人canstatin基因的克隆及其真核载体的构建

[目的]克隆人canstatin基因,构建并鉴定其真核表达载体pSecTag2/canstatin.[方法]采用RT-PCR方法从中国人胎盘脐带组织中扩增canstatin cDNA,T-A克隆到pUCm-T载体中,酶切后将人canstatin cDNA亚克隆入pSecTag2,构建真核表达载体pSecTag2/canstatin,重组质粒经限制性内切酶鉴定并进行测序分析.[结果]人canstatin基因片断正确插入载体,与Genebank中报道的序列一致.[结论]pSecTag2/canstatin真核载体的构建为进一步进行canstatin蛋白表达、活性鉴定和作用机制研究以及canstatin用于基因治疗奠定了基础.     

LMP1经TRADD促进鼻咽癌SP18细胞增殖

目的:探讨潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基末端活化区2(CTAR2)的肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TRADD)在鼻咽癌SP18细胞增殖中的作用及机制。方法:首先建立表达LMP1及CTAR2突变型LMP1(LMP1~(TRADD))的SP18细胞系。其次采用细胞生长曲线、平皿集落形成实验、软琼脂集落实验和流式细胞术观察LMP1~(TRADD)对SP18细胞增殖的影响。然后选用基因芯片检测SP18-LMP1和SP18-LMP1~(TRADD)细胞间的差异表达基因。结果:细胞生长曲线、软琼脂集落和平皿集落形成实验结果均显示,SP18-LMP1细胞生长与集落形成能力均较SP18-LMP1~(TRADD)细胞强(P0.01)。流式细胞术检测结果显示,SP18-LMP1细胞的增殖指数较SP18-LMP1~(TRADD)细胞高(P0.01)。筛选出63个增殖相关基因,其中SP18-LMP1~(TRADD)细胞中上调的基因33个,下调的基因30个。结论:TRADD活性区是LMP1促进SP18细胞增殖的重要功能活性位点。LMP1可能通过TRADD提高细胞增殖指数,诱导SP18细胞增殖。     

α1-抗胰蛋白酶的检测方法浅析

α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)与肺气肿等多种疾病密切相关,其血清水平的升高或降低直接影响疾病的发生发展.近年来,对α1-AT分子结构、基因型、检测方法等各方面的研究都取得了很大进展,此文对其检测方法做一综述,为更好地检测α1-AT的血清水平提供理论支持.     

EGCG对肺癌A549/DDP细胞药物敏感性的影响及机制

目的探讨EGCG对肺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂敏感性的影响及作用机制。方法MTT法检测EGCG对A549/DDP细胞药物敏感性的影响。AO/EB染色法检测EGCG联合顺铂处理A549/DDP细胞前后凋亡的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot方法观察EGCG作用前后耐药蛋白GST-π、Survivin表达的变化。结果MTT比色法显示20、40、60μg/mL EGCG均可增加细胞对顺铂的敏感性;荧光显微镜下观察到EGCG处理后细胞体积缩小,核固缩,呈典型的凋亡形态学改变;Western Blot方法检测发现,不同浓度的EGCG处理细胞24 h后GST-π、Survivin蛋白表达均下调。流式细胞术显示,20、40、60μg/mL EGCG联合顺铂处理细胞24 h后,凋亡率逐渐增加,说明EGCG联合顺铂能够促进肺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。结论EGCG能够增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低GST-π、Survivin蛋白表达从而诱导细胞凋亡有关。     

白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果:ChR40μmol/L、rhsTRAIL 100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%。ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。     

白杨素增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用。方法:体外培养SGC-7901细胞。MTT比色法测定细胞毒性。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。结果:ChR、rhsTRAIL以及两者合用对SGC-7901细胞活性的半数抑制浓度(IC50值)分别为134μmol/L、402ng/mL和47ng/mL,合并用药效应的CI值是0.4676。ChR40μmol/L、rhsTRAIL100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.65%±0.58%、3.60%±0.16%和49.87%±4.27%。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用。     

LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响

背景:课题组前期构建了CTAR3缺失突变型LMP1(LMP1△232-351)表达载体,初步了解该活性区在LMP1发挥作用中扮演十分重要的角色。目的:观察LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响。方法:采用逆病毒感染方式,建立稳定表达LMP1及CTAR3缺失突变型LMP1(LMP1△232-351)的鼻咽癌干细胞SP18细胞系,通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察LMP1△232-351对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响,然后选用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞增殖指数。另外,利用Western-blot检测细胞中JAK3蛋白的磷酸化水平。结果与结论:①与SP18-LMP1细胞比较,SP18-LMP1△232-351细胞生长速度减慢,增殖指数降低(P<0.01)。②在SP18-LMP1△232-351细胞中JAK3的磷酸化水平低于SP18-LMP1细胞。结果说明LMP1-CTAR3可能通过影响SP18细胞中JAK3的磷酸化,下调细胞的增殖指数,降低促细胞增殖的能力。     

二甲基氨基偶氮苯诱发大鼠实验性肝癌的癌前期病理研究

本文采用二甲基氨基偶氮苯(DAB)以研究诱发大鼠实验性肝癌过程中的癌前期病变。动物分别于连续给药的第6周及停药后的第11周处死。通过光镜、电镜观察肝脏病变,同时应用免疫组织化学和组织化学方法研究了肝细胞胚胎性抗原(AFP)以及琥珀酸脱氢酶(SDH)、5′—核苷酸酶(5′—NH)和γ—谷氨酰转肽酶(γ—GT)的改变。结果表明:停用致癌剂后,致癌剂对肝脏的非特异性毒性作用可以解除,表现为肝细胞变性坏死和SDH、5′—NT活性的恢复;但由卵圆细胞转化而来的增生肝细胞结节却具有癌前期病变的特征,表现为肝细胞异型、γ—GT和AFP阳性。     

外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响

目的 探讨外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响。方法 细胞划痕法检测外源性p16基因导入对人肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响；免疫细胞化学法分析外源性p16基因导入对VEGF表达的影响；Western blotting法分析外源性p16基因导入对nm23表达的影响。结果 外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组细胞迁移能力较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞明显下降。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组VEGF表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞减弱。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组nm23表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞增强。结论 外源性p16基因导入能降低人肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移能力。     

组织细胞肉瘤L-Ⅱ高侵袭转移瘤株的筛选及鉴定

目的取小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ的肺转移灶细胞体内连续传代，筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株。方法L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下，取其肺转移灶接种另一小鼠体内，再取其肺转移灶传代，如此数代后，建立L-Ⅱ肺高转移模型。检测：形态学，免疫组化，核型分析，流式细胞分析，肿瘤生长曲线，小鼠荷瘤生存时间，肺转移率。结果目前传至第7代，第1、第7代形态学上比较，光镜下无明显差别，染色体均为亚四倍体核型，众数66～70条。细胞周期1／7：G1期：70．1／50．8，S期：15．9／27．7，G期：14．0／21．6。DNA倍体为亚四倍体。平均荷瘤生存时间为22／16．33天，P〈0．01。免疫组化nm23第1代表达弱阳性，第7代未见表达。肺转移率：1／7为25％（3／12）／66．7％（8／12），P=0．099。结论筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株，为肿瘤的侵袭和转移的研究提供了理想的实验模型。