不同培养体系培养人脐血源基质细胞的探索性研究

目的 探索不同培养体系对人脐血源基质细胞原代培养的影响，并观察人脐血源基质细胞的生物学特性。方法 取产科胎儿脐带血，采用经典和改良Dexter培养体系培养人脐血源基质细胞。倒置显微镜动态观察细胞生长情况，瑞氏染色观察细胞形态特征，采用细胞化学和免疫细胞化学进行鉴定。结果 改良Dexter培养体系在48 h细胞贴壁数、细胞开始伸展时间及原代培养时间明显优于经典Dexter培养体系。原代培养9-14天(平均12.1天)时贴壁细胞集落开始形成，15-21天(平均19.4天)时集落数量最多，培养28天贴壁细胞铺满培养皿底，细胞类型以成纤维样细胞、巨噬样细胞、“小圆”类细胞为主。细胞化学染色显示：非特异性酯酶染色法(NSE)显示阳性，阳性率100％；过氧化物酶染色法(POX)显示阴性；糖原染色(PAS)显示阳性，阳性率为100％；碱性磷酸酶(ALP)染色显示部分阳性，阳性率26％。免疫细胞化学染色显示：CD31显示阳性率为96％，CD68显示阳性率为95％，CD45阴性，Fn显示阳性率94％。结论 改良Dexter培养体系是一种理想人脐血源基质细胞培养体系，人脐血源基质细胞在体外的成功培养为从一新的角度进一步研究其在临床的早日应用提供理论基础。     

外周血干细胞移植患者骨髓基质细胞形态学改变的观察

目的：进一步探讨外周血干细胞移植后患者骨髓造血微环境损伤的机理。方法：采用光镜、扫描电镜和透射电镜观察外周血干细胞移植患者在单纯化疗或放化疗结合预处理前后骨髓基质细胞的形态变化。结果：①光镜和扫描电镜：与预处理前骨髓基质细胞相比，单化组和放化组出现不同特征的形态学变化；②透射电镜观察：放化组骨髓基质细胞的内质网扩张，线粒体基质变淡，嵴消失；单化组基质细胞的线粒体重度退行性变，结构紊乱。结论：外周血干细胞移植患者经单化或放化预处理后骨髓基质细胞形态的改变可能是导致造血微环境损伤的重要原因之一。     

大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗急性白血病的临床观察

目的观察大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗急性白血病的临床疗效。方法自2001年3月~2009年12月对第三军医大学新桥医院69名急性白血病患者进行大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、白介素-2(IL-2)生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗,其中,急性淋巴细胞白血病(ALL)40例,急性髓细胞白血病(AML)29例,观察临床疗效和并发症。结果除1例ALL外,68名患者移植后造血功能均快速重建。急性淋巴细胞白血病首次完全缓解(ALL-CR1)25例,其中无病存活17例,带病存活2例,死亡6例,急性淋巴细胞白血病再次完全缓解(ALL-CR2)15例,其中无病存活3例,带病存活3例,死亡9例;急性髓细胞白血病首次完全缓解(AML-CR1)17,其中无病存活10例,带病存活2例,死亡5例,急性髓细胞白血病再次完全缓解(AML-CR2)12例,其中无病存活5例,带病存活1例,死亡6例。结论该序贯疗法治疗急性白血病安全有效,CR1患者较CR2患者疗效更好。     

造血干细胞移植后出血性膀胱炎的临床研究

目的探讨造血干细胞移植术后,出血性膀胱炎发生的相关因素、治疗措施和预后。方法回顾性分析该科2001年6月至2010年9月385例接受造血干细胞移植术治疗患者出血性膀胱炎的发生、治疗和预后情况。结果 385例患者中有19例发生出血性膀胱炎,发病率4.9%,中位发病时间28 d(6~68 d),中位病程26 d(19~41 d)。其中因出血性膀胱炎死亡1例,其余患者通过碱化、水化、留置尿管冲洗膀胱、抗GVHD、抗病毒等治疗后痊愈。多因素分析提示,清髓性预处理、巨细胞病毒感染是移植后出血性膀胱炎发生的相关因素。结论出血性膀胱炎的发生与多因素相关,给予巯乙磺酸钠、还原型谷胱甘肽及碱化、水化、冲洗膀胱等措施对出血性膀胱炎有良好的防治作用。     

硼替佐米联合地塞米松和沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的临床研究

目的 观察硼替佐米联合地塞米松和沙利度胺(VTD)方案对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者的临床疗效.方法 收集2008年4月至2012年2月于本院接受VTD方案治疗的58例MM患者临床资料,并以同期30例传统长春新碱+蒽环类+地塞米松+沙利度胺(VADT)方案化疗的MM患者作为对照,分析病情转归及不良反应.患者均完成2个及以上疗程治疗.结果 随访6个月至2年的MM患者:①VTD用于初治和复发和(或)难治MM患者的总有效率显著高于VADT组(63.8％vs 40.0％,P＜0.05).VTD方案中初治患者治疗总有效率显著高于复发和(或)难治患者(77.8％ vs 40.9％,P＜0.05);VTD组治疗初治MM的有效率也明显高于VADT组(36.0％),差异有统计学意义(P＜0.05).VTD治疗复发和(或)难治MM的有效率与VADT组(60.0％)无差异(P＞0.05).VTD组内轻链型、非轻链型MM患者疗效无显著统计学差异(P＞0.05).②VTD治疗不良反应主要有消化道症状、感染、周围神经病变及血小板减少.结论 硼替佐米联合地塞米松和沙利度胺治疗MM缓解率高,副作用少且一般较轻微,可首选用于治疗初治及复发和(或)难治MM患者.     

异基因造血干细胞移植治疗年轻慢性淋巴细胞白血病患者3例

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)的安全性和有效性.方法 总结分析3例行HLA全相合allo-HSCT治疗的年轻CLL患者的临床特征、实验室检查指标、移植经过及转归,并进行相关文献复习和讨论.结果 3例患者年龄均在50岁以下,Rai分期属于高危组,给予allo-HSCT治疗,白细胞植活中位时间为12(11～13)d,血小板植活中位时间为13(12～14)d.移植后出现慢性局限皮肤型移植物抗宿主病(GVHD)1例.随访至2012年4月,平均随访时间25(10 ～53)个月,3例均无病生存.结论 allo-HSCT是CLL唯一具有治愈可能的手段,有合适供者的年轻高危CLL患者可考虑行造血干细胞移植.     

探讨非霍奇金淋巴瘤骨髓实验诊断体系的临床应用价值

目的：探讨联合多种检测技术的骨髓实验诊断体系诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润的价值。方法以骨髓涂片检查、切片检查、流式细胞术、荧光原位杂交技术和染色体核型分析技术为基础,建立骨髓实验诊断体系。体系内容包括实验流程和诊断结果评价体系。实验流程的检验顺序为：（1）骨髓涂片、骨髓切片;（2）FCM分析和染色体培养分析;（3）FISH探针检测。诊断结果评价体系以骨髓涂片（BMA）和病理切片（BMB）作为定性诊断指标,特异性的FCM或免疫组织化学（IHC）的免疫表型和FISH探针的基因表型作为分型依据。CAA结果作为诊断及预后判断指标。各项检测技术的实验操作按常规进行。结果总例数为115例,BMA和BMB完成检查各115例,FCM完成74例,FISH 85例,CAA 23例。各单项检出阳性率分别为BMA 72.17%,BMB 89.96%,FCM 90.54%,FISH 54.12%。实验诊断体系综合分析检出率为100%。单项比较,BMB和FCM的阳性检出率明显高于BMA和FISH,差异显著。将75例淋巴结病理确诊为NHL患者的诊断结论在定性、免疫分型和病理分型3个层面上,做骨髓实验诊断结果与淋巴结病理诊断结果的对比分析,其吻合率分别为98.67%,91.94%,72.00%,说明骨髓诊断NHL在较精准的病理分型水平上还有差距。结论骨髓实验诊断的各单项技术对NHL-BMI的诊断有其临床价值,也有不足和局限。骨髓涂片和骨髓切片检查是基本方法,可以做出定性诊断。进一步做 FCM 或 IHC 可以明确免疫分型,配合FISH及CAA可以得到精细的病理分型诊断。多技术联合应用的实验诊断体系是诊断NHL的有效方法,可以提高NHL-BMI的诊断正确性和阳性率。     

预判急性白血病患者Auto—PBSCT动员、采集效果影响因素的临床研究

目的：探讨急性白血病患者外周血干细胞动员、采集的效率及影响因素。方法对37例急性白血病患者经化疗＋生长因子动员,动员第5～10天,当外周血WBC＞5×109/L,CD34＋＞20个/μl时,使用CS-3000 Plus血细胞分离机（Baxter公司）进行外周血干细胞采集;采集前外周血WBC分类单个核细胞（MNC,包括幼稚细胞、淋巴细胞及单核细胞）,计算MNC%×WBC计数＞（4～6）×109/L预计需要采集循环血容量。分析不同化疗动员时机、疾病、年龄、性别的动员采集,并对采集前外周血进行白细胞计数、分类以及干细胞采集物进行WBC计数、分类和CD34＋检测。结果所有患者均成功动员和采集到了外周血干细胞（MNC＞6×108/kg,CD34＋＞2×106/kg）,并成功造血重建。急性髓细胞白血病患者采集所获得的 MNC 与急性淋巴细胞白血病患者采集获得无明显差异;但急性淋巴细胞白血病患者采集获得CD34＋细胞明显较多（P＝0.015）;动员时机的化疗病程与采集物的CD34＋细胞呈负相关,动员时机≤3个疗程与≥6个疗程比较,前者CD34＋细胞明显较好,具有统计学差异（P＝0.028）;外周血MNC数值与采集物MNC及CD34＋细胞具有相关性（r＝0.600,P＝0.00;r＝0.510,P＝0.001）。结论根据不同的疾病、性别、年龄,采用不同的动员采集方案,一般可以成功采集。外周血 MNC 数值对采集物中 CD34＋细胞的总量具有一定预测意义。