胞后提取总蛋白,BCA比色法测定蛋白浓度,将蛋白煮沸5min使其变性,取等量蛋白进行Western blot分析。结果:10μmol/L和20μmol/L黄连素显著抑制肾腺癌细胞ACHN的增殖。Western blot结果显示,黄连素处理后的肾腺癌细胞c-Fos表达量明显下调。但Western blot结果未见明显的剪切后的caspase 3,说明黄连素并不诱导肾腺癌细胞的凋亡。结论:本研究初步说明,黄连素通过下调c-Fos的表达抑制肾腺癌细胞ACHN的增殖。     

AnnexinA1在口腔颊癌中的表达及其意义

目的探讨膜联蛋白A1（AnnexinA1）在口腔颊黏膜鳞癌中的表达及其在颊癌发生、发展中的意义。方法应用免疫组织化学法（S-P法）检测AnnexinA1在46例口腔颊癌以及相应癌旁组织、10例正常颊黏膜组织中的表达。结果与正常组织相比，颊癌组织膜联蛋白A1的表达水平明显下调，且膜联蛋白A1的缺失程度与临床病理分期相关。结论膜联蛋白A1的表达与颊癌的发生发展密切相关，其表达有望成为临床判断颊癌发生的一个重要指标。     

人肝细胞生长因子基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的: 构建含人肝细胞生长因子(hHGF)基因的骨髓间充质干细胞(MSCs),获得高表达hHGF的MSCs.方法: 构建含hHGF基因的腺病毒表达载体pDC316-HGF-IRES-EGFP.同源重组法获得含hHGF的重组腺病毒Ad-HGF.以仅表达GFP基因的重组腺病毒Ad-GFP为对照,体外分别以Ad-GFP, Ad-HGF感染MSCs.荧光激活细胞分选术检测受染细胞的基因表达效率.酶联免疫吸附测定法检测转导细胞培养上清中hHGF表达的浓度和持续时间.结果: 腺病毒表达载体经限制性内切酶切后有2.2 kb的hHGF目的基因片段和5.2 kb的线性化载体片段;目的片段测序结果与基因库中hHGF cDNA序列一致.病毒液Ad-HGF纯化后滴度可以达到8.02×1010 pfu/ml.FACS检测HGF/MSCs的GFP阳性率达95.19%.HGF/MSCs细胞培养上清中hHGF能持续表达至少14 d;最高浓度达到99 ng/ml.结论: 本实验中腺病毒表达载体构建正确;重组腺病毒液Ad-HGF滴度高;转导后在MSCs中获得高效、稳定和持续表达的hHGF.该载体达到实验设计要求,为进一步的体内外研究提供了实验依据.     

腹腔镜检查治疗宫外孕术后护理评价

2004年1日-2004年12月我院确诊宫外孕未破裂者24例,采用了腹腔镜检查治疗,对其术后出现的常见护理问题及术后康复情况、进食时间、术后肛门排气时间、留置尿管时间、并发症等及术后拆线时间、住院天数与同期同类病人采用开腹手术进行对照,现将结果报告如下.     

血清中α-L-岩藻糖苷酶及5’-核苷酸酶的联合检测对诊断肝癌的意义

同时检测肝癌患者血清中的α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和5’-核苷酸酶(5’-NT),以探讨这两项指标对原发性肝癌的诊断价值及联合检测的临床意义。在日立7170全自动生化分析仪上测定30例正常人及57例原发性肝癌(PHC)患者的血清AFU和5’-NT,PHC组的AFU和5’-NT结果比正常对照组极显著升高(P<0.01),x2检验做AFU、5’-NT、AFU+5’-NT 3组百分率差异显著性检验,P<0.01,且AFU和5’-NT结果不相关。因此联合检测AFU和5’-NT可提高对PHC的诊断率。     

吸烟对外周血单个核细胞表达烟碱乙酰胆碱受体的影响

目的研究健康男性外周血单个核细胞（PBMCs）烟碱型乙酰胆碱受体（nAchR）亚型的表达情况及吸烟对其表达量的影响。方法抽取92例健康男性吸烟者和36例不吸烟者的外周静脉血，通过半定量RT-PCR对其nAchR11种亚基（α2～α7、α9、α10、β2～β4）mRNA在PBMCs的中表达情况进行分析。结果11种nAchR亚基只有α2、α5、α6、α7四种亚基mRNA在吸烟者和不吸烟者PBMCs中有表达，吸烟者α5、α7亚基mRNA的表达量比不吸烟者低（均P〈0.01），而两者α2亚基mRNA的表达无显著性差异（P〉0．05）。结论烟碱与外周血免疫细胞上nAchR的相互作用可能是吸烟导致机体免疫系统功能改变的因素之一。     

血清中一氧化氮合酶在肠癌和食管癌及肺癌中的检测及意义

一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一种新型的生物细胞信使分子和效应因子，参与机体的许多重要生理过程。研究发现NO与肿瘤的发生发展也有密切的关系。而NO是由一氧化氮合酶(NOS)以L—精氨酸为底物在NADPH存在下生成，本研究通过对肠癌、食管癌和肺癌患者与正常人血清中NOS的测定，探讨NOS含量与这几种肿瘤之间的关系。     

甲亢伴心源性肝硬化腹水1例

正患者周某,男,52岁,患甲状腺功能亢进(简称甲亢)、心房纤颤20余年,曾间断服用"他巴唑、抗心律失常"药物治疗,2007年首次无明显诱因下出现全腹胀,外院住院检查发现肝硬化,腹腔积液、脾大,予以利尿、腹腔穿刺放腹水等处理,腹水消退。但后期反复多次出现腹腔积液,利尿等对症支持处理后,腹水可消退。由于反复多次出现腹水,腹胀难受,于2015