柱前衍生化RP-HPLC测定铁皮石斛中的氨基酸的含量

目的:测定不同产地的铁皮石斛样品中氨基酸的含量。方法:样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,与铁皮石斛中氨基酸柱前衍生,采用高效液相色谱法测定其含量,采用CAPCELL PAK C18SG300色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相[0.05 mol·L-1乙酸钠缓冲液(以乙酸调p H 6.5)-乙腈(1∶1)](A)-[0.05 mol·L-1乙酸钠缓冲液(以乙酸调p H6.5)](B)梯度洗脱,柱温25℃,流速0.6 m L·min-1,检测波长254 nm。结果:游离氨基酸和总的氨基酸的回收率范围分别为92.48%~97.30%和90.95%~95.63%,RSD都小于3.0%,9个不同产地的样品游离氨基酸的含量范围在0.210 5%~0.571 2%,总的氨基酸含量范围在3.670 8%~6.890 4%,必需氨基酸占总的游离氨基酸的比例为0.094 4%~0.186 0%;必需氨基酸占总的氨基酸的比例范围为0.338 5%~0.374 1%。结论:该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于铁皮石斛中氨基酸的检测,不同产地的铁皮石斛样品其氨基酸的含量存在差异,必需氨基酸的比例也存在差异     

盐酸13-己基小檗碱对T淋巴细胞活化和角质形成细胞细胞因子产生的影响

目的研究盐酸13-己基小檗碱对T淋巴细胞活化、角质形成细胞增殖、以及白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)产生的影响,探索该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点。方法体外培养小鼠脾脏T淋巴细胞、永生化角质形成细胞株HaCaT细胞以及小鼠腹腔巨噬细胞,分别用伴刀豆球蛋白A(ConA)、重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)、312nm窄波UVB和脂多糖(LPS)诱导,采用MTT法检测盐酸13-己基小檗碱对小鼠T淋巴细胞活化和HaCaT细胞增殖的影响,用ELISA法检测其对HaCaT细胞IL-8和TNF-α,以及小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β产生的影响。结果盐酸13-己基小檗碱明显抑制小鼠T淋巴细胞活化(IC50≈0.123μg/ml);在0.05～0.78μg/ml范围对HaCaT细胞增殖无明显的直接影响(抑制率<15%),能剂量依赖性抑制25ng/ml rhTNF-α诱导的HaCaT细胞IL-8产生(IC50=0.13μg/ml)和124.2 mJ/cm2窄波UVB照射引起的HaCaT细胞TNF-α产生(IC50=0.21μg/ml);在0.01μg/ml浓度时抑制10μg/ml LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β产生(抑制率达50%)。结论盐酸13-己基小檗碱能抑制T淋巴细胞活化及炎症性细胞因子IL-8、TNF-α和IL-1β产生,提示以上作用可能是该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点。     

局部外用酞丁安软膏后皮内浓度测定

目的测定试验动物皮肤给药后的皮内药物浓度,观察受试制剂的经皮渗透及进入皮肤的药物水平。方法试验乳猪局部外用酞丁胺软膏后,采用匀浆法结合高效液相色谱测定皮内药物浓度。结果酞丁安软膏外用于皮肤后,有一定量的经皮吸收和渗透,但是吸收量相对较低。结论本试验结果可为酞丁安人体皮肤药代动力学研究提供参考。     

丙酸氯倍他索和维甲酸联合应用对小鼠淋巴细胞、人角质形成细胞增殖及其I型转谷氨酰胺酶mRNA表达的影响

目的 :　研究丙酸氯倍他索 (CP)和全反式维甲酸 (RA)联合应用 (CP RA)对小鼠淋巴细胞增殖及人角质形成细胞 (KC)增殖和I型转谷氨酰胺酶 (TGase)mRNA表达的影响 ,以探讨两药合用对有关的抗银屑病药效有无相互影响。方法 :　体外培养条件下 ,3 H TdR掺入法和RT PCR技术。结果与结论 :　CP RA合用时RA不影响CP抑制小鼠淋巴细胞增殖的药效 ,CP也不影响RA下调人KCTGaseImRNA表达的作用 ,对人KC增殖抑制两药有协同作用。CP RA合用在发挥各自不同药效的同时 ,可减少各自的剂量 ,进而能减少两药各自的副作用。